在分子生物學(xué)研究領(lǐng)域，核酸片段的精準(zhǔn)連接是基因克隆、文庫構(gòu)建、突變分析等核心實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。然而，實(shí)驗(yàn)人員在操作過程中常面臨連接效率低下、非特異性連接頻發(fā)、底物適應(yīng)性受限及反應(yīng)條件兼容性欠佳等難題，這些問題直接制約著實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性與整體效率。由于不同類型的連接酶在結(jié)構(gòu)與功能上具有獨(dú)特性，其在應(yīng)對上述問題時展現(xiàn)出不可替代的作用。本文將系統(tǒng)解析翌圣系列連接酶的獨(dú)特優(yōu)勢，并闡述其針對性的解決方案。

連接酶的核心功能在于催化核酸5'-磷酸與3'-羥基形成磷酸二酯鍵。然而，不同來源的連接酶因進(jìn)化過程中形成的適應(yīng)性差異，在底物類型、輔因子需求、反應(yīng)條件、催化特異性及適用場景等方面呈現(xiàn)出顯著差異：

連接酶的選擇是否精準(zhǔn)直接決定了核酸連接效率與實(shí)驗(yàn)成敗。了解不同連接酶的核心差異是科學(xué)選型的基礎(chǔ)，而真正讓實(shí)驗(yàn)從 “理論可行” 走向 “高效落地” 的，則是產(chǎn)品本身的性能表現(xiàn)決定。接下來，我們將聚焦翌圣部分核心連接酶產(chǎn)品，通過實(shí)測數(shù)據(jù)與應(yīng)用驗(yàn)證，展現(xiàn)連接酶在性能上的硬核實(shí)力。

使用翌圣生物和競品的T4 DNA Ligase進(jìn)行cfDNA樣本的NGS文庫構(gòu)建測試（連接Y型建庫接頭），通過Agilent 2100檢測雙端均連接接頭的片段比例。結(jié)果表明，翌圣生物的T4 DNA Ligase具有極高的連接活性，完美適配cfDNA樣本。

圖1. 翌圣Hieff Quick T4 DNA Ligase接頭連接檢測結(jié)果

使用翌圣及競品A*的Taq DNA ligase進(jìn)行無縫克隆，結(jié)果如圖2所示，翌圣Hieff Taq DNA ligase具有更高的陽性克隆率。

圖2. 翌圣及A* Taq DNA ligase無縫克隆電泳檢測結(jié)果

圖3中左圖為分別使用翌圣兩個批次酶Yeasen-1（橙）、Yeasen-2（灰） 和競品T（藍(lán)）進(jìn)行10 ng、100 ng 單鏈DNA起始量建庫純化后文庫產(chǎn)量。右圖為分別使用翌圣兩個批次酶Yeasen-1（橙）、Yeasen-2（灰） 和競品T（藍(lán)）進(jìn)行10 ng、100 ng Bisulfite DNA起始量建庫純化后的文庫產(chǎn)量。結(jié)果顯示，翌圣兩批次E.coli DNA ligase在單鏈DNA建庫及Bisulfite DNA建庫文庫產(chǎn)量更高，表現(xiàn)更優(yōu)異。

圖3. 翌圣及A* Taq DNA ligase無縫克隆電泳檢測結(jié)果

以100ng 170bp和300bp的模式片段為底物，使用Hieff 5' App T4 DNA ligase對合成的預(yù)腺苷化（App）接頭進(jìn)行接頭連接，結(jié)果顯示連接效率達(dá)95%以上，且片段自連占比極低。

圖4. 以170 bp（左圖）和300 bp（右圖）模式片段為底物連接效率檢測

在25℃條件下，分別添加0.5 U、10 U和25 U劑量的翌圣（Yeasen）與供應(yīng)商A*的PBCV DNA ligase（貨號#14962ES），反應(yīng)60分鐘以連接底物。瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，翌圣PBCV DNA ligase與供應(yīng)商A*的底物連接效果一致。

圖5. PBCV DNA ligase連接效果驗(yàn)證

將Yeasen和進(jìn)口Supplier A*的T4 RNA Ligase 1按照不同投入量加入體系中對21 nt的ssDNA (終濃度1 μM)和26 nt ssRNA(終濃度0.5 μM)底物進(jìn)行連接，結(jié)果顯示其能有效連接ssRNA與ssDNA底物，連接效果優(yōu)于進(jìn)口Supplier A*。

圖6. T4 RNA Ligase 1連接效果驗(yàn)證

將Yeasen和進(jìn)口Supplier N*的T4 RNA Ligase 2按照不同投入量加入體系中對dsRNA底物進(jìn)行連接，結(jié)果顯示其能有效連接dsRNA底物，連接效果與進(jìn)口Supplier N*相當(dāng)。

圖7. T4 RNA Ligase 2連接效果驗(yàn)證
注：20 μL反應(yīng)體系中包含終濃度為20 μM的dsRNA連接底物。

使用翌圣和來自進(jìn)口Supplier A*的T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ分別按照不同投入量加入體系中對31 nt的ssRNA底物（Substrate 1）和17 nt預(yù)腺苷化的ssRNA底物（Substrate 2）進(jìn)行連接實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，翌圣產(chǎn)品能高效連接ssRNA底物，連接效果與進(jìn)口產(chǎn)品不相上下。

圖8. T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ連接效果驗(yàn)證

核酸連接效率與特異性是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵因素，而連接酶的性能差異直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。我們精心打造的連接酶產(chǎn)品矩陣全面覆蓋DNA/RNA連接應(yīng)用場景：無論是常規(guī)分子克隆還是特殊結(jié)構(gòu)連接，從常溫反應(yīng)體系到高溫嚴(yán)苛條件，都能提供精準(zhǔn)匹配的解決方案。選擇性能優(yōu)化的連接酶，可顯著提升實(shí)驗(yàn)效率，減少非特異性干擾，為您的分子生物學(xué)研究提供強(qiáng)有力的技術(shù)保障。

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