隨著干細(xì)胞治療和基于類器官藥物開發(fā)的技術(shù)推進(jìn)，基質(zhì)膠作為干細(xì)胞培養(yǎng)和類器官、3D細(xì)胞培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)和支持載體，在其中發(fā)揮著舉足輕重的作用，其它應(yīng)用包括血管生成、體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)等?；|(zhì)膠是從富含胞外基質(zhì)蛋白EHS小鼠腫瘤中提取取的可溶性基底膜制備物，其主要成分由層粘連蛋白，Ⅳ型膠原，巢蛋白等組成，還包如TGF-β、EGF、IGF、FGF等多種生長(zhǎng)因子。在室溫條件下，基質(zhì)膠聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì)，能模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能，有利于體外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化。

翌圣生物開發(fā)生產(chǎn)的Ceturegel^®基質(zhì)膠不含LDEV（乳酸脫氫酶增高病毒），超低內(nèi)毒素含量，并全部經(jīng)過(guò)支原體檢測(cè)保證無(wú)支原體污染，包括基本濃度、高濃度、低生長(zhǎng)因子等不同類型。

安全性高：不含LDEV（乳酸脫氫酶增高病毒）

濃度多樣性：濃度范圍在8~20 mg/ml之間

批次穩(wěn)定性好：嚴(yán)格生產(chǎn)質(zhì)檢過(guò)程保證批次間性能穩(wěn)定

低內(nèi)毒素：內(nèi)毒素含量≤4 EU/ml

污染物檢測(cè)： 經(jīng)檢測(cè)無(wú)支原體和細(xì)菌、真菌殘留

單批產(chǎn)量高：?jiǎn)闻a(chǎn)量在L級(jí)別以上

兼容性好：可與任何類型的細(xì)胞培養(yǎng)基兼容

在Transwell上室加入稀釋后Ceturegel^®基質(zhì)膠，鋪上細(xì)胞并置于37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱內(nèi)孵育24h后，4%多聚甲醛中固定后用含0.1％的結(jié)晶紫染液染色，在倒置相差顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)細(xì)胞。 

圖1.細(xì)胞侵襲后經(jīng)結(jié)晶紫染色的結(jié)果

將Ceturegel^®基質(zhì)膠與調(diào)整好濃度的單細(xì)胞HepG2懸液1:1輕輕混勻，用預(yù)冷的移液槍頭按50μl上述混勻單細(xì)胞懸液加入預(yù)冷24孔板中，使其形成拱型細(xì)胞液滴，于37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每天觀察并拍照記錄。

圖2.3D細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果

表1：3D細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)膠使用參考

注：不同批次基質(zhì)膠有一定的濃度差異，推薦用量?jī)H供參考。

圖3.類器官操作流程
 

對(duì)于含酚紅的基質(zhì)膠主要原因是由于酚紅和碳酸氫鹽與CO₂作用引起的，但是與5％CO₂平衡后色差即會(huì)減少。凍融后，輕輕搖晃試劑瓶使基質(zhì)膠分散均勻。

所有操作需在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行，應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證基質(zhì)膠呈勻漿狀。

可將凍融后的Ceturegel^®Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠分裝在多個(gè)小管，所有分裝均需用預(yù)冷的凍存管，迅速冷凍并保存，避免多次凍融。所有涉及到使用的物品在使用前需預(yù)冷，使用預(yù)冷的移液管、吸頭及小管等操作基質(zhì)膠。

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