親和層析是重組蛋白純化中的“王牌技術(shù)”,憑借其高選擇性、高純度和溫和操作,成為實(shí)驗(yàn)室及工業(yè)級(jí)純化不可或缺的利器。無(wú)論是His標(biāo)簽蛋白、GST融合蛋白,還是抗體類大分子,親和層析都能實(shí)現(xiàn)快速、穩(wěn)定的目標(biāo)蛋白捕獲。
那么,親和層析實(shí)驗(yàn)到底如何開(kāi)展?需要哪些關(guān)鍵試劑?
?? 一套標(biāo)準(zhǔn)的His標(biāo)簽蛋白親和純化流程如下
?? 步驟一:蛋白表達(dá)與裂解
在大腸桿菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)目標(biāo)蛋白后,使用裂解緩沖液進(jìn)行細(xì)胞裂解。常搭配超聲或反復(fù)凍融,確保釋放蛋白質(zhì)。
?? 步驟二:親和結(jié)合
將裂解液加入Ni-NTA瓊脂糖柱(或磁珠、預(yù)裝柱),利用His標(biāo)簽與Ni2?之間的螯合作用,使目標(biāo)蛋白特異性結(jié)合。
??推薦試劑:UltraBio? His-tag Purification Resin、UltraBio? His標(biāo)簽蛋白純化瓊脂糖磁珠(TED-Ni)、Ni親和層析預(yù)裝柱(阿拉丁官網(wǎng)具有多規(guī)格可選)
?? 步驟三:洗脫雜蛋白
洗滌緩沖液中加入低濃度咪唑(10–30 mM),去除非特異性結(jié)合蛋白,同時(shí)保留目標(biāo)蛋白在柱上結(jié)合。
?? 步驟四:蛋白洗脫
使用高濃度咪唑(250–500 mM)洗脫目標(biāo)蛋白??纱钆鋚H調(diào)節(jié)及NaCl調(diào)控,提升純化效率與蛋白活性。
??推薦試劑:咪唑、Tris-HCl、NaCl、甘油、DTT
?? 步驟五:蛋白緩沖液置換 / 濃縮
經(jīng)親和洗脫后,目標(biāo)蛋白可通過(guò)透析、離心濃縮或柱層析進(jìn)行緩沖液更換,適應(yīng)后續(xù)結(jié)構(gòu)或功能實(shí)驗(yàn)。
?? 阿拉丁親和層析產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
? 完整親和純化體系
從親和填料(Ni-NTA介質(zhì)、磁珠、預(yù)裝柱)到高純緩沖液組分(咪唑、Tris-HCl、甘油等),全流程覆蓋,輕松實(shí)現(xiàn)純化標(biāo)準(zhǔn)化。
高純穩(wěn)定,適合多系統(tǒng)表達(dá)
阿拉丁試劑純度高、蛋白兼容性強(qiáng),適用于大腸桿菌、哺乳細(xì)胞、酵母等表達(dá)體系。
? 多規(guī)格靈活選擇
適配科研、藥物開(kāi)發(fā)與工藝優(yōu)化所需,提供小包裝到大包裝填料規(guī)格,以及緩沖液等。
從表達(dá)到洗脫,從實(shí)驗(yàn)室到產(chǎn)業(yè)級(jí),阿拉丁蛋白質(zhì)純化相關(guān)產(chǎn)品始終為您的分離之路保駕護(hù)航。
?? 部分親和層析相關(guān)產(chǎn)品
貨號(hào) | 產(chǎn)品 名稱 | 包裝 規(guī)格 | 級(jí)別 和純度 |
H752721-FR | UltraBio? His-tag Purification Resin | 10ml; 100ml; 1L | Fast Flow; 耐還原 螯合型 |
T751558 | UltraBio? His標(biāo)簽 蛋白純化 瓊脂糖 磁珠 (TED-Ni) | 2ml; 10ml; 50ml | UltraBio? |
N5289 | Ni親和 層析 預(yù)裝柱 | 1ml; 5ml | i-Quip? 柱管材質(zhì): 塑料; 粒徑: 90μm; 柱載量: ≥30mg 肌紅蛋白/ml |
I108706 | 咪唑 | 5g;25g; 100g;500g | 化學(xué) 適用于 分子 生物學(xué), ≥99.5% 純(CP) |
T301499 | Tris-鹽酸 緩沖液 | 100ml; 500ml | 1M,pH 7.4 滅菌 |
C111547 | 氯化鈉 | 500g;2.5kg; 12×500g | 適用于 分子 生物學(xué), ≥99.5% (AT) |
G116208 | 甘油 | 100ml; 250ml; 1L;4L | 適用于 分子 生物學(xué), ≥99% |
D104860 | DL-二硫 蘇糖醇(DTT) | 1g;5g; 25g;100g | 適用于 分子 生物學(xué), ≥99% |
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