在生物分子純化與分析的前沿領(lǐng)域,?KTA系統(tǒng)以其卓越的性能成為科研工作者的重要工具。而當?KTA與更多檢測器聯(lián)用時,為研究開辟了更多可能性,解鎖了前所未有的應(yīng)用場景。
?KTA系統(tǒng):生物分子純化的基石
?KTA系統(tǒng)作為生物分子純化技術(shù)的代表性設(shè)備,經(jīng)過不斷革新,已成為該領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的技術(shù)支撐。它能夠高效分離和純化多種生物分子,涵蓋蛋白質(zhì)(如天然蛋白、重組蛋白、抗原抗體等)、多肽、寡核苷酸、質(zhì)粒、病毒及小分子等,廣泛應(yīng)用于人類、動物、植物和微生物來源的樣品。
?KTA系統(tǒng)集成了先進的液相層析技術(shù)、智能軟件及多樣化的預(yù)裝柱。高精度鈦合金柱塞泵系統(tǒng)可實現(xiàn)優(yōu)異的梯度重復性和自動緩沖液配置,滿足從實驗室研究到中試制備的不同需求。標配的紫外檢測器基于朗伯比爾定律,可在特定波長下(如280 nm檢測蛋白,或聯(lián)用280 nm和260 nm檢測蛋白與核酸混合物,214 nm測定肽鍵等)提供高靈敏度、抗干擾的檢測結(jié)果。
第三方檢測器:拓展檢測維度
通過專用數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換盒“I/O-box E9”,?KTA系統(tǒng)可將第三方檢測器的信號轉(zhuǎn)化為UNICORN軟件可識別的信號,從而擴展其實時監(jiān)測能力。以下是幾種常見的第三方檢測器及其應(yīng)用:
圖1:連接第三方檢測器專用“神器”——I/O-box E9
熒光檢測器
(Fluorescence Detector, FD/FLD)
用于檢測具有熒光特性的化合物,尤其適用于帶有熒光標簽的重組蛋白。其高靈敏度和選擇性可有效區(qū)分目標蛋白與雜質(zhì)。
? 動態(tài)光散射 ?
(Dynamic Light Scattering, DLS)
通過分析顆粒布朗運動引起的散射光波動,測定粒徑分布及生物大分子的聚集狀態(tài),為膠體穩(wěn)定性和分子相互作用研究提供關(guān)鍵數(shù)據(jù)(注:相關(guān)結(jié)果在該檢測器對應(yīng)操作軟件中進行計算)。
? 多角度激光光散射檢測器
(Multi-Angle Laser Light Scattering, MALS)
與尺寸排阻層析(SEC)聯(lián)用,可精確測定生物分子的絕對分子量、形狀及復合物組成,廣泛應(yīng)用于抗體偶聯(lián)藥物、AAV空殼率分析等領(lǐng)域(注:相關(guān)結(jié)果在該檢測器對應(yīng)操作軟件中進行計算)。
??蛋白質(zhì)的表征:?KTA系統(tǒng)外接多角度激光光散射檢測器(MALS),樣品經(jīng)由分子篩和離子交換進行精細分離后,再通過UV檢測器和MALS檢測器,可得到目標蛋白的摩爾質(zhì)量、流體力學半徑等關(guān)鍵參數(shù)。
IEX-MALS(Mono Q、Mono S,目前還可使用Capto HiRes Q及Capto HiRes S)還能克服SEC-MALS (Superdex系列、Superose系列分子篩)的部分局限性,如分離具有相似分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)群體、分離效果不佳的寡聚物以及短肽等,對異質(zhì)樣品也能進行分析,為蛋白質(zhì)表征和質(zhì)量評估提供了有價值的方法。
圖2:?KTA與多角度激光光散射檢測器聯(lián)用
? 示差折光檢測器 ?
(Refractive Index Detector, RID)
作為通用型濃度檢測器,適用于無紫外吸收的化合物(如多糖、脂肪烷烴等),為樣品組成分析提供補充信息。
適應(yīng)多樣化研究需求
無論是基礎(chǔ)科研中的分子機制探索,還是生物醫(yī)藥領(lǐng)域的藥物研發(fā)與質(zhì)量控制,?KTA與其他檢測器的聯(lián)用均展現(xiàn)出強大的適應(yīng)性。科研人員可以從分子大小、形狀、聚集狀態(tài)、熒光特性等多維度獲取數(shù)據(jù),深入解析生物分子的結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系。其靈活的組合方式能夠滿足不同場景下的分析需求,推動相關(guān)領(lǐng)域的研究不斷突破。
?KTA與第三方檢測器的聯(lián)用為生物分子研究注入了新的活力。隨著技術(shù)的進步,這一模式將在更多領(lǐng)域發(fā)揮重要作用,助力科研工作者取得更多突破性成果。
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參考文獻:
Amartely, H., Avraham, O., Friedler, A. et al. Publisher Correction: Coupling Multi Angle Light Scattering to Ion Exchange chromatography (IEX-MALS) for protein characterization. Sci Rep 9, 6182 (2019).
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