“蘇丹紅”是一種化學(xué)染色劑，并非食品添加劑。它的化學(xué)成份中包含一種具有萘環(huán)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜化合物，該化合物具有偶氮結(jié)構(gòu)。這樣的化學(xué)結(jié)構(gòu)帶來(lái)的化學(xué)性質(zhì)決定了它具有致癌性，對(duì)人體的肝腎器官具有明顯的毒性作用。在《國(guó)務(wù)院辦公廳關(guān)于印發(fā)2010年食品安全整頓工作安排的通知》中也明確規(guī)定了蘇丹紅作為食品添加中的禁用物質(zhì)，是每年全國(guó)食品安全監(jiān)督抽檢中的必檢項(xiàng)目。本次實(shí)驗(yàn)參照標(biāo)準(zhǔn)《GB/T 19681-2005 食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)方法 高效液相色譜法》對(duì)辣椒粉、辣椒油和辣椒醬等樣品中進(jìn)行不同濃度的加標(biāo)驗(yàn)證，對(duì)實(shí)驗(yàn)前處理過(guò)程進(jìn)行了適當(dāng)優(yōu)化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定,4種蘇丹紅的加標(biāo)回收率均能滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn)要求。
樣品提取
a 紅辣椒粉等粉狀樣品
稱(chēng)取試樣1g均勻樣品于50mL離心管中，加入20mL正己烷，振蕩提取10min，超聲5min后，4000r/min離心5min，上清液收集于另一離心管中，殘?jiān)?0mL正己烷重復(fù)提取1次，4000r/min離心5min，合并所有正己烷層，40℃氮吹至5mL以下，剩余樣品渦旋混合均勻后作為待凈化液。
b 辣椒油等油狀樣品
稱(chēng)取1g均勻樣品于15mL離心管中，加入3~5mL正己烷，振蕩提取5min后作為待凈化液。
c 辣椒醬等含水量較大的樣品
稱(chēng)取10g均勻樣品于50mL離心管中，加入30mL提取液（正己烷：丙酮=3:1），渦旋混勻，振蕩提取10min，4000r/min離心5min，轉(zhuǎn)移正己烷層，下層用10mL正己烷重復(fù)提取2次（共20mL)，4000r/min離心5min，合并所有正己烷層，加入10g無(wú)水硫酸鈉脫水，40℃氮吹至干，加入5mL正己烷復(fù)溶完全后作為待凈化液。
注：(1)辣椒醬類(lèi)含水量較大的樣品的提取液加入無(wú)水硫酸鈉脫水后，無(wú)水硫酸鈉殘?jiān)枰?mL正己烷洗滌兩次。（2）樣品均需重復(fù)提取1~2次，避免目標(biāo)物損失。
凈化（Copure 蘇丹紅專(zhuān)用柱，1g/6mL）
活化：固相萃取柱使用前用10mL正己烷活化小柱
上樣：待凈化液全部轉(zhuǎn)移至小柱中，棄去流出液
淋洗：用5mL正己烷淋洗，棄去流出液；（注：上樣淋洗過(guò)程盡量不要使柱床干涸）
洗脫：用30mL 含10%丙酮的正己烷洗脫，收集洗脫液于50mL離心管中，40℃氮吹至近干，加入5mL丙酮溶解殘?jiān)?-3min，渦旋復(fù)溶。過(guò)PTFE濾膜，上機(jī)測(cè)試。
標(biāo)準(zhǔn)系列工作液
吸取適量中間液，用乙腈逐級(jí)稀釋?zhuān)玫綕舛葹?.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1μg/mL、2μg/mL。根據(jù)樣品濃度選擇至少5個(gè)點(diǎn)建立校準(zhǔn)曲線。
色譜柱：Copure? C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)
儀器：ThermoFisher U3000液相色譜儀
流動(dòng)相：A：0.02%磷酸水；B：乙腈
洗脫方式：A：B=5:95 等度洗脫
流速：1 mL/min，柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量：20μL
檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)：478 nm（蘇丹紅Ⅰ）、520nm（蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ）
0.5μg/mL曲線蘇丹紅的液相色譜圖
加標(biāo)濃度為1mg/kg時(shí)辣椒粉中蘇丹紅液相色譜圖
加標(biāo)濃度為1mg/kg時(shí)辣椒油中蘇丹紅液相色譜圖
加標(biāo)濃度為0.5 mg/kg時(shí)辣椒醬中蘇丹紅液相色譜圖
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