左旋肉堿 (L-carnitine),又稱L-肉堿或維生素BT,是一種促使脂肪轉(zhuǎn)化為能量的類氨基酸,可作為一種營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑添加到食品中。2025年,國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局,國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布了GB 5009.300-2025《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中左旋肉堿的測(cè)定》。本標(biāo)準(zhǔn)代替GB 29989-2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中左旋肉堿的測(cè)定》。
新版標(biāo)準(zhǔn)主要變化如下:擴(kuò)大了方法的適用范圍,增加了第二法柱前衍生-高效液相色譜法和第三法液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。其中第三法規(guī)定使用強(qiáng)陽(yáng)離子交換色譜柱(3.0mm×50mm,5μm)或性能相當(dāng)者,迪馬科技采用Diamonsil Plus SCX(Cat.#:99458),強(qiáng)陽(yáng)離子交換色譜柱(3.0mm×50mm,5μm)建立了左旋肉堿的檢測(cè)方法,線性范圍10.0ng/mL-5000ng/mL,R2=0.999,滿足國(guó)標(biāo)需求。
樣品制備
左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作液:分別吸取左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(20mg/mL)0.005mL、0.01mL、0.25mL、1.00mL、2.00mL、2.50mL置于10mL容量瓶中,用水定容至刻度,混勻,即得。該系列標(biāo)準(zhǔn)工作液質(zhì)量濃度分別為10.0μg/mL、20.0μg/mL、500μg/mL、2000μg/mL、4000μg/mL、5000μg/mL。
左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作液(10.0μg/mL、20.0μg/mL)需臨用現(xiàn)配;左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作液(500μg/mL、2000μg/mL、4000μg/mL、5000μg/mL)需4°C避光保存,有效期3個(gè)月。
同位素內(nèi)標(biāo)溶液(200μg/mL):準(zhǔn)確稱取10mg(精確至0.1mg)左旋肉堿-d3置于10mL燒杯中,加入5mL水溶解,全部轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中,用水定容至刻度,混勻。將溶液轉(zhuǎn)移至棕色容器中,4°C避光保存,有效期3個(gè)月。
左旋肉堿系列標(biāo)準(zhǔn)工作液:
分別吸取上述各濃度的左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)工作液50.0μL于微波消解罐中加入50.0μL同位素內(nèi)標(biāo)溶液、5mL水和2.5mL,硝酸,渦旋混勻,旋緊罐蓋,置微波消解儀中進(jìn)行提取(10min升至120℃,保持40min,最大功率1000W)。冷卻后取出,緩慢打開罐蓋排氣,用水稀釋至25mL,混勻,用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾,備用。吸取濾液0.50mL,加人乙腈0.50mL,混勻,供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。該系列標(biāo)準(zhǔn)工作液質(zhì)量濃度分別為10.0ng/mL、20.0ng/mL、500ng/mL、2000ng/mL、4000ng/mL、5000ng/mL。該系列標(biāo)準(zhǔn)工作液質(zhì)量濃度分別為10.0ng/mL、20.0ng/mL、500ng/mL、2000ng/mL、4000ng/mL、5000ng/mL。
UPLC分析條件:
色譜柱:Diamonsil Plus SCX 3.0mm×50mm,5μm(Cat.#:99458)
進(jìn)樣量:1μL
柱溫:40℃
流動(dòng)相:A-5mmol/L甲酸銨乙腈-水溶液(含0.2%甲酸)
B-30mmol/L甲酸銨乙腈-水溶液(含0.2%甲酸)
流速:1.0mL/min
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖1 左旋肉堿-d3典型譜圖
圖2 左旋肉堿典型譜圖
圖3 左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)曲線
小結(jié)
使用我司色譜柱Diamonsil Plus SCX 3.0mm×50mm,5μm(Cat.#:99458)分析不同濃度左旋肉堿標(biāo)準(zhǔn)溶液(10.0ng/mL-5000ng/mL),R2 = 0.999。線性范圍良好,滿足GB 5009.300-2025國(guó)標(biāo)需求。
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