傳統(tǒng)的酶切克?。?/span>克隆載體的多克隆位點需攜帶可用的單一酶切位點，同時酶切位點若存在于外源片段也會極大程度限制克隆。此外，還需要購買各式各樣不同的內(nèi)切酶。

同源重組克?。?/span>僅靠同源臂進(jìn)行互補(bǔ)配對。

傳統(tǒng)的酶切克?。?/span>由于酶切位點的限制和酶切位點之間存在著一定的距離和交叉覆蓋，可組裝的片段有限，酶切克隆通常需要分多次拼接，一般只能拼接2-3個片段，耗時耗力。

同源重組克隆：可同時拼接4-6個片段，并且只需要將所有片段混在一個試劑管中反應(yīng)即可。

傳統(tǒng)的酶切克?。?/span>傳統(tǒng)的片段和載體酶切均需要2-4小時，此外還需要對相關(guān)產(chǎn)物進(jìn)行末端補(bǔ)平、磷酸化、產(chǎn)物純化等一系列操作。為保證連接成功，還需在16℃條件下過夜連接。

同源重組克?。?/span>僅需PCR和膠回收，連接體系反應(yīng)時間為5-30min左右，連接單個和多個片段的時間一致。相比于傳統(tǒng)酶切克隆，可節(jié)約1天左右的時間。

• 定向：可滿足1-7個DNA片段的定向同源重組克隆

• 簡便：片段無需酶切，多片段連接一管內(nèi)即可完成

• 快速：最快5分鐘完成連接反應(yīng)

• 高效：菌落數(shù)多，克隆陽性率可達(dá)95%以上

• 超長：載體+片段連接長度可達(dá)25kb以上

• 小體系：低至5-6μL的連接總體系

圖1. 在6 μL小體系非復(fù)蘇感受態(tài)下，連接10 ng低投入量單片段基因。結(jié)果顯示，10923ES性能好于競品，連接效率高，菌落數(shù)多，陽性率達(dá)100%。A-B：重組轉(zhuǎn)化平板。載體（10 kb）和插入片段（1 kb）摩爾比為1:2。C：插入片段PCR鑒定電泳圖，M：Yeasen 10505ES。

圖2. 兩片段（3 kb）連接。結(jié)果顯示，10923ES菌落數(shù)多，陽性率100%。A：重組轉(zhuǎn)化平板。載體（11.6 kb）和插入片段（3 kb）摩爾比為1:2。B：插入片段PCR鑒定電泳圖，M：Yeasen 10505ES。

圖3. 三片段（4.4 kb）連接。結(jié)果顯示，10923ES菌落數(shù)多，陽性率100%。A：重組轉(zhuǎn)化平板。載體（11.6 kb）和插入片段（4.4 kb）摩爾比為1:2。B：插入片段PCR鑒定電泳圖，M：Yeasen 10505ES，菌落PCR長度2.6 kb。

圖4. 六片段（7.6 kb）連接。結(jié)果顯示，10923ES產(chǎn)品性能好于競品，菌落數(shù)多，陽性率100%。A-B：重組轉(zhuǎn)化平板。載體（11.6 kb）和插入片段（7.6 kb）摩爾比為1:2。C：插入片段PCR鑒定電泳圖，M：Yeasen 10505ES，菌P長度2.6 kb。

圖5. 超長片段連接。結(jié)果顯示，10923ES菌落數(shù)多，陽性率100%。A：重組轉(zhuǎn)化平板。載體（21 kb）和插入片段（4.5 kb）摩爾比為1:2。B：插入片段PCR鑒定電泳圖，M：Yeasen 10505ES。

圖6. 分別連接低濃度的五片段和六片段。結(jié)果顯示，10923ES在低濃度下連接性能穩(wěn)定，菌落數(shù)多，陽性率100%。A-B：重組轉(zhuǎn)化平板。載體（11.6 kb）和插入片段（5片段共5.6 kb、六片段共7.6 kb）摩爾比為1:2。C-D：插入片段PCR鑒定電泳圖，M：Yeasen 10505ES，菌P長度2.6 kb。

圖7：10923ES超小體系連接1 kb單片段，連接效率高，菌落數(shù)多，陽性率達(dá)100%。3 μL總體系連接，10923ES的投入量可低至1 μL。A&C&E&I：50 ng載體（11.6 kb）+10 ng片段（1 kb）；G：25 ng載體+5 ng片段。B&D&F&H&J：插入片段PCR鑒定電泳圖。

圖8：10923ES升級版凍融無影響，通過反復(fù)的完全冰凍和4℃解凍進(jìn)行測試，結(jié)果顯示產(chǎn)品凍融對產(chǎn)品不會產(chǎn)生影響。以反復(fù)凍融40次的試劑盒分別連接單片段和六片段，同比正常保存對照，性能無差異。