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2025-01-10 17:03:03寡核苷酸純度分析: 寡核苷酸純度分析是評(píng)估寡核苷酸樣品質(zhì)量的關(guān)鍵步驟。它主要通過(guò)高效液相色譜（HPLC）、電泳或質(zhì)譜等方法進(jìn)行。這些技術(shù)能分離并量化樣品中的不同組分，包括全長(zhǎng)產(chǎn)物、缺失或添加堿基的產(chǎn)物、鹽類(lèi)及其他雜質(zhì)。純度分析結(jié)果有助于確保寡核苷酸用于實(shí)驗(yàn)時(shí)的準(zhǔn)確性和可靠性，對(duì)基因研究、藥物開(kāi)發(fā)等領(lǐng)域至關(guān)重要。

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安捷倫推出針對(duì)生物制藥研究的新款寡核苷酸分析軟件

Agilent MassHunter BioConfirm 12.0 軟件不僅增強(qiáng)了現(xiàn)有的蛋白質(zhì)分析功能，而且還豐富了對(duì)寡核苷酸分析的支持功能。

安捷倫科技（中國(guó)）有限公司 591
2022-06-20
生物制藥研究寡核苷酸純度分析安捷倫高分辨液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng) MassHunter BioConfirm 12.0 軟件

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寡核苷酸純度分析問(wèn)答

2020-10-21 15:47:53冷媒純度分析檢測(cè)儀可以檢測(cè)下列哪些項(xiàng)目？: 冷媒純度分析檢測(cè)儀可以檢測(cè)下列哪些項(xiàng)目？

2020-12-23 16:37:38r12可以通過(guò)冷媒純度分析檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)嗎??: r12可以通過(guò)冷媒純度分析檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)嗎??

2020-08-17 13:53:42冷媒純度分析檢測(cè)儀可以檢測(cè)下列哪些項(xiàng)目?: 冷媒純度分析檢測(cè)儀可以檢測(cè)下列哪些項(xiàng)目?

2020-12-15 17:10:15寡核苷酸類(lèi)藥物的HPLC分析 (二) TSKgel SEC色譜柱應(yīng)用例: 上篇文章《寡核苷酸類(lèi)藥物的HPLC分析 (一) TSKgel IEC色譜柱應(yīng)用例》中我們提到了隨著寡核苷酸藥物的研發(fā)步伐越來(lái)越快，對(duì)高純度寡核苷酸產(chǎn)品的需求也日趨旺盛。目前，寡核苷酸主要是通過(guò)化學(xué)合成法制成，在合成過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生工藝相關(guān)雜質(zhì)和產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)，離子交換液相色譜法是分析這些雜質(zhì)的重要手段之一。此篇文章我們將介紹尺寸排阻色譜法在寡核苷酸藥物質(zhì)量控制中的應(yīng)用。在寡核苷酸的分析中，尺寸排阻分離模式是基于堿基數(shù)量、磷酸基不同導(dǎo)致的分子量差別進(jìn)行分離，通常用于簡(jiǎn)單的質(zhì)量控制或純度研究。該模式的優(yōu)點(diǎn)是可以使用接近生理?xiàng)l件的洗脫溶液進(jìn)行等度分離。有時(shí)也會(huì)添加水溶性有機(jī)溶劑來(lái)YZ疏水吸附。分析不同堿基數(shù)目的寡核苷酸下圖是采用兩根串聯(lián)的SEC色譜柱TSKgel UP-SW2000來(lái)區(qū)分長(zhǎng)度相差一個(gè)堿基的寡核苷酸混合物 (20-mer和N-1 19-mer)。TSKgel UP-SW2000是東曹生命科學(xué)ZX開(kāi)發(fā)的粒徑2μm、孔徑12.5nm的硅膠基質(zhì)SEC色譜柱，主要用于分離分子量范圍為1-150kDa的小蛋白、肽和寡核苷酸等生物分子。該色譜柱兼容HPLC和UHPLC系統(tǒng)，因此也能夠從傳統(tǒng)的HPLC-SEC方法轉(zhuǎn)換到UHPLC。下圖是使用TSKgel G2000SWXL色譜柱分離不同堿基數(shù)量的合成寡核苷酸混合物的譜圖。為了YZ核酸酶活性，有時(shí)會(huì)在流動(dòng)相中添加EDTA等約1 mmol/L的螯合劑。SEC法分離脂質(zhì)體包被的siRNA下圖是使用TSKgel SuperSW2000色譜柱對(duì)天然型DNA核酸藥物Defitelio進(jìn)行質(zhì)量分析的示例。參考文獻(xiàn)：Handbook of analysis of oligonucleotides and related Products, Feb.23 (2011) 125, Edited by J.V. Bonilla et al.寡核苷酸分析用SEC色譜柱下表中列出了適用于核酸分離的SEC色譜柱。對(duì)于＜375 bp的短鏈核酸或寡核苷酸，UP-SW3000、UP-SW2000、G3000SWXL以及G2000SWXL這幾款色譜柱都是比較推薦的。

2020-12-15 16:52:34寡核苷酸類(lèi)藥物的HPLC分析 (一) TSKgel IEC色譜柱應(yīng)用例: 概述寡核苷酸是一類(lèi)只有50個(gè)以下堿基的短鏈核苷酸的總稱(chēng)（包括脫氧核糖核酸DNA或核糖核酸RNA的核苷酸）。近幾年，隨著寡核苷酸療法在ZL各種疾病適應(yīng)癥方面取得了臨床上顯著的進(jìn)展，已有多種寡核苷酸類(lèi)藥物，如小干擾RNA (siRNA) 和反義寡核苷酸 (ASO) 藥物獲得了FDA上市批準(zhǔn)。另外還有多種microRNA (miRNA) 和適配體 (Aptamer) 正在研發(fā)中。因此，更大量、更高純度的寡核苷酸產(chǎn)品的需求也隨之日益增長(zhǎng)。東曹生命科學(xué)提供多種具有高分辨率、選擇性的色譜柱和層析填料產(chǎn)品以滿足從分析到純化制備不同規(guī)模的應(yīng)用需求。寡核苷酸的HPLC分離模式下表中列舉了寡核苷酸HPLC分析的幾種分離模式及適用的分離條件。也可以通過(guò)連用MS進(jìn)行檢測(cè)。ZL性寡核苷酸是由固相化學(xué)合成法制成。在合成過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生工藝相關(guān)雜質(zhì)和產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)。產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)包含許多目標(biāo)產(chǎn)物的類(lèi)似物（分子量的差別：堿基數(shù)n-1、n、n+1等），磷酸基S化等的不對(duì)稱(chēng)化合物、異構(gòu)體等。因此，雜質(zhì)的分析監(jiān)控對(duì)工藝和質(zhì)量控制就顯得十分重要。一般而言，通過(guò)陰離子交換色譜法即可實(shí)現(xiàn)這一分析需求。寡核苷酸IEC-HPLC分析下圖是使用TSKgel DNA-STAT陽(yáng)離子交換色譜柱分離具有不同序列的4種寡核苷酸引物 (單鏈) 。在IEC分離模式中，如果使用無(wú)孔填料的色譜柱可以提高分辨率。此款色譜柱采用的是親水性無(wú)孔樹(shù)脂填料，粒徑5μm，表面由開(kāi)放型多層陰離子交換基團(tuán)構(gòu)成。這些特性與創(chuàng)新的化學(xué)鍵合方法相結(jié)合，使其載量更高、操作壓力更低，非常適合于寡核苷酸的高分辨率分析。寡核苷酸的純度檢測(cè)在離子交換色譜柱中，可以對(duì)離子基團(tuán)與主成分有一處不同的化合物進(jìn)行分離，比如能夠分離n-1、n、n+1的化合物。下圖是TSKgel DNA-NPR陽(yáng)離子交換色譜柱對(duì)13個(gè)堿基的硫代磷酸寡核苷酸粗樣分析的色譜圖。TSKgel DNA-STAT色譜柱對(duì)粗制的寡核苷酸與純化后的樣品進(jìn)行純度評(píng)估。寡核苷酸的分析要點(diǎn)1、根據(jù)核酸樣品的穩(wěn)定性和大小來(lái)選擇合適的洗脫液。如果核酸的穩(wěn)定性很高，可以采用堿性溶液 (NaOH，pH12) 和高溫60℃條件下分離，可提高分辨率。如果是穩(wěn)定性差的，則推薦使用pH7-8的中性洗脫液，溫度40℃條件下分離。2、在樣品吸附強(qiáng)的情況下，可使用比NaCl或NaBr洗脫能力更強(qiáng)的NaClO4進(jìn)行梯度分離。3、如果樣品是超巨大雙鏈DNA (如質(zhì)粒DNA)，使用TSKgel DEAE-NPR (4.6mm I.D.×3.5cm) 的話不僅可以獲得高分辨率，而且回收率也會(huì)更好。