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2025-01-10 10:53:49細胞珠磨儀: 細胞珠磨儀是實驗室常用的細胞破碎設(shè)備，主要用于從堅韌的組織樣本中提取細胞、細胞核及細胞器等。它利用高速旋轉(zhuǎn)的研磨珠在樣本中產(chǎn)生的撞擊和剪切力，將細胞快速、有效地破碎。細胞珠磨儀操作簡便，通常配備有多種轉(zhuǎn)速和時間設(shè)置，可滿足不同實驗需求。該儀器廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)等領(lǐng)域，是細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)實驗中不可或缺的工具，能夠幫助研究人員獲取高質(zhì)量的細胞勻漿，為后續(xù)實驗提供有力支持。

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細胞珠磨儀問答

2023-03-06 15:51:24HM&M珠磨機：與鹽野義制藥合作研發(fā)難溶性藥物所需的濕法珠磨機: 全文共2144字，閱讀大約需要7分鐘鹽野義制藥的田中先生說“金屬污染物改革對產(chǎn)品化的品質(zhì)、安全性、規(guī)?；a(chǎn)產(chǎn)生了很大的影響”。近年來，許多藥物候選化合物顯示出難溶性的特質(zhì)，其有效的解決方法是通過珠磨機將藥物納米化。藥物納米化可以有效改善藥物生物利用度，藥物納米化已經(jīng)在基礎(chǔ)研究和商用生產(chǎn)中得到應(yīng)用。這里的問題是，傳統(tǒng)的珠磨機在結(jié)構(gòu)上不可避免地會產(chǎn)生鋯等金屬的磨損，從而污染到產(chǎn)品。能解決這個問題的研究報告很少。于是，鹽野義制藥開始著手與廣島金屬公司共同研究和開發(fā)用于解決難溶性藥物在研磨時引入污染物這一問題的新型珠磨機。闡明各種參數(shù)的影響，探索最優(yōu)條件納米制劑制造的要求事項設(shè)置了以下5點：1、粉碎后粒子粒徑 :＜200 nm2、處理速度:幾十分鐘~幾個小時3、金屬污染的極小化（金屬污染物含量控制）：處理過程中料液：＜1 mg/L，原料藥：＜10 μg/g4、不引起變質(zhì)的處理溫度：＜ 30℃（優(yōu)選＜10℃）5、易于清洗：機器拆洗容易珠磨機通過攪拌使磨珠與目標粒子在料液內(nèi)碰撞而粉碎、分散。我們的目的是抑制在此過程中因磨珠碰撞而產(chǎn)生的污染。納米制劑制造注意事項的①、②、③與磨珠粒徑和圓周速度（轉(zhuǎn)速）有關(guān)，為了達到事項②對處理速度的要求，選擇“高速運轉(zhuǎn)/小、中粒徑珠子”是合適的。為了達到事項③對污染物的控制，需要選擇“低速運轉(zhuǎn)/小粒徑珠子”。我們探索能在不降低效率的情況下減傷磨珠污染的技術(shù)解決方案。為了達成要求事項的技術(shù)性討論磨珠粒徑：當磨珠粒徑變小時，與粒子接觸的頻率會增加，處理速度能更快；磨珠粒徑變大，沖擊力會增強，引入污染物的概率會更大。因為這樣的關(guān)系，所以選取具有短時間處理能力、污染物引入少的最佳磨珠粒徑。圓周速度（轉(zhuǎn)速）圓周速率（轉(zhuǎn)速）越高，磨珠間接觸的頻率和沖擊力會上升，一方面污染量隨著轉(zhuǎn)速的升高而急劇增加，以一定速度急劇增加，另一方面，處理速度與圓周速率呈正比例關(guān)系。我們需要在污染量較少的情況選擇最快的處理速度。藥物濃度從粒徑變化、污染量確認的觀點出發(fā)，在5～50w/w%的范圍內(nèi)進行了變更實驗。裝置結(jié)構(gòu)考慮了在珠磨機中抑制沖擊力的低速運轉(zhuǎn)時的磨珠行為。研究的結(jié)果是，在臥式結(jié)構(gòu)中，磨珠無法貫穿整個研磨腔體，可能會排除未經(jīng)處理的漿料，從而降低處理效率。在立式結(jié)構(gòu)中，通過采用重力下降的方式，漿料可以可靠地通過磨珠聚集到磨機底部，不會出現(xiàn)漿料無法排出的情況。因此，珠磨機結(jié)構(gòu)上選擇了能使料液從上往下流轉(zhuǎn)的狹縫型立式珠磨機。機械密封所謂機械密封，是指在機體上一種防止料液泄露或從外部引入污染物的軸封裝置。通過密封液最小化內(nèi)外壓，抑制滑動部分微米級間隙的泄漏。但是，這種設(shè)計存在著密封件自身損壞、引入污染物、清潔靈活性差等問題。為此，開發(fā)了無需密封液的密封結(jié)構(gòu)，降低了從密封部分帶來污染的風(fēng)險和提高清潔效率。其他通過各種比較，選擇了韌性高、污染性小的氧化鋯材質(zhì)磨珠。在攪拌轉(zhuǎn)子設(shè)計上，比較鞘式和盤式，最后選擇了能夠在系統(tǒng)內(nèi)均勻攪拌，且能夠在短時間內(nèi)進行粉碎、分散處理的鞘形。低速運轉(zhuǎn)時處理效率是常規(guī)的1.8倍。在上述條件的基礎(chǔ)上，將難溶解性的苯妥英作為模型藥物，展示了最優(yōu)化處理條件的案例。使用多種藥物濃度的料液進行粉碎后，主藥濃度在40w /w%之前，金屬污染量基本沒有受到影響。當濃度高于該濃度時，料液的粘度顯著增加，粉碎效率降低，污染量也增大。與傳統(tǒng)的5 w/w%處理相比，40 w/w%處理的污染量提高了1/8，生產(chǎn)效率提高了8倍。另外，研究了無密封液的影響，沒有發(fā)現(xiàn)對苯妥因粒子粒徑變化和粉碎效率的影響。密封材料鎢、鎳的污染量為零，避免了污染風(fēng)險。圖1總結(jié)了通過3年的共同研究降低污染量的成果。通過逐一解析各種參數(shù)對比珠磨機產(chǎn)生污染的影響并進行優(yōu)化，將料液污染量降低到0.73 mg/ L。此外，圖2總結(jié)了原料藥的處理時間和每克原料藥的接觸時間。處理速度按濃度換算提高了1.6倍，污染量也成功地大幅降低為1.6 μg/g目標值，約為現(xiàn)有技術(shù)的1/30。抑制污染量和高效化的重要參數(shù)有磨珠直徑和圓周速率（轉(zhuǎn)速）。粉碎效率和污染量兩者需要權(quán)衡。對填充率和藥物濃度也進行了研究，發(fā)現(xiàn)影響很小。由此，得出結(jié)論，最佳條件為珠徑：0.5 mm以下的小粒徑到中等粒徑，周速：6 m/s以下的低速到中速，濃度為40 w/w%。另外，處了把苯妥因作為模型藥物進行了檢驗，其他的難溶解性藥物在相同條件下也實施了粉碎的結(jié)果，粉碎可以達到200nm。特別是，對低熔點的藥物，也可以適用，如以前的技術(shù)難以粉碎的非諾貝特，顯示了本技術(shù)的進一步適用性。一體式無密封珠磨機《APEX磨機F&M系列》通過本共同研究開發(fā)的是一體式無密封珠磨“APEX磨F&M系列”。通過無密封，實現(xiàn)了來自機械密封的金屬污染零為零、密封液的混入為零、省略了由于機械密封的損傷而定期整備、裝置的緊湊化，組裝和分解容易，可實現(xiàn)浸泡放置清洗。此外，電動機直接連接旋轉(zhuǎn)軸，取消了V帶，防止了V帶產(chǎn)生磨損粉末。以前，機械密封所承擔(dān)的防珠漏是通過使用下降流和在磨機上部安裝泵送環(huán)來解決的。從150 mL的實驗機到2 L的生產(chǎn)機。無密封技術(shù)正在申請實用新型和專利。廣島金屬與機械公司從1983年開始生產(chǎn)銷售濕珠磨機。技術(shù)研究開發(fā)越來越深入。平田先生以高品質(zhì)納米粒子醫(yī)藥品制造技術(shù)的領(lǐng)先企業(yè)為目標，滿懷干勁地表示將進一步開展技術(shù)拓新。

2025-01-13 17:45:14自動細胞接種儀使用方法有哪些？: 自動細胞接種儀使用方法：提升實驗效率與精確度在現(xiàn)代生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中，細胞培養(yǎng)技術(shù)是實驗室工作的核心之一。而自動細胞接種儀作為一種高效的實驗工具，已被廣泛應(yīng)用于細胞培養(yǎng)過程中，極大地提升了實驗效率和準確性。本篇文章將詳細介紹自動細胞接種儀的使用方法、注意事項以及其在實際應(yīng)用中的優(yōu)勢，幫助廣大科研人員更好地掌握其操作技巧，提高實驗結(jié)果的可靠性。一、自動細胞接種儀的基本原理自動細胞接種儀通過機械化、自動化的方式來實現(xiàn)細胞的接種。其原理是通過設(shè)定好細胞接種的時間、數(shù)量、培養(yǎng)皿規(guī)格等參數(shù)，儀器自動將細胞液均勻地分配到各個培養(yǎng)皿中。這一過程不僅大大節(jié)省了實驗人員的時間，還能有效避免人為操作誤差，提高細胞接種的均勻性與重復(fù)性。自動細胞接種儀主要通過吸取細胞懸液、精確計量并將其精確分配到培養(yǎng)皿內(nèi)，確保每次接種的細胞數(shù)目和分布更加均勻。二、自動細胞接種儀的使用步驟準備工作在使用自動細胞接種儀之前，實驗人員應(yīng)首先準備好所需的培養(yǎng)皿、細胞懸液和培養(yǎng)基。確保儀器的各個部件清潔，避免交叉污染。還需檢查儀器的設(shè)置，確認設(shè)備已連接電源并啟動。設(shè)置參數(shù) 自動細胞接種儀的操作界面一般為觸摸屏，用戶可以根據(jù)實驗要求設(shè)置細胞接種的相關(guān)參數(shù)。這些參數(shù)包括每個培養(yǎng)皿中的接種細胞數(shù)、接種的細胞量（通常以細胞數(shù)或細胞密度為單位）、每次接種的時間間隔等。接種操作設(shè)置完參數(shù)后，啟動儀器進行接種操作。儀器會自動吸取細胞懸液，通過設(shè)定的吸管或分配裝置，將細胞均勻接種到各個培養(yǎng)皿中。在整個過程中，儀器會實時監(jiān)控接種的進度，并根據(jù)設(shè)置的程序進行調(diào)整。結(jié)束與清潔接種完成后，儀器會發(fā)出提示音，通知用戶操作結(jié)束。接著，用戶可以取出已接種的培養(yǎng)皿，放入適宜的培養(yǎng)環(huán)境中進行孵育。儀器的各個部分需要按照規(guī)定進行清潔和消毒，以避免細胞殘留物的堆積。三、自動細胞接種儀的優(yōu)勢提高實驗效率自動細胞接種儀能顯著減少人工操作時間，提高工作效率。尤其是在大規(guī)模細胞培養(yǎng)時，儀器能夠快速、地完成接種任務(wù)，節(jié)省大量的人工成本。減少人為誤差人為操作往往會導(dǎo)致細胞接種不均勻或細胞數(shù)量偏差。使用自動細胞接種儀后，接種過程可以嚴格按照設(shè)定的參數(shù)進行，減少了操作中的不確定性和誤差，保證了實驗結(jié)果的可靠性。提高接種精度自動細胞接種儀能夠精確控制細胞接種的數(shù)量和分布，尤其適用于需要高度精確的實驗，如高通量篩選、藥物測試等領(lǐng)域。儀器的高精度控制確保每個培養(yǎng)皿中的細胞數(shù)目均勻，避免了因細胞數(shù)量不一致而影響實驗結(jié)果的情況。四、使用自動細胞接種儀的注意事項定期保養(yǎng)與維護自動細胞接種儀的長期穩(wěn)定運行需要定期進行維護。用戶應(yīng)根據(jù)設(shè)備手冊的要求，對儀器進行定期清潔、校準和檢修，確保儀器的性與穩(wěn)定性。注意環(huán)境控制盡管自動細胞接種儀可以減少人為因素的干擾，但細胞培養(yǎng)環(huán)境的控制依然至關(guān)重要。接種前，應(yīng)確保培養(yǎng)環(huán)境無污染，接種后及時將培養(yǎng)皿放入適宜的溫度、濕度和二氧化碳濃度環(huán)境中進行培養(yǎng)。操作人員培訓(xùn) 盡管自動細胞接種儀具有較高的自動化程度，但操作人員仍需接受專業(yè)培訓(xùn)，熟悉儀器的操作流程、參數(shù)設(shè)置及注意事項，以確保設(shè)備的高效運轉(zhuǎn)和實驗的成功。結(jié)語自動細胞接種儀為現(xiàn)代細胞培養(yǎng)提供了、高效的解決方案，已成為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究以及藥物開發(fā)中的重要工具。通過合理的參數(shù)設(shè)置和正確的操作方法，科研人員能夠更好地提升實驗的效率與精度。掌握其使用方法，不僅能降低人工操作的風(fēng)險，還能為細胞培養(yǎng)實驗帶來更加可控和可靠的結(jié)果。

2023-08-18 11:00:43如何分辨“真“、”假”全自動細胞計數(shù)儀？: // 上一篇《給大家推薦一種細胞計數(shù)儀性能檢測的方法》中，我們發(fā)現(xiàn)全自動細胞計數(shù)儀檢測細胞樣品的重復(fù)性和梯度稀釋的結(jié)果準確性上，都比半自動插板式細胞計數(shù)儀更有優(yōu)勢。那么大家可能會問：“導(dǎo)致這樣的性能差異原因是什么呢？另外，目前市場上都自詡所賣的細胞計數(shù)儀是全自動的，那我們?nèi)绾螀^(qū)分哪個是‘真’，哪個又是‘假’的呢？”要回答這2個問題，首先我們需要對圖像法細胞計數(shù)的過程做下回顧。下面是圖像法臺盼藍染色細胞計數(shù)和活率分析的基本流程。01細胞吹打混懸后定量吸取樣品02等體積吸取臺盼藍吹打染色03染色好的細胞加到血球計數(shù)板或細胞計數(shù)板上04顯微鏡下手動或自動統(tǒng)計死活細胞數(shù)，然后計算活細胞密度和活率05清洗血球計數(shù)板或更換新的細胞計數(shù)板傳統(tǒng)顯微鏡下手工細胞計數(shù)，以上5步操作都要操作人員來完成。這種方法因為人為操作帶來的誤差，導(dǎo)致結(jié)果差異有時會很大，甚至超出通常可以接受的±10%偏差范圍。并且隨著樣品數(shù)越多，操作人員會逐漸造成眼疲勞，無法繼續(xù)進行有效并準確地計數(shù)。手工顯微鏡法細胞計數(shù)的照片和計算方法插板式半自動細胞計數(shù)儀的出現(xiàn)，省去了操作人員肉眼統(tǒng)計和分析死活細胞數(shù)的步驟，儀器操作只需要將樣品混勻、定量染色和上樣分析（有時要手動對焦），測試結(jié)束后更換新的細胞計數(shù)板做下一個樣品。用于半自動細胞計數(shù)儀的各類細胞計數(shù)板移液槍加樣的照片半自動細胞計數(shù)儀的缺點在于：由于每塊細胞計數(shù)板的檢測樣品數(shù)量有限，所以檢測新的樣品需要更換新的板子。但板子批次間存在差異，樣品和臺盼藍體積需要手動定量，取樣量少代表性差（從30-50mL樣品中一般就只吸取20uL樣品），染色后的細胞樣品通過移液槍加樣有時還產(chǎn)生氣泡而報廢，用后廢棄的細胞計數(shù)板會產(chǎn)生二次污染物，這些目前都還沒有好的處理方法。那有沒可能細胞的混勻和染色，以及細胞的計數(shù)和分析過程全部實現(xiàn)自動化，同時不用手動更換新的細胞計數(shù)板而自動做下一個樣品呢？答案是使用全自動細胞計數(shù)和活率分析儀。全自動細胞計數(shù)儀相比半自動插板式細胞計數(shù)儀的優(yōu)勢點小結(jié)：01全自動吹打混懸和臺盼藍染色全自動細胞計數(shù)儀的一個顯著特點是：能夠自動完成細胞的吹打混懸和臺盼藍染色。要實現(xiàn)全自動吸取等體積的細胞樣品和臺盼藍染料，首先需要由儀器內(nèi)部的步進馬達精確地完成加樣體積的控制。其次，因為可以全自動吸取樣品，所以全自動細胞計數(shù)儀會有1個轉(zhuǎn)盤或孔板放置其他待測樣品。對于排在后面的細胞若發(fā)生沉降，就需要在測試前對樣品進行吹打混懸，以防止細胞沉降導(dǎo)致測試結(jié)果出現(xiàn)偏差。而這2步操作，半自動細胞計數(shù)儀都只能通過手動來完成，從而引入人為操作誤差。同時，Vi-CELL BLU全自動細胞計數(shù)儀單個樣品檢測的取樣體積200±20uL，加樣體積不需要很準確，儀器自動會完成定量取樣。相比半自動細胞計數(shù)儀只有10-50uL的取樣體積，而且由手動操作完成。取樣體積大代表性更好，測試結(jié)果更容易接近真實值。02動態(tài)百圖分析Vi-CELL BLU全自動細胞計數(shù)儀測試細胞樣品，單個樣品拍攝的照片達到了100張，分析的細胞數(shù)量更多，1x10e6個/mL的細胞懸液拍攝100張照片的細胞數(shù)差不多2600個。單個樣品檢測拍攝的細胞數(shù)越多，檢測結(jié)果的系統(tǒng)誤差越小，測試結(jié)果的重復(fù)性和準確性也相應(yīng)更高。其中1張照片（上左圖）和100張照片的分析柱狀圖03高通量和不間斷檢測全自動細胞計數(shù)儀的另一個特點是高通量和不間斷檢測，即待測樣品可以先放到轉(zhuǎn)盤或96孔板上，根據(jù)軟件中設(shè)置好的分析條件，儀器會自動按要求完成細胞的計數(shù)和活率分析。Vi-CELL BLU全自動細胞計數(shù)和活率分析儀一次最多可以放21個樣品（使用24位轉(zhuǎn)盤）或96個樣品（使用96孔板）進行分析測試。若使用24位轉(zhuǎn)盤，在檢測過程中還可以實現(xiàn)不間斷上樣測試，即樣品測試過程中，還可以放入新的待測樣品。綜上所述，全自動細胞計數(shù)儀在細胞樣品混懸和染色方面避免了人為操作帶來的誤差，同時百圖分析拍攝的細胞數(shù)多，結(jié)果代表性更好。所以，在細胞計數(shù)方面重復(fù)性和準確性上相比半自動插板式細胞計數(shù)儀更有優(yōu)勢。同時，全自動細胞計數(shù)儀的高通量和不間斷檢測功能，又滿足實驗室樣品量大，不同老師共用該儀器的檢測需求。并且每個樣品測試結(jié)束后，儀器會自動進行管路清洗，儀器本身還帶有自動過夜清洗功能，使得儀器一直處于待機狀態(tài)。所以，在操作便捷性上，全自動細胞計數(shù)儀也勝過半自動插板式細胞計數(shù)儀。以上這些特點可以用于區(qū)分我們使用的細胞計數(shù)儀是“全自動”還是“半自動”，同時也是為何全自動細胞計數(shù)儀性能上要優(yōu)于半自動的地方。希望大家可以通過這些方法來分辨“真”、“假”全自動細胞計數(shù)儀。

2022-03-01 10:17:17新品搶先試用 | 納米磁珠細胞分選，Get最方便的細胞分選方法！: 提到細胞分選實驗，大家首先想到就是流式細胞分選，該方法使用熒光抗體標記單細胞懸液，再通過調(diào)節(jié)合適的電壓、補償?shù)龋梢詫⒛康募毎c非目的細胞區(qū)分開來。由于可以對多參數(shù)、不同熒光強度的細胞進行鑒定、分類、定量和分離，流式分選技術(shù)在同時進行多標記的細胞分選時，其地位無可替代。但是當需要快速獲得某種分選后的細胞時，流式分選的操作較為復(fù)雜，且花費的時間過長，對細胞的刺激也比較大。因此，使用免疫納米磁珠進行快速細胞分選的方法應(yīng)運而生，該方法不僅對細胞刺激性小、速度快，而且操作簡單，稍等片刻就可快速獲得目的細胞。（▲瑞沃德細胞分選新品）新品來襲，自主研發(fā)瑞沃德細胞分選產(chǎn)品包括自主研發(fā)的磁珠分選試劑盒和細胞分選柱，能在短時間內(nèi)通過簡單、快速的操作分選得到高純度、高活率的目標細胞。使用流程同時，納米級別磁珠無需洗脫，分選得到的細胞可直接應(yīng)用于流式分析、細胞培養(yǎng)、單細胞測序等下游實驗。結(jié)果展示純度*注：小鼠脾臟細胞樣本CD3分選后純度流式檢測結(jié)果，A為分選后陰性管（流出組分），B為分選后陽性管（滯留組分）。Marker激活情況注：小鼠脾臟細胞樣本CD3分選后激活Marker CD69檢測結(jié)果，A為分選后Day0檢測結(jié)果，B為分選后用CD3/CD28單抗激活Day3檢測結(jié)果應(yīng)用場景多，助力科學(xué)研究免疫學(xué)研究腫瘤學(xué)研究神經(jīng)生物學(xué)研究干細胞研究細胞治療四大特點，輕松獲取目標細胞1、可獲得高純度，高活率，高得率的目的細胞2、獲得細胞可直接用于細胞培養(yǎng)，測序等下游實驗3、溫和，低刺激，不改變細胞原本生物學(xué)特性4、高效便捷，操作簡單新品上市開啟免費試用活動小鼠CD3+/ CD4+/ CD8+三種細胞分選試劑盒按需任選，助您更好地細胞分選識別下方二維碼，快來申請免費試用

2023-06-09 11:39:07經(jīng)典磁珠一文解讀：AMPure XP純化實用技巧: 基于SPRI技術(shù)的AMPure XP，采用超順磁磁珠幫助純化核酸片段，被廣泛應(yīng)用到NGS行業(yè)，PCR體系、酶切、連接反應(yīng)體系的純化。作為行業(yè)的“金標準“試劑盒，AMPure XP有哪些高頻Q&A問題呢？AMPure XP怎么純化長片段？怎么提高我的樣本得率？產(chǎn)物純度有什么優(yōu)化的方向嗎？我可以選擇純化250 bp的那一條條帶嗎？小貝總結(jié)了10條AMPure XP Q&A問題實用技巧：1、乙醇比例乙醇溶液必須至少70%。當將100%乙醇稀釋至70%時，請確保在配置溶液合并之前分別測量水和乙醇的體積。用水補齊乙醇的稀釋方式會導(dǎo)致濃度低于預(yù)期。請確保存儲的乙醇在不使用時保持瓶蓋擰緊。2、充分的混合在最初磁珠與樣品結(jié)合和洗脫混合期間，徹底的混合至關(guān)重要?？捎寐缘陀诳偪左w積的吸頭進行混合。洗脫時，需要注意最小洗脫體積（96孔規(guī)格為40 μL，384孔規(guī)格為15 μL），以確保磁珠充分重懸。還應(yīng)保持足夠的孵育時間，以確保核酸有足夠的時間與磁珠結(jié)合或解離。由于樣品的粘度，結(jié)合過程中的渦旋可能效率不高。3、大反應(yīng)體系大體積反應(yīng)可以采用更長的樣品&磁珠結(jié)合和磁分離時間?？蓪inding結(jié)合時間增加到10分鐘，并確保在棄上清液之前所有的磁珠均被充分磁分離。4、避免實驗中磁珠損失如果在棄清液的過程中磁珠被吸入槍頭，結(jié)合在這些磁珠上的核酸則會在這個步驟損失掉。首輪移除上清時，緩慢輕柔地操作，盡可能多地移除清液，同時確保不會干擾磁珠在磁環(huán)/磁力架上的吸附。如果意外吸出磁珠，請將所有磁珠重新打回孔中，讓磁珠重新磁吸。隨后，再度移除上清，嘗試緩慢吸液或使用更細的槍頭。小體積樣品更容易受到磁珠損耗的影響，因為磁珠可能達不到孔中磁鐵的水平位置。5、大片段樣品的磁珠干燥10 kb以上的片段與磁珠結(jié)合非常緊密，如果樣品變干則難以洗脫。盡可能完全地棄掉最后一次乙醇清洗液，立即加入洗脫緩沖液并充分混合。保持蓋子打開狀態(tài)，乙醇在洗脫孵育期間將繼續(xù)從孔中蒸發(fā)。6、低洗脫體積洗脫體積小會導(dǎo)致回收率降低。這是因為會有少量洗脫緩沖液始終包覆在磁珠上。該體積取決于孔的形狀和孔中的磁珠量，因此較小的洗脫體積將導(dǎo)致相對較高比例的洗脫液殘留。7、當你用紫外吸收法檢測回收率不只是PCR雙鏈產(chǎn)物，體系中過量的引物和核苷酸同樣產(chǎn)生吸收。因此測量未純化的PCR反應(yīng)，可能獲得高于實際PCR產(chǎn)物濃度的吸光度值。對比純化前后的吸收值，則會導(dǎo)致回收率看起來比實際低。小貝建議：在瓊脂糖凝膠上運行等量的未純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物與純化后的PCR反應(yīng)產(chǎn)物（例如1/4的未純化PCR產(chǎn)物和1/4的洗脫液）以便檢查回收情況，或使用基于特異性熒光染料的測定，例如PicoGreen。8、引物的殘留AMPure XP試劑與PCR反應(yīng)混合后的試劑最終濃度決定了PCR產(chǎn)物與磁珠結(jié)合的片段大小。AMPure XP主要結(jié)合> 100 bp的PCR產(chǎn)物，并丟棄小于50個堿基的引物。較大的引物和引物二聚體可以與磁珠結(jié)合。請確保您的PCR產(chǎn)物在循環(huán)過程中沒有蒸發(fā)導(dǎo)致體積變小，并添加正確體積的試劑（見下表）。確保用乙醇沖洗在混合和結(jié)合過程中樣品有接觸到孔內(nèi)壁的任何地方。如果在純化體系中存在過量的引物，減少該PCR反應(yīng)的引物量也可以是一個優(yōu)化的方向。9、下游酶反應(yīng)效果不佳如果您的下游酶反應(yīng)對痕量乙醇極其敏感，請?zhí)砑觾煞昼姷谋Ｊ馗稍锊襟E。請注意，大片段會與磁珠緊密結(jié)合，在磁珠完全干燥后可能難以洗脫。10、如何選擇性保留200-500 bp核酸片段AMPure XP是用于PCR產(chǎn)物純化的試劑盒。對于片段篩選的應(yīng)用，請考慮使用 SPRIselect試劑盒。有關(guān) SPRIselect 片篩的更多信息，請訪問經(jīng)典磁珠一文解讀:NGS片段篩選比例計算