如何分辨“真“、”假”全自動細胞計數(shù)儀？

貝克曼庫爾特商貿(mào)（中國）有限公司 2023-08-18 11:00:43 306  瀏覽

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  上一篇《給大家推薦一種細胞計數(shù)儀性能檢測的方法》中，我們發(fā)現(xiàn)全自動細胞計數(shù)儀檢測細胞樣品的重復性和梯度稀釋的結(jié)果準確性上，都比半自動插板式細胞計數(shù)儀更有優(yōu)勢。

  
  

  那么大家可能會問：

  “導致這樣的性能差異原因是什么呢？另外，目前市場上都自詡所賣的細胞計數(shù)儀是全自動的，那我們?nèi)绾螀^(qū)分哪個是‘真’，哪個又是‘假’的呢？”

  
  

  要回答這2個問題，首先我們需要對圖像法細胞計數(shù)的過程做下回顧。下面是圖像法臺盼藍染色細胞計數(shù)和活率分析的基本流程。

  
  

  01

  細胞吹打混懸后定量吸取樣品

  02

  等體積吸取臺盼藍吹打染色

  03

  染色好的細胞加到血球計數(shù)板或細胞計數(shù)板上

  04

  顯微鏡下手動或自動統(tǒng)計死活細胞數(shù)，然后計算活細胞密度和活率

  05

  清洗血球計數(shù)板或更換新的細胞計數(shù)板

  
  

  傳統(tǒng)顯微鏡下手工細胞計數(shù)，以上5步操作都要操作人員來完成。這種方法因為人為操作帶來的誤差，導致結(jié)果差異有時會很大，甚至超出通?？梢越邮艿摹?0%偏差范圍。并且隨著樣品數(shù)越多，操作人員會逐漸造成眼疲勞，無法繼續(xù)進行有效并準確地計數(shù)。

  
  

  手工顯微鏡法細胞計數(shù)的照片和計算方法

  
  

  插板式半自動細胞計數(shù)儀的出現(xiàn)，省去了操作人員肉眼統(tǒng)計和分析死活細胞數(shù)的步驟，儀器操作只需要將樣品混勻、定量染色和上樣分析（有時要手動對焦），測試結(jié)束后更換新的細胞計數(shù)板做下一個樣品。

  
  

  用于半自動細胞計數(shù)儀的各類細胞計數(shù)板移液槍加樣的照片

  
  

  半自動細胞計數(shù)儀的缺點在于：由于每塊細胞計數(shù)板的檢測樣品數(shù)量有限，所以檢測新的樣品需要更換新的板子。但板子批次間存在差異，樣品和臺盼藍體積需要手動定量，取樣量少代表性差（從30-50mL樣品中一般就只吸取20uL樣品），染色后的細胞樣品通過移液槍加樣有時還產(chǎn)生氣泡而報廢，用后廢棄的細胞計數(shù)板會產(chǎn)生二次污染物，這些目前都還沒有好的處理方法。

  
  

  那有沒可能細胞的混勻和染色，以及細胞的計數(shù)和分析過程全部實現(xiàn)自動化，同時不用手動更換新的細胞計數(shù)板而自動做下一個樣品呢？答案是使用全自動細胞計數(shù)和活率分析儀。

  
  

  全自動細胞計數(shù)儀相比半自動插板式細胞計數(shù)儀的優(yōu)勢點小結(jié)：

  01

  全自動吹打混懸和臺盼藍染色

  全自動細胞計數(shù)儀的一個顯著特點是：能夠自動完成細胞的吹打混懸和臺盼藍染色。

  
  

  
  

  要實現(xiàn)全自動吸取等體積的細胞樣品和臺盼藍染料，首先需要由儀器內(nèi)部的步進馬達精確地完成加樣體積的控制。其次，因為可以全自動吸取樣品，所以全自動細胞計數(shù)儀會有1個轉(zhuǎn)盤或孔板放置其他待測樣品。對于排在后面的細胞若發(fā)生沉降，就需要在測試前對樣品進行吹打混懸，以防止細胞沉降導致測試結(jié)果出現(xiàn)偏差。而這2步操作，半自動細胞計數(shù)儀都只能通過手動來完成，從而引入人為操作誤差。

  
  

  同時，Vi-CELL BLU全自動細胞計數(shù)儀單個樣品檢測的取樣體積200±20uL，加樣體積不需要很準確，儀器自動會完成定量取樣。相比半自動細胞計數(shù)儀只有10-50uL的取樣體積，而且由手動操作完成。取樣體積大代表性更好，測試結(jié)果更容易接近真實值。

  
  

  02

  動態(tài)百圖分析

  Vi-CELL BLU全自動細胞計數(shù)儀測試細胞樣品，單個樣品拍攝的照片達到了100張，分析的細胞數(shù)量更多，1x10e6個/mL的細胞懸液拍攝100張照片的細胞數(shù)差不多2600個。單個樣品檢測拍攝的細胞數(shù)越多，檢測結(jié)果的系統(tǒng)誤差越小，測試結(jié)果的重復性和準確性也相應更高。

  
  

  其中1張照片（上左圖）和100張照片的分析柱狀圖

  
  

  03

  高通量和不間斷檢測

  全自動細胞計數(shù)儀的另一個特點是高通量和不間斷檢測，即待測樣品可以先放到轉(zhuǎn)盤或96孔板上，根據(jù)軟件中設置好的分析條件，儀器會自動按要求完成細胞的計數(shù)和活率分析。

  
  

  Vi-CELL BLU全自動細胞計數(shù)和活率分析儀一次最多可以放21個樣品（使用24位轉(zhuǎn)盤）或96個樣品（使用96孔板）進行分析測試。若使用24位轉(zhuǎn)盤，在檢測過程中還可以實現(xiàn)不間斷上樣測試，即樣品測試過程中，還可以放入新的待測樣品。

  
  

  
  

  綜上所述，全自動細胞計數(shù)儀在細胞樣品混懸和染色方面避免了人為操作帶來的誤差，同時百圖分析拍攝的細胞數(shù)多，結(jié)果代表性更好。所以，在細胞計數(shù)方面重復性和準確性上相比半自動插板式細胞計數(shù)儀更有優(yōu)勢。

  
  

  同時，全自動細胞計數(shù)儀的高通量和不間斷檢測功能，又滿足實驗室樣品量大，不同老師共用該儀器的檢測需求。并且每個樣品測試結(jié)束后，儀器會自動進行管路清洗，儀器本身還帶有自動過夜清洗功能，使得儀器一直處于待機狀態(tài)。所以，在操作便捷性上，全自動細胞計數(shù)儀也勝過半自動插板式細胞計數(shù)儀。

  
  

  以上這些特點可以用于區(qū)分我們使用的細胞計數(shù)儀是“全自動”還是“半自動”，同時也是為何全自動細胞計數(shù)儀性能上要優(yōu)于半自動的地方。希望大家可以通過這些方法來分辨“真”、“假”全自動細胞計數(shù)儀。