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2025-01-10 17:05:48脂質(zhì)組學(xué)技術(shù)
脂質(zhì)組學(xué)技術(shù)是一種研究生物體內(nèi)脂質(zhì)分子種類、結(jié)構(gòu)及功能的組學(xué)技術(shù)。它利用高通量分析手段，全面鑒定生物樣本中的脂質(zhì)成分，揭示脂質(zhì)在生物過程中的作用機(jī)制。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于疾病診斷、藥物研發(fā)及營養(yǎng)學(xué)等領(lǐng)域，具有高通量、高靈敏度及高分辨率等技術(shù)特點(diǎn)。相比其他組學(xué)技術(shù)，脂質(zhì)組學(xué)技術(shù)能提供更全面的脂質(zhì)信息，為疾病治療和新藥開發(fā)提供新的視角和策略。

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2023-05-25 16:47:05【ALP-TS-23008A】脂質(zhì)納米粒制備及表征解決方案
全文共3826字，閱讀大約需要12分鐘脂質(zhì)納米粒簡(jiǎn)介脂質(zhì)納米粒(Lipid Nanoparticle，LNP)是一種粒徑介于 10-1000 nm 的新型藥物遞送載體，由多種有機(jī)材料、無機(jī)材料、金屬 - 有機(jī)框架或這些材料組合而成，可作為化學(xué)與生物制劑之間傳遞的媒介，脂質(zhì)納米粒包裹藥物可顯著提高藥物的穩(wěn)定性與生物利用度。[1]目前脂質(zhì)納米粒廣泛應(yīng)用于mRNA疫苗遞送、腫瘤治 療、抗 炎和抗感染藥物載體、治 療神經(jīng)退行性疾病、抗瘧等領(lǐng)域。脂質(zhì)脂質(zhì)納米?？煞譃楣腆w脂質(zhì)脂質(zhì)納米粒(Solid Lipid Nanoparticles，SLN)和納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體(Nanostructured Lipid Carriers，NLC)。固體脂質(zhì)脂質(zhì)納米粒（SLN）主要是由固體脂質(zhì)、表面活性劑、有效成分和水制備的膠體顆粒，具有生物相容性好、有機(jī)溶劑使用少、體內(nèi)穩(wěn)定性高、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。但在儲(chǔ)藏過程中仍存在載藥量低、易凝膠化和藥物泄漏等問題；為此，研發(fā)人員嘗試在固體脂質(zhì)壁材中加入一定量的液體油脂，打亂了原來單純固體脂質(zhì)壁材的有序的晶體結(jié)構(gòu)，負(fù)載活性成分的量得到了提高，也使得晶體結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定，不易發(fā)生泄露等現(xiàn)象。[2-3]圖1 LNP的結(jié)構(gòu)[3]脂質(zhì)納米粒靶向性研究是藥物遞送熱點(diǎn)研究方向之一，考慮到納米藥物自身性質(zhì)的影響，可通過對(duì)其自身物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行調(diào)控，如粒徑、表面電荷、表面修飾物等，以此來增加脂質(zhì)納米粒藥物的滲透作用。目前還開發(fā)了各種粒徑可調(diào)控的納米遞藥系統(tǒng)，Li 等[4，5]構(gòu)建了一種酸刺激響應(yīng)型脂質(zhì)納米粒，可以在低 pH 條件下將其粒徑從 100 nm 縮減到5 nm。脂質(zhì)納米粒的初始尺寸有利于長(zhǎng)時(shí)間的血液循環(huán)，當(dāng)?shù)竭_(dá)腫瘤部位后，酸性環(huán)境刺激脂質(zhì)納米粒發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，粒徑縮小，有助于脂質(zhì)納米粒外滲和組織滲透。除 pH 響應(yīng)外，腫瘤組織處特異的酶環(huán)境、腫瘤細(xì)胞內(nèi)的還原環(huán)境和光、熱、磁等外部刺激都可以用于調(diào)控納米藥物的粒徑和表面電荷。[5]除平均粒徑外，脂質(zhì)納米粒的尾端大顆粒和過小顆粒也會(huì)影響納米藥物的效果，尾端大顆粒容易造成脂質(zhì)納米粒聚集，影響藥物的穩(wěn)定性和安全性，小顆粒（＜5nm）會(huì)被直接臟快速地過濾清除，影響藥物的有效性。過濾可有效減少脂質(zhì)納米粒藥物中的大顆粒和雜質(zhì)，提高脂質(zhì)納米粒藥物的穩(wěn)定性。Alpharmaca奧法美嘉平臺(tái)提供整套的脂質(zhì)納米粒均一性和穩(wěn)定性的解決方案，可用于快速評(píng)估、優(yōu)化脂質(zhì)納米粒的配方和工藝：高壓微射流均質(zhì)機(jī)、微流控技術(shù)對(duì)脂質(zhì)納米粒進(jìn)行均質(zhì)乳化分散處理、Nicomp粒度分析儀分析平均粒徑、AccuSizer顆粒計(jì)數(shù)器分析大粒子濃度，Lum穩(wěn)定性分析儀快速分析脂質(zhì)納米粒藥物穩(wěn)定性，Entegris-ANOW濾芯過濾雜質(zhì)及大顆粒。脂質(zhì)納米粒的制備技術(shù)傳統(tǒng)的脂質(zhì)納米粒制備技術(shù)，包括乙醇注入法、薄膜分散法、逆向蒸發(fā)法、凍融法等，存在粒徑分布廣和批間重復(fù)性大等問題，對(duì)藥物開發(fā)的臨床試驗(yàn)和生產(chǎn)具有很大的影響。為了解決傳統(tǒng)制備方法的弊端，微流控混合技術(shù)、高壓微射流技術(shù)、高壓均質(zhì)等新型制備技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。高壓微射流制備方法：制備水相、油相，經(jīng)過混合、剪切步驟形成初乳，初乳經(jīng)微射流均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，而后除 菌過濾得到脂質(zhì)納米粒。微流控混合技術(shù)制備方法：制備水相、油相，將水相油相經(jīng)過微流控均質(zhì)乳化后，除 菌過濾得到脂質(zhì)納米粒。無論是通過何種方法制備脂質(zhì)納米粒藥物，后續(xù)都需要對(duì)其平均粒徑、尾端大顆粒、穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)來篩選配方，PSS的Nicomp粒度分析儀可用于測(cè)試平均粒徑、AccuSizer顆粒計(jì)數(shù)器可用于測(cè)試大顆粒濃度、Lum穩(wěn)定性分析儀可用于快速篩選在不同工藝制備下脂質(zhì)納米粒藥物的穩(wěn)定性。圖2 高壓微射流法制備脂質(zhì)納米粒圖3 微流控混合技術(shù)法制備脂質(zhì)納米粒脂質(zhì)納米粒的粒徑控制脂質(zhì)納米粒的粒徑與其靶向性和有效性緊密相關(guān)，粒徑小且分布窄是脂質(zhì)納米粒藥物的理想粒徑。微流控技術(shù)通過微米通道控制流體的流動(dòng)和混合，具有良好的單分散性、可控性及重現(xiàn)性，可改善脂質(zhì)納米粒的均一性和藥物包封效率，并實(shí)現(xiàn)高通量生產(chǎn)，已成功應(yīng)用于Covid-19 mRNA 疫苗的制備[6]。高壓微射流均質(zhì)技術(shù)使物料在高壓作用下以高速度流經(jīng)腔體，經(jīng)過剪切、碰撞、空穴效應(yīng)等物理作用降低脂質(zhì)納米粒的平均粒徑，可對(duì)脂質(zhì)納米粒初乳進(jìn)一步均質(zhì)分散。高壓微射流均質(zhì)機(jī)PSI-20高壓微射流均質(zhì)機(jī)（小試兼中試型）采用固定結(jié)構(gòu)的均質(zhì)腔，通過電液傳動(dòng)的增壓器使物料在高壓作用下以極大的速度流經(jīng)交互容腔的微管通道，物料流在此過程中受到高剪切力、高碰撞力、空穴效應(yīng)等物理作用，使得平均粒徑降低、體系均一穩(wěn)定，由此獲得理想的均質(zhì)、分散、去團(tuán)聚的結(jié)果。圖4 PSI高壓微射流均質(zhì)機(jī)最 高2069 bar的均質(zhì)壓力，最 高處理量20L/h（PSI-20）采用特殊設(shè)計(jì)Y型腔，去除尾端大顆粒效果佳，物料的混合更均一，處理效率高。屏顯界面，數(shù)據(jù)可溯源：支持?jǐn)?shù)據(jù)導(dǎo)出設(shè)定壓力及實(shí)時(shí)壓力、監(jiān)測(cè)點(diǎn)溫度、實(shí)時(shí)流量、時(shí)間等。配置K型熱電偶：可用于實(shí)施監(jiān)測(cè)料液溫度。低噪音：運(yùn)行音量低于70分貝，工作環(huán)境友好型。NanoSpirit 系列微流控藥物制劑遞送平臺(tái)微流控制備系統(tǒng)通過制造泵和高壓輸送泵與微流控芯片連接。A相和B相可以按一定比例以恒定速度混合和乳化。在微流控芯片中，設(shè)計(jì)不同的流道結(jié)構(gòu)，控制不同的速度，使樣品在微流控芯片中湍流、層流或霧化，可以滿足預(yù)乳化或再乳化的要求。還可以將制備好的樣品通過高壓泵輸送到高壓微流控芯片中，通過沖擊力和剪切力控制粒徑，達(dá)到達(dá)到所需的包封率、粒徑、粒徑分布均一性等要求。圖5 NanoSpirit 系列高精度流量控制（＜5‰）。可提供多項(xiàng)可調(diào)參數(shù)（ 反應(yīng)量、流速等）。多型號(hào)微流芯片通用，適合多種載體類型。注射器規(guī)格：0.25，1，2.5，5，10 ml。自動(dòng)充液、反應(yīng)、前后排廢、清洗等工能平均粒徑與Zeta電位檢測(cè)脂質(zhì)納米粒徑不同使藥物富集在不同部位可現(xiàn)不同治 療 效果。應(yīng)用于腫瘤治 療領(lǐng)域的脂質(zhì)納米粒，由于腫瘤組織處血管豐富，血管壁間隙較寬且結(jié)構(gòu)完整性差，具有適宜尺寸的脂質(zhì)納米粒（60-200 nm）可通過 EPR 效應(yīng)在腫瘤處積聚，實(shí)現(xiàn)納米藥物的被動(dòng)靶向。脂質(zhì)納米粒電性一般呈中性或輕微負(fù)電性，在血液循環(huán)中，高正電性的脂質(zhì)納米粒會(huì)吸附蛋白質(zhì)，被迅速清除，進(jìn)而影響脂質(zhì)納米粒的藥代動(dòng)力學(xué)和生物分布。相比之下，中性脂質(zhì)納米粒以及帶有輕微負(fù)電荷的脂質(zhì)納米粒則顯示出延長(zhǎng)的半衰期。Zeta電位是衡量藥物穩(wěn)定性指標(biāo)之一，Zeta電位的絕 對(duì)值越高，體系越穩(wěn)定。Nicomp納米激光粒度儀系列Nicomp系列納米激光粒度儀采用動(dòng)態(tài)光散射原理檢測(cè)分析樣品的粒度分布，基于多普勒電泳光散射原理檢測(cè)ZETA電位。圖6  Nicomp 3000系列粒徑檢測(cè)范圍0.3nm-10μm，ZETA電位檢測(cè)范圍為+/-500mV搭載Nicomp多峰算法，可以實(shí)時(shí)切換成多峰分布觀察各部分的粒徑。高分辨率的納米檢測(cè)，Nicomp納米激光粒度儀對(duì)于小于10nm的粒子仍然顯示較好的分辨率和準(zhǔn)確度。圖7  高斯粒徑分布圖                      圖8  多峰粒徑分布圖顆粒分布檢測(cè)尾端大顆粒的存在會(huì)影響藥物本身的穩(wěn)定性，由于表面積增大，使得體系形成熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，容易發(fā)生脂質(zhì)納米粒聚集以降低體系自由能現(xiàn)象。尾端大顆粒的存在還會(huì)對(duì)身體機(jī)能造成影響，較大的顆粒（> 200 nm）容易積聚在肝臟和脾 臟中，影響藥物安全性；粒徑極?。? 5 nm）的顆粒則會(huì)被腎臟快速地過濾清除，影響藥物的有效性。AccuSizer顆粒計(jì)數(shù)器系列AccuSizer系列在檢測(cè)液體中顆粒數(shù)量的同時(shí)精確檢測(cè)顆粒的粒度及粒度分布，通過搭配不同傳感器、進(jìn)樣器，適配不同的樣本的測(cè)試需求，能快速而準(zhǔn)確地測(cè)量顆粒粒徑以及顆粒數(shù)量/濃度。圖9 AccuSizer系列檢測(cè)范圍為0.5μm-400μm（可將下限拓展至0.15μm）。0.01μm的超高分辨率，AccuSizer系列具有1024個(gè)數(shù)據(jù)通道，能反映復(fù)雜樣品的細(xì)微差異，為研發(fā)及品控保駕護(hù)航。靈敏度高達(dá)10PPT級(jí)別，即使只有微量的顆粒通過傳感器，也可以精 準(zhǔn)檢測(cè)出來。可出具法規(guī)報(bào)告LumiSpoc單粒子顆粒計(jì)數(shù)器LumiSpoc采用單粒子光散射技術(shù)（SPLS），通過在光學(xué)流通池中進(jìn)行流體動(dòng)力聚焦，將單個(gè)粒子排列成一條直線。通過調(diào)整流動(dòng)條件來調(diào)整樣品濃度，從而避免濃度峰值的影響。當(dāng)單個(gè)納米或者微米顆粒經(jīng)過特殊光束截面的激光束時(shí)，記錄其正向和側(cè)向散射的光強(qiáng)。根據(jù)米氏理論，將分類強(qiáng)度轉(zhuǎn)換為粒度分布密度。通過軟件分析顯示計(jì)數(shù)分布、顆粒濃度。在行業(yè)內(nèi)已有使用Lumispoc用于顆粒濃度的監(jiān)測(cè)成功案例。圖10 LumiSpoc單粒子顆粒計(jì)數(shù)器顆粒粒徑檢測(cè)范圍：50 nm ~ 8 μm（取決于樣品）顆粒濃度檢測(cè)范圍：1 × 106 ml-1 ~ 1 × 109 ml-1進(jìn)樣體積：250 μl穩(wěn)定性分析檢測(cè)穩(wěn)定性是評(píng)價(jià)藥物制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，也是確定藥物制劑使用期限的主要依據(jù)。藥物制劑若發(fā)生分解、變質(zhì)，可導(dǎo)致藥效降低，甚至產(chǎn)生或增加毒副作用，危及患者的身體健康和生命安全，Zeta電位、尾端大顆粒濃度都是衡量藥物穩(wěn)定性的指標(biāo)之一。除此之外，還可以使用穩(wěn)定性分析儀測(cè)量樣品的分離、沉降、懸浮或澄清、浮離、聚集、凝聚或產(chǎn)品存放期以及粒徑分布。LUM穩(wěn)定性分析儀Lum穩(wěn)定性分析儀可以直接測(cè)量整個(gè)樣品的分散體的穩(wěn)定性，檢測(cè)和區(qū)分各種不穩(wěn)定現(xiàn)象，如上浮、絮凝、聚集、聚結(jié)、沉降等，通過測(cè)量結(jié)果可用來開發(fā)新的配方和優(yōu)化現(xiàn)有的配方及工藝。圖11 LUM穩(wěn)定性分析儀快速、直接測(cè)試穩(wěn)定性，無需稀釋，溫度范圍寬廣可同時(shí)測(cè)8個(gè)樣品，測(cè)量及辨別不同的不穩(wěn)定現(xiàn)象及不穩(wěn)定性指數(shù)加速離心，最高等效2300倍重力加速度過濾經(jīng)高壓微射流均質(zhì)機(jī)或微流控技術(shù)處理的脂質(zhì)納米粒，還需進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪^濾工藝，用于去除脂質(zhì)納米粒藥物中的尾端大顆粒和雜質(zhì)，提高藥物的穩(wěn)定性和安全性。濾膜的材質(zhì)和型號(hào)將影響脂質(zhì)納米粒藥物的過濾效率和效果，綜合考慮膜與納米藥物配方的兼容性、成本、效率等多方面因素選擇合適的濾膜。Entegris濾芯Entegris-Anow是一家高分子微孔膜過濾企業(yè)，專業(yè)從事MCE、Nylon、PES、PVDF、PTFE等（膜孔徑為0.03μm~10μm）微孔膜的研發(fā)及生產(chǎn)，具有二十多年服務(wù)與醫(yī)藥客戶經(jīng)驗(yàn)，并為全 球生物制藥、醫(yī)療器械、食品飲料、實(shí)驗(yàn)室分析、微電子及工業(yè)等領(lǐng)域的客戶提供過濾、分離和凈化解決方案。
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2025-02-01 09:10:17尼康共聚焦顯微鏡如何組圖
尼康共聚焦顯微鏡如何組圖 尼康共聚焦顯微鏡作為一種高端的成像工具，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和材料科學(xué)等領(lǐng)域，能夠提供高分辨率的三維圖像。在顯微鏡的使用過程中，如何組圖成為了一個(gè)關(guān)鍵問題。本文將深入探討尼康共聚焦顯微鏡的組圖過程，包括操作步驟、技術(shù)要點(diǎn)以及注意事項(xiàng)，以幫助研究人員和實(shí)驗(yàn)室工作人員更好地利用這一工具進(jìn)行科學(xué)研究。 1. 組圖前的準(zhǔn)備工作 在開始組圖之前，確保顯微鏡已經(jīng)正確安裝并且所有硬件設(shè)備處于正常工作狀態(tài)。首先需要校準(zhǔn)光路和顯微鏡的對(duì)焦系統(tǒng)，確保成像的清晰度和準(zhǔn)確性。對(duì)于需要組圖的樣品，好先進(jìn)行樣品準(zhǔn)備工作，例如固定、染色等，以增強(qiáng)成像效果。 2. 設(shè)置共聚焦顯微鏡的掃描模式 尼康共聚焦顯微鏡通常具備多種掃描模式，其中常用的是點(diǎn)掃描模式和線掃描模式。在選擇合適的掃描模式時(shí)，需要根據(jù)樣品的性質(zhì)和所需的圖像分辨率進(jìn)行選擇。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞生物學(xué)研究來說，點(diǎn)掃描模式通常更為合適，因?yàn)樗軌蛱峁└叩目臻g分辨率。 3. 調(diào)整圖像獲取參數(shù) 在圖像獲取過程中，用戶需要根據(jù)樣品的實(shí)際情況調(diào)整掃描速度、光源強(qiáng)度、增益等參數(shù)。合理設(shè)置這些參數(shù)有助于提高圖像的信噪比，避免過度曝光或欠曝光的問題，從而獲取清晰、細(xì)致的圖像。 4. 圖像拼接與重建 在進(jìn)行多點(diǎn)掃描時(shí)，可能需要將多個(gè)圖像拼接成一個(gè)大圖。尼康共聚焦顯微鏡提供了自動(dòng)拼接的功能，但有時(shí)需要手動(dòng)微調(diào)拼接位置，確保圖像邊緣的對(duì)接精確無誤。拼接過程中需要注意圖像的重疊區(qū)域，重疊部分越多，拼接效果就越好。對(duì)于三維圖像重建，可以利用共聚焦顯微鏡的軟件對(duì)不同深度的切片進(jìn)行合成，得到完整的三維結(jié)構(gòu)圖像。 5. 數(shù)據(jù)處理與分析 組圖完成后，后續(xù)的圖像分析工作同樣重要。尼康顯微鏡通常配備專業(yè)的軟件，如NIS-Elements，用于圖像處理與分析。用戶可以通過這些軟件進(jìn)行圖像的增強(qiáng)、去噪、對(duì)比度調(diào)整等操作。利用軟件的量化功能，可以對(duì)圖像中的特定區(qū)域進(jìn)行測(cè)量與分析，進(jìn)一步挖掘數(shù)據(jù)背后的科學(xué)信息。 6. 結(jié)果輸出與保存 處理完成的圖像可以通過顯微鏡的軟件輸出為不同格式，如TIFF或JPEG等。為了確保數(shù)據(jù)的完整性和可重復(fù)性，建議保存原始圖像和分析后的圖像。通過合理命名和分類保存文件，可以在后續(xù)的研究中方便查找與比對(duì)。 結(jié)語 尼康共聚焦顯微鏡作為一種高精度成像設(shè)備，其組圖過程不僅僅依賴于設(shè)備本身，還需要操作人員具備一定的技術(shù)水平和經(jīng)驗(yàn)。掌握了合適的掃描模式、參數(shù)調(diào)整和后期圖像處理方法，可以充分發(fā)揮其在各類科研領(lǐng)域中的優(yōu)勢(shì)，獲取高質(zhì)量的圖像數(shù)據(jù)。在使用過程中，精確的操作與科學(xué)的分析方法是保證數(shù)據(jù)可靠性和實(shí)驗(yàn)成果的重要保障。 這樣的一篇文章在結(jié)構(gòu)上層次清晰、內(nèi)容深入，并能夠吸引目標(biāo)受眾，符合SEO優(yōu)化的要求。
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2023-02-17 13:16:01核酸脂質(zhì)納米?？破铡猂NA-LNP包封率測(cè)定
自新冠mRNA疫苗成功上市以來，脂質(zhì)納米粒（Lipid nanoparticle，LNP）已成為mRNA、siRNA、pDNA等核酸的優(yōu)先遞送載體，廣泛用于mRNA疫苗及治愈。微流控技術(shù)是目前制備核酸脂質(zhì)納米粒常用的技術(shù)，包封率則是評(píng)價(jià)其制備效果的重要指標(biāo)之一，下面就為大家介紹使用RiboGreen測(cè)定RNA-LNP包封率的方法。1 RiboGreen檢測(cè)RNA-LNP包封率的原理1.1RNA-LNP包封率（Encapsulationefficiency，EE）：包裹在脂質(zhì)納米粒內(nèi)部的RNA占RNA-LNP溶液中全部RNA的比例。1.2 RiboGreen檢測(cè)RNA原理：RiboGreen是一種用于定量檢測(cè)溶液中RNA含量的超敏感熒光核酸染料，當(dāng)RiboGreen熒光染料處于溶液狀態(tài)時(shí)，幾乎沒有熒光活性，與RNA結(jié)合時(shí)，其熒光活性將增加1000倍。RiboGreen-RNA復(fù)合物的熒光激發(fā)波長(zhǎng)約500nm，發(fā)射波長(zhǎng)約525nm，通過酶標(biāo)儀，建立已知濃度RNA的標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得到樣品RNA濃度。1.3 RiboGreen檢測(cè)包封率原理：分別測(cè)定LNP-RNA溶液中游離RNA濃度，以及用Triton-100破壞LNP結(jié)構(gòu)后，溶液中全部的RNA濃度，兩者的差值就是包封在LNP內(nèi)部的RNA濃度。通過以下公式即可計(jì)算得到包封率結(jié)果。圖1核酸脂質(zhì)納米顆粒的示意圖2操作要點(diǎn)2.1制備Buffer1X TE Buffer：使用試劑盒中20X TE Buffer稀釋。2% Triton-TE buffer：使用Triton-100與1X TE buffer以體積比1：50配制。2.2添加RNA-LNP樣品至全黑96孔板根據(jù)制備時(shí)RNA的量，可以大致計(jì)算需要稀釋的倍數(shù)。例如，已知 mRNA的原始質(zhì)量或濃度，使用銘汰MicroFlow S進(jìn)行RNA-LNP合成，根據(jù)稀釋、超濾等處理后的最終體積，即可估算大致總RNA濃度。同時(shí)，假設(shè)90%的包封率，即可估算游離RNA濃度。然后根據(jù)標(biāo)曲的濃度計(jì)算需要稀釋的大致倍數(shù)。這樣我們就可以使用1X TE buffer將RNA-LNP稀釋適合倍數(shù)以檢測(cè)LNP外游離RNA濃度，使用2% Triton-TE buffer將RNA-LNP稀釋適合倍數(shù)以檢測(cè)總RNA濃度，建議每項(xiàng)檢測(cè)至少兩個(gè)不同稀釋倍數(shù)。然后，分別移取100 μL稀釋后的樣本，添加到全黑96孔板。2.3標(biāo)樣添加一般直接使用試劑盒中100 μg/mL的RNA標(biāo)樣，也可以使用與待測(cè)樣本類似的RNA標(biāo)樣來建立標(biāo)準(zhǔn)曲線?？梢韵扔?X TE buffer將原始標(biāo)樣稀釋到工作濃度4 μg/mL，然后參考表1的體積比，配制為一定濃度梯度的標(biāo)樣。分別移取各濃度的標(biāo)樣100 μL，添加到全黑96孔板中。注：*最終RNA濃度考慮了步驟2.4添加RiboGreen染料后的濃度當(dāng)RNA-LNP樣品及特定濃度的標(biāo)樣添加到96孔板后，需要在37℃下避光孵育10 min，以使RNA-LNP在Triton buffer中充分裂解。2.4 RiboGreen染料添加把試劑盒中RiboGreen試劑，使用1X TE Buffer按照1：100的比例稀釋，例如需要2000 μL RiboGreen染料，可將20 μL的RiboGreen試劑添加到1980 μL的1X TE Buffer中。然后各取100 μL加入到已經(jīng)加有樣品的96孔板中，37℃下避光孵育5min。圖2 樣品添加2.5酶標(biāo)儀檢測(cè)打開酶標(biāo)儀，選擇熒光模式，激發(fā)光485nm，發(fā)射光528nm，讀數(shù)，記錄數(shù)據(jù)。 2.6數(shù)據(jù)處理及分析    將每個(gè)樣本測(cè)得的熒光值減去空白熒光值，即可得到實(shí)際熒光值。根據(jù)標(biāo)樣的熒光值和濃度梯度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。把樣品熒光值代入回歸方程，乘以稀釋倍數(shù)，即可得到樣本的RNA濃度。根據(jù)1.3中包封率公式計(jì)算得到包封率結(jié)果。圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線3 小結(jié)準(zhǔn)確的包封率測(cè)定對(duì)于評(píng)價(jià)RNA-LNP的包封效果至關(guān)重要，影響著后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的開展。RNA-LNP包封率測(cè)定一般使用商業(yè)化的試劑盒，雖然操作環(huán)節(jié)較多，但只要細(xì)心規(guī)范，操作起來也并不難，相信大家可以得到準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。納米藥物制備系統(tǒng)應(yīng)用范圍：
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2022-11-21 12:04:41【PSS-TN-22027A】USP 729 脂質(zhì)注射乳劑中的整體粒徑分布
全文共2173字，閱讀大約需要7分鐘摘要：用于靜脈注射的脂質(zhì)注射乳劑是大豆油制的無菌水包油乳劑，檢測(cè)脂質(zhì)體注射乳劑的平均粒徑大小以及尾端大顆粒分布對(duì)于人體健康顯得十分關(guān)鍵。USP 729著重介紹了采用光散法及光阻法來檢測(cè)脂質(zhì)注射乳劑平均粒徑以及尾端大顆粒分布的兩種方法。奧法美嘉公司旗下的Nicomp Z3000以及Accusizer A7000 APS兩款儀器很好的滿足了USP 729的要求，為客戶的檢測(cè)提供了完整的解決方案。關(guān)鍵詞：脂質(zhì)注射乳劑、平均粒徑、尾端大顆粒、Nicomp Z3000、Accusizer A7000 APS乳狀注射液又稱脂肪乳注射液，是水包油的分散體系, 外觀呈半透明或不透明的乳狀液體, 為熱力學(xué)不穩(wěn)定體系。其制備工藝一般采用高壓均質(zhì)法或微射流法, 無論采用哪種制備方法, 脂肪乳的粒徑都無法得到完全均一的值, 存在一定粒徑分布范圍。通常, 在脂肪乳中,當(dāng)油脂的密度低于周圍水媒介密度約10%時(shí), 乳析現(xiàn)象就會(huì)產(chǎn)生。乳析的乳劑只要輕輕攪拌, 乳滴仍能重新分布。但當(dāng)脂滴合并成直徑超過1μm的大脂滴時(shí), 脂滴的合并便是不可逆的過程, 脂滴會(huì)逐漸聚集, 1μm脂滴可“生長(zhǎng)”成 5μm甚至更大的脂滴顆粒, 直至自由脂滴從乳劑中析出，成為不穩(wěn)定脂肪乳。1、工作原理USP 729中著重介紹了檢測(cè)平均粒徑大小的動(dòng)態(tài)光散射法與檢測(cè)尾端大顆粒的光阻法。檢測(cè)平均粒徑大小動(dòng)態(tài)光散射（DLS）動(dòng)態(tài)光散射（DLS），同樣理解為與光子相關(guān)的光譜法（PCS）。DLS或者說PCS技術(shù)的基礎(chǔ)是分析由于懸浮在液體中的任何粒子（包括乳粒）的隨機(jī)布朗運(yùn)動(dòng)或擴(kuò)散而引起的散射光強(qiáng)隨時(shí)間的波動(dòng)。光強(qiáng)由合適的檢測(cè)器（例如光電倍增管）以給定的入射角度（通常為90度）測(cè)量，該檢測(cè)器可以測(cè)量由懸浮顆粒運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致的快速隨機(jī)的散射光強(qiáng)度，測(cè)量得到的光強(qiáng)數(shù)據(jù)用來計(jì)算光強(qiáng)自相關(guān)管函數(shù)，利用斯托克-愛因斯坦方程計(jì)算樣品粒徑大小。經(jīng)典光散射經(jīng)典光散射，基于米氏散射理論。測(cè)量散射光角度來反映散射光強(qiáng)的變化，通常在大范圍的檢測(cè)角。檢測(cè)尾端大顆粒光阻法單個(gè)粒子通過狹窄的光感區(qū)時(shí)阻擋了一部分入射光，引起到達(dá)檢測(cè)器的入射光強(qiáng)度瞬間降低，強(qiáng)度信號(hào)的衰減幅度理論上與粒子橫截面（假設(shè)橫截面積小于光感區(qū)的寬度），即粒子直徑的平方成比例。用系列標(biāo)準(zhǔn)粒子建立粒徑與強(qiáng)度信號(hào)大小的校正曲線。儀器測(cè)得樣品中乳粒通過光感區(qū)產(chǎn)生的信號(hào)，根據(jù)校正曲線計(jì)算出乳粒的粒徑及加權(quán)體積。使用單粒子光學(xué)傳感技術(shù)傳感器時(shí)，需知道重合限與最 佳流速。2、相關(guān)儀器及標(biāo)準(zhǔn)在儀器標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)試過程中規(guī)定了樣品體積精度、樣品流速、粒度響應(yīng)曲線直徑校準(zhǔn)、傳感器分辨率的各項(xiàng)要求。平均粒徑（1） 儀器：采用動(dòng)態(tài)光散射法的設(shè)備（可帶自動(dòng)稀釋）如Nicomp Z3000（2） 水：將蒸餾水透過一個(gè)0.2μm的濾膜過濾，通過超聲去除里面的氣泡，或者用保存在玻璃容器中注射用的無菌水。（3） 標(biāo)準(zhǔn)粒子：可溯源的苯乙烯乳液標(biāo)準(zhǔn)粒子或其他合適的納米球。100nm，250nm和400nm三種不同尺寸標(biāo)準(zhǔn)的粒子4） 樣品稀釋濃度：采用什么樣的最 佳稀釋方案以達(dá)到適當(dāng)?shù)纳⑸鋸?qiáng)度為基礎(chǔ)來分析是由儀器的規(guī)格決定的。因此，最 終樣品中乳膠的濃度必須根據(jù)所使用的動(dòng)態(tài)光散射設(shè)備決定。（5） 系統(tǒng)適應(yīng)性通過標(biāo)準(zhǔn)：按照標(biāo)準(zhǔn)操作測(cè)量，得到樣品光強(qiáng)徑平均粒徑以及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)偏差。該系統(tǒng)適用于當(dāng)樣品達(dá)到穩(wěn)定溫度后，結(jié)果穩(wěn)定，并且平均三次測(cè)量平均粒徑的結(jié)果。變異系數(shù)不能超過NIST-可追溯平均粒徑的10%。尾端大顆粒（1）儀器：采用合適的具有或沒有自動(dòng)稀釋的并且由計(jì)算機(jī)控制操作的光阻法儀器進(jìn)行測(cè)量。如Accusizer A7000 APS（2）水：將蒸餾水透過一個(gè)0.2μm的濾膜過濾，通過超聲去除里面的氣泡，或者用保存在玻璃容器中注射用的無菌水。（3）標(biāo)準(zhǔn)粒子：可溯源的苯乙烯乳液標(biāo)準(zhǔn)粒子或其他合適的納米球。光阻法儀器的粒徑測(cè)量與計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性要通過兩個(gè)不同的標(biāo)準(zhǔn)混合粒子5和10μm混標(biāo)獲得。（4）樣品稀釋濃度：不帶有自動(dòng)稀釋的儀器需手動(dòng)進(jìn)行稀釋。配備了自動(dòng)稀釋系統(tǒng)，濃縮的樣品可以通過注射器或者特氟隆樣品線直接進(jìn)入儀器進(jìn)行分析，然后自動(dòng)稀釋，優(yōu)化液滴濃度進(jìn)行分析。（5）系統(tǒng)適應(yīng)性通過標(biāo)準(zhǔn)：設(shè)置儀器的閾值為1.8μm，上限延申至50μm. 重復(fù)三次測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)粒子的粒徑與每毫升數(shù)量。相關(guān)結(jié)果的平均粒徑應(yīng)該符合標(biāo)粒的期望值，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在10%以內(nèi)，粒徑準(zhǔn)確度在90%到110%以內(nèi)。另外，粒子每毫升顆粒數(shù)應(yīng)該與標(biāo)準(zhǔn)粒子濃度偏差在10%以內(nèi)。（6）樣品通過標(biāo)準(zhǔn)：將儀器的閾值設(shè)定為1.8μm，上限延申至50μm。在任何情況下，只要測(cè)量5μm粒徑以上的粒子數(shù)足夠多，它就代表了樣品中由足夠多的球狀粒子，這些粒子在統(tǒng)計(jì)學(xué)上代表了原生乳液中的尾端大粒子。大于5μm的乳粒加權(quán)總體積占油相體積的百分比，其結(jié)果不得超過0.05%。3、Nicomp Z3000 & Accusizer A7000 APS奧法美嘉旗下的Nicomp Z3000 & Accusizer A7000 APS型號(hào)設(shè)備是典型的動(dòng)態(tài)光散射法和光阻法原理的設(shè)備，采用Nicomp 、SPOS單顆粒光學(xué)傳感技術(shù)，通過對(duì)樣品的準(zhǔn)確分析，集檢測(cè)、數(shù)據(jù)處理及自動(dòng)沖洗等功能一體，操作便捷、高效。Nicomp Z3000相比于其他廠家的DLS設(shè)備，在常用的高斯分布下，又用自己獨(dú)特的Nicomp算法，可準(zhǔn)確分辨出樣品是否屬于多峰，給客戶提供準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，滿足客戶的需求。Nicomp Z3000可以檢測(cè)0.3nm-10μm的準(zhǔn)確粒徑分布。Accusizer A7000 APS采用SPOS單顆粒光學(xué)傳感技術(shù)，通過對(duì)樣品進(jìn)行自動(dòng)稀釋，有效避免了人工操作導(dǎo)致的檢測(cè)誤差，集檢測(cè)、數(shù)據(jù)處理及自動(dòng)沖洗等功能一體，操作便捷、高效。使用Accusizer APS光學(xué)粒度分析儀測(cè)試5μm和10μm的混合標(biāo)粒（批號(hào)：UH13A），結(jié)果如下圖所示：參考資料USP 729脂質(zhì)注射乳劑中球狀大小分布
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2023-02-12 17:59:15單組份聚氨酯膠粘劑研究(低場(chǎng)核磁技術(shù))
單組份聚氨酯膠粘劑研究(低場(chǎng)核磁技術(shù))什么是聚氨酯膠粘劑？聚氨酯膠粘劑是指在分子鏈中含有氨基甲酸酯基團(tuán)（－NHCOO－）或異氰酸酯基（－NCO）的膠粘劑。聚氨酯膠粘劑分為多異氰酸酯和聚氨酯兩大類。多異氰酸酯分子鏈中含有異氰基（-NCO）和氨基甲酸酯基（-NH-COO-），故聚氨酯膠粘劑表現(xiàn)出高度的活性與極性。與含有活潑氫的基材，如泡沫、塑料、木材、皮革、織物、紙張、陶瓷等多孔材料，以及金屬、玻璃、橡膠、塑料等表面光潔的材料都有優(yōu)良的化學(xué)粘接力。聚氨酯膠粘劑的多樣性為許多粘接難題都準(zhǔn)備了解決的方法，且特別適用于其他類型膠粘劑不能粘接或粘接有困難的地方。此外，聚氨酯膠粘劑還具有韌性可調(diào)節(jié)、粘合工藝簡(jiǎn)便、及佳的耐低溫性能以及優(yōu)良的穩(wěn)定性等等特性。正是由于聚氨酯膠粘劑這種優(yōu)良的粘接性能和對(duì)多種基材的粘接適應(yīng)性，使其應(yīng)用領(lǐng)域不斷擴(kuò)大，在國內(nèi)外近年來成為發(fā)展最快的膠粘劑。單組份聚氨酯膠粘劑的特點(diǎn)及應(yīng)用聚氨酯膠粘劑除具有無毒、無污染、使用方便等優(yōu)點(diǎn)，還具有其它膠粘劑所不具有的優(yōu)點(diǎn)，即優(yōu)良的耐低溫、耐溶劑、耐老化、耐臭氧及耐細(xì)菌性能。廣泛應(yīng)用于彈性橡膠地墊、硬質(zhì)橡膠地磚和鋪設(shè)塑膠跑道運(yùn)動(dòng)場(chǎng)中。高速列車的生產(chǎn)對(duì)于聚氨酯膠粘劑的使用需求也大大增加，聚氨酯在車輛上承擔(dān)著玻璃粘接、地板粘接、嵌縫填充、密封防水等各種bi不可少的作用。低場(chǎng)核磁技術(shù)用于單組份聚氨酯膠粘劑研究檢測(cè)聚氨酯交聯(lián)度一直都是行業(yè)難題,傳統(tǒng)的溶脹法測(cè)試精度低、受人為主觀因素較大。在核磁法中,聚合物弛豫衰減曲線隨樣品內(nèi)部組分狀態(tài)的改變而改變,通過核磁弛豫技術(shù)可快速無損獲得交聯(lián)鏈與非交聯(lián)鏈信號(hào)以得到交聯(lián)度。高分子聚合物內(nèi)的溶劑部分流動(dòng)性*強(qiáng),衰減最慢;非交聯(lián)段具有一定的分子運(yùn)動(dòng)特性,衰減相對(duì)較慢;而交聯(lián)段所受束縛程度大,分子運(yùn)動(dòng)特性小,衰減較快。相比傳統(tǒng)的SE或CPMG序列采集的不同,采用MSE-CPMG新序列采集時(shí),通過施加組合脈沖使得核磁共振信號(hào)在死時(shí)間范圍內(nèi)來回反轉(zhuǎn)從而盡量維持原始的核磁共振信號(hào)強(qiáng)度,以此實(shí)現(xiàn)更加短的弛豫信息采集,交聯(lián)度的測(cè)試準(zhǔn)確性進(jìn)一步提高。紐邁VTMR系列低場(chǎng)核磁分析儀低場(chǎng)核磁技術(shù)研究單組份聚氨酯膠粘劑原理:低場(chǎng)核磁共振分析技術(shù)是利用脈沖激發(fā)材料樣品中的氫質(zhì)子發(fā)生共振,停止脈沖后,氫質(zhì)子發(fā)生弛豫。樣品中處于不同狀態(tài)的氫質(zhì)子的弛豫時(shí)間是不同的。對(duì)其弛豫信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)分析研究可以直接或者間接檢測(cè)材料的某些特性。低場(chǎng)核磁法是利用低場(chǎng)核磁共振分析技術(shù),通過對(duì)烴鏈上的H分子運(yùn)動(dòng)進(jìn)行評(píng)價(jià),根據(jù)弛豫分析模型解析出樣品的交聯(lián)度。測(cè)試過程無需化學(xué)品、對(duì)樣品無損,測(cè)試速度快,一般3分鐘以內(nèi)即可完成測(cè)試。交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)模型
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