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2025-01-10 10:53:05模式生物流式分選系統(tǒng)
模式生物流式分選系統(tǒng)是一種專門用于模式生物(如斑馬魚、小鼠等)實驗中細胞或微粒子的流式分選設(shè)備。它采用先進技術(shù),具有分選精確、操作簡便等特點,能夠?qū)崿F(xiàn)對模式生物樣本的高效、準(zhǔn)確分選。該系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究、藥物研發(fā)等領(lǐng)域,為科研人員提供了重要的實驗工具,有助于加速新藥研發(fā)進程,推動生物醫(yī)學(xué)研究的深入發(fā)展。

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2022-12-01 20:08:12流式高手來PK | 流式分選小技巧投票評選
為期10天的流式分選小技巧征集已經(jīng)結(jié)束啦,大家對流式分選都有很多心得哦。經(jīng)過5位貝克曼應(yīng)用和市場專家的評選,有11位小伙伴的作品入圍本輪大眾投票。讓我們先來“康康”其中兩個吧~小技巧1:對于單克隆的孔板分選,可以適當(dāng)稀釋樣本。放慢進樣流速。得到活率更好的單細胞。對于細胞團塊:在樣本里加入適當(dāng)?shù)腅DTA和DNAase來防止。對于極脆弱的細胞分選:可以讓儀器運行時的進樣壓差控制在0.5以內(nèi)。小技巧2:在細胞制備、培養(yǎng)階段,如果該培養(yǎng)細胞是貼壁細胞,需用先用胰酶消化細胞,然后收集待測樣品細胞,離心、洗滌、封閉后標(biāo)記熒光素偶聯(lián)抗體即可。還有很多非常實用的小技巧如果你也喜歡,就去掃碼為他點個贊吧!我們將根據(jù)點贊票數(shù)評選:一等獎:Apple AirPods Por降噪耳機二等獎:西部數(shù)據(jù)移動硬盤三等獎:機械鍵盤*其他入圍作品也可以獲得入圍獎:超聲波眼鏡清洗機沒有入圍的小伙伴不要灰心,我們還有早鳥獎放送哦~投票時間2022年12月1日-12月7日掃描上方二維碼快來你最心怡的3個小技巧點贊投票吧!*投票結(jié)束10個工作日會郵寄獎品,請大家關(guān)注哦!
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2022-11-22 20:20:26流式高手來PK | 流式分選小技巧有獎?wù)骷?/a>
你有沒有被這些問題困惑:什么方法可以提高分選的細胞得率?分選樣本制備的時候怎樣避免團塊?液流如何才能保持穩(wěn)定?……遇到這些問題你又是怎樣用聰明的小腦袋解決的呢?比如當(dāng)我們發(fā)現(xiàn)分選細胞死亡率高,可以通過調(diào)整collecting buffer改善。以293T細胞為例,collecting buffer中添加FBS或BSA可以顯著降低細胞死亡率至5%以下[1]。你有什么流式分選的小技巧呢?快來參與流式高手PK大賽,把你的分選小技巧分享給大家吧!還有驚喜好禮等著滿滿才氣的你哦~
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2023-06-09 11:41:52人人都是流式高手:Tumor-infiltrating lymphocytes(TILs) 分選秘籍
Tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) 是指浸潤腫瘤組織的淋巴細胞。淋巴細胞是免疫系統(tǒng)中的重要組成部分,負責(zé)識別和攻擊異常細胞,包括癌細胞。流式細胞術(shù)對TILs的分選提供了一個重要的工具,用于表征、純化和研究浸潤腫瘤的免疫細胞群。它有助于研究人員了解TILs的組成、功能和潛在的治 療相關(guān)性,推動我們對腫瘤與免疫相互作用的理解。我們使用流式細胞術(shù)來分選TILs主要應(yīng)用場景如下:01、鑒定和表征:流式細胞術(shù)允許我們根據(jù)TILs表面標(biāo)記物的特征來鑒定和表征不同的亞群。通過使用針對CD3、CD4、CD8和其他免疫細胞標(biāo)記物的特異性抗體來標(biāo)記細胞,我們可以區(qū)分和定量TILs中的各種T細胞亞群。這有助于我們了解腫瘤微環(huán)境中TILs的組成和多樣性。02、特定TIL亞群的純化:流式細胞術(shù)分選使我們能夠分離和純化感興趣的特定TIL亞群。通過基于表面標(biāo)記物的表達,對細胞進行分選和篩選,我們可以收集純凈的TIL亞群用于進一步的下游應(yīng)用。這使研究人員能夠研究特定的TIL亞群,并研究其功能特性或基因表達譜。03、功能分析:分選后的TILs可用于功能性分析,以評估其免疫活性和功能。例如,可以測試分選后的TILs的增殖能力、細胞因子產(chǎn)生、對腫瘤細胞的細胞毒性或其他功能性實驗。這些分析提供了有關(guān)TIL亞群功能能力和潛在抗腫瘤免疫反應(yīng)的見解。04、基因組學(xué)或蛋白質(zhì)組學(xué)分析:流式細胞術(shù)分選可以獲得純凈的TIL細胞群,進而進行基因組學(xué)或蛋白質(zhì)組學(xué)分析。通過分析分選TILs的基因表達或蛋白質(zhì)譜,研究人員可以更深入地了解與TILs在腫瘤免疫中相關(guān)的分子機制和信號通路。然而不同于外周血、脾 臟中的淋巴細胞,TILs的流式檢測存在更多的不確定性,需要有效優(yōu)化包括樣本處理、配色方案、上樣條件以及分析方法等實驗設(shè)計的各個方面,才能實現(xiàn)更為準(zhǔn)確、真實的多色復(fù)雜樣本流式檢測。圖1為外周血來源樣本淋巴細胞分型的流式檢測數(shù)據(jù),由圖可見,淋巴細胞群體T、B細胞分群明顯,T細胞亞群也可清晰區(qū)分。另外,我們也可以看到,該數(shù)據(jù)以FSC通道設(shè)定閾值,其閾值設(shè)定值較低,導(dǎo)致碎片及噪音信號干擾明顯,不過由于血液樣本碎片較少,與細胞分群明顯,故而對最 終結(jié)果的影響并不大。圖1 血液樣本淋巴細胞免疫分型流式數(shù)據(jù)然而,當(dāng)我們使用同樣的模板檢測腫瘤組織樣本時,數(shù)據(jù)就出現(xiàn)了明顯問題。實體瘤組織細胞構(gòu)成復(fù)雜,并且在將組織樣本制備成單細胞樣本的過程中會產(chǎn)生大量的細胞碎片,這些雜質(zhì)細胞及碎片會對流式檢測造成顯著的干擾。如圖2所示,T細胞中出現(xiàn)了大量CD19和CD3雙陽性細胞,不符合已有文獻報道的結(jié)果。這些雙陽性細胞主要是由于雜質(zhì)細胞及碎片的非特異干擾導(dǎo)致的。這些干擾對于流式檢測及流式分選的準(zhǔn)確性有很大影響,甚至?xí)?dǎo)致得出錯誤的結(jié)論。圖2 浸潤腫瘤組織的淋巴細胞免疫分型流式數(shù)據(jù)那么,基于以上數(shù)據(jù),我們應(yīng)該如何優(yōu)化實驗設(shè)計以提高浸潤腫瘤組織的淋巴細胞分選的準(zhǔn)確性呢?這里給大家以下幾點建議:01、增加Pan-Marker檢測:這里的Pan-Marker是指目標(biāo)細胞群均表達,但其他細胞群體及碎片不表達的表面標(biāo)記。CD45廣泛表達于免疫系統(tǒng)的各個細胞亞群上,但在非免疫細胞上沒有表達或表達很低。因此,在檢測淋巴細胞等免疫細胞時,可通過檢測CD45是否表達來區(qū)分免疫細胞及非免疫細胞,以達到排除雜質(zhì)細胞干擾的目的。02、優(yōu)化樣本制備方案:對復(fù)雜樣本來講,樣本制備方案是否合適決定了流式實驗的成功率??筛鶕?jù)文獻報道并通過預(yù)實驗來選擇最 佳的消化酶配方和消化時間,在確保細胞得率的同時盡量減少雜質(zhì)干擾并最 大限度的保存細胞活性及功能。此外,選擇合適的細胞分離手段進行目的細胞的富集。例如,若針對淋巴細胞檢測,利用Ficoll或Percoll密度梯度離心法富集單個核細胞,可有效去除脂肪、碎片及雜質(zhì)細胞的干擾。03、進行Fc封閉:組織浸潤的多種細胞,特別是單核/巨噬細胞以及DC細胞高表達抗體Fc端的受體。這些細胞在進行流式抗體標(biāo)記時,即使不表達相關(guān)抗原,也可通過Fc受體非特異性的結(jié)合流式抗體的Fc端,從而導(dǎo)致非特異信號。要解決這一問題,可購買商業(yè)化Fc封閉試劑,在標(biāo)記流式抗體前進行Fc封閉即可。04、合理設(shè)定閾值:閾值的設(shè)定與實驗?zāi)康南⑾⑾嚓P(guān)。在流式分析實驗中,應(yīng)當(dāng)設(shè)定閾值去除絕大部分噪音及碎片信號,僅保留少量碎片信號即可。在流式分選實驗中,若分選所得細胞用于培養(yǎng),同樣應(yīng)當(dāng)設(shè)定閾值去除絕大部分噪音及碎片信號,僅保留少量碎片信號,這樣做可以有效提高分選效率及回收率;但若分選所得細胞用于qPCR、測序,特別是單細胞測序等基因組學(xué)應(yīng)用,由于碎片中含有一定量的核酸片段乃至細胞核碎片,在分選過程中就需要將盡可能多的碎片與目的細胞區(qū)分,因此應(yīng)當(dāng)設(shè)定較低的閾值以暴露足量的碎片信號讓分選儀器檢測到,進而有效確保分選所得目的細胞不摻雜核酸碎片,以免影響后續(xù)實驗準(zhǔn)確性。05、利用空白熒光通道排除非特異:什么是空白熒光通道呢?舉一個例子,我們設(shè)計一個3色實驗標(biāo)記FITC、PE、PE-Cy7三種染料,沒有標(biāo)記APC,在檢測時APC通道就是空白通道,是不應(yīng)該有陽性信號的。復(fù)雜樣本中的部分雜質(zhì)細胞有較強的非特異熒光信號,通常這些非特異的熒光信號在所有的流式熒光通道中均可檢測到?;谶@一原理,我們可在上樣時預(yù)留一到兩個空白熒光通道,樣本中的目的細胞沒有標(biāo)記這些空通道的熒光素,在這些通道里面是陰性的,而雜質(zhì)細胞的非特異信號在空白通道中通常也是陽性的,我們就可以通過設(shè)門選擇空白通道中的陰性細胞來達到去除非特異信號的目的。需要注意的是,利用這一方法時要充分考慮補償?shù)挠绊懀?好選擇與已用通道補償小或無補償?shù)耐ǖ雷鳛榭瞻淄ǖ馈?6、增加細胞死活染料:死細胞的非特異性地結(jié)合會增加假陽性。死細胞會產(chǎn)生自發(fā)熒光干擾特定信號的檢測。在TILs分選中去除死細胞??梢栽黾訑?shù)據(jù)準(zhǔn)確性:死亡的細胞可能會釋放細胞碎片和細胞內(nèi)成分,這可能會干擾實驗結(jié)果,引入假陽性或假陰性結(jié)果。通過去除死細胞,可以提高分選結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。并且為分選后TILs細胞活力提供保證:分選到活細胞可以保證后續(xù)實驗的有效性和可靠性。死亡細胞不具備正常的生物活性和功能,因此分選到活細胞可以確保后續(xù)實驗?zāi)軌蚍从痴鎸嵉募毎飳W(xué)狀態(tài)。圖3 無死細胞排除處理的樣本分析比較圖4 有死細胞排除處理的樣本分析比較復(fù)蘇后的PBMC在免疫染色之前不添加(圖 3)或者添加ViaKrome 405可固定活性染料(55℃,10分鐘)(圖 4)。然后,使用Perfix-nc細胞染色試劑盒(型號 B10825)處理細胞,并用Granzyme B-FITC、CD19-PE、CD14-ECD、CD79a-PC5.5、CD3-PC7 和 CD45- Krome Orange 進行染色。 數(shù)據(jù)統(tǒng)計信息顯示:兩個不同條件下,門內(nèi)細胞在上一門級百分比也不一樣,充分展示了消除死細胞以后的數(shù)據(jù)效果。
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2023-07-03 11:42:58人人都是流式高手:GFP分選,這還有我不會的?
很常見的場景如下:細胞轉(zhuǎn)染后,想用流式檢測表達GFP細胞的百分比并且分選,但是不同的設(shè)門方法讓GFP陽性細胞百分比看起來有差異,究竟下面哪種策略才適合呢?今天我們主要討論一下FSC和SSC上設(shè)門對GFP陽性細胞百分比的影響。讓我們一個一個設(shè)門,把每種情況具體看一下。保持FITC通道上的門不變,我們來看一下在前向和側(cè)向的散點圖上設(shè)門在不同的位置,代表你選擇了什么類型的細胞。只有P1賦予了藍色,其他門的顏色去掉,這樣,我們就可以很方便的看出來細胞群在不同的圖上所處的位置。第 一種設(shè)門,除了左下角靠近0的碎片不圈,其他基本都圈上,從第二張SSC-A和SSC-H排粘連的散點圖可以看出來有單個細胞也有粘連細胞,P2門下 GFP陽性細胞百分比為61.36%。第二種設(shè)門,只圈最密集的這一群,從第二張SSC-A和SSC-H排粘連的散點圖可以看出來,這部分的細胞基本都是單個的,P2門下 GFP陽性細胞百分比為65.39%,較第 一種高。第三種設(shè)門,密集細胞群左邊的和左下角靠近0的碎片不圈,只圈右邊的這兩群,從第二張SSC-A和SSC-H排粘連的散點圖可以看出來有單個細胞也有粘連細胞,P2門下 GFP陽性細胞百分比為65.70%,較第 一種高,和第二種差不多,但是稍微高一點。這樣分析下來,大家最 大的困惑是這三群細胞要不要圈,怎么圈才是最 好的?讓我們在第 一張FSC和SSC的散點圖上根據(jù)細胞群設(shè)三個門。三個門分別為P1、P4和P5,顯示了三種不同的細胞群。P1顯示為單個細胞,F(xiàn)ITC通道上陽性細胞比例為65.54%。P4顯示大部分為粘連的細胞,因此在FITC通道上的陽性細胞比例為71.43%,較P1細胞群高,如果分析時加入這群細胞會增加GFP陽性細胞百分比。如果在單克隆分選中選擇這群,會導(dǎo)致雖然篩選到陽性細胞,但是單克隆源性降低。P5顯示為單個細胞,但是因為FSC較P1小,考慮是細胞狀態(tài)不好細胞呈現(xiàn)皺縮導(dǎo)致,所以其在FITC通道上的陽性細胞比例為20.15%,較P1細胞群低的多,如果分析時加入這群細胞則會降低GFP陽性細胞百分比。如果加入7AAD染料,這群會呈現(xiàn)出陽性,所以在分選中這群細胞不該圈選,或者在去除死細胞的門中去除。由此可見,如果只想要分析狀態(tài)好的單個細胞的GFP陽性百分比,那你可以選擇P1門的設(shè)門方式,當(dāng)然也可以把P1和P4都選上,再用SSC-A和SSC-H去掉粘連細胞對數(shù)據(jù)的干擾。練習(xí)題如果您在細胞轉(zhuǎn)染后,流式檢測表達mCherry細胞的百分比時發(fā)現(xiàn),mCherry通道細胞群并沒有呈現(xiàn)明顯分開的兩群(由于細胞在mCherry通道有較高的自發(fā)熒光),要怎么確定mCherry細胞百分比并且分選呢?
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2025-09-04 16:25:34實驗室智能化管理系統(tǒng)如何重塑實驗室運作模式?
實驗室智能化管理是面向未來的 “下一代實驗室” 核心范式,其核心是以數(shù)據(jù)為關(guān)鍵生產(chǎn)要素、以算法為智能決策中 樞、以自動化為高效執(zhí)行載體,全面重塑實驗室業(yè)務(wù)價值鏈。通過深度融合 LIMS(實驗室信息管理系統(tǒng))、IoT(物聯(lián)網(wǎng))、AI(人工智能)、大數(shù)據(jù)與云原生技術(shù),構(gòu)建具備 “感知 - 互聯(lián) - 分析 - 決策 - 優(yōu)化” 全閉環(huán)能力的實驗室智能體,推動實驗室實現(xiàn)從 “經(jīng)驗驅(qū)動” 向 “數(shù)據(jù)驅(qū)動” 的根本性躍遷。 其落地實施可錨定 “全面數(shù)字化筑基、數(shù)據(jù)賦能提效、智能自治升級” 的遞進路徑,層層推進實驗室智能化體系的構(gòu)建與落地。 全面數(shù)字化:構(gòu)建互聯(lián)互通的數(shù)字基座傳統(tǒng)實驗室管理長期依賴人工操作,存在效率低下、易發(fā)生錯誤、數(shù)據(jù)處理繁瑣及資源消耗大等問題。本階段致力于構(gòu)建覆蓋樣品登記、實驗執(zhí)行至報告生成的全流程數(shù)字化體系,建立實時、統(tǒng)一調(diào)控的實驗室數(shù)字孿生體,提升資源利用效率與管理精細化水平。 通過部署LIMS(實驗室信息管理系統(tǒng))、ELN(電子實驗記錄本),并集成實驗室監(jiān)控預(yù)警系統(tǒng)與自動化數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)(SDMS),系統(tǒng)全面提升數(shù)據(jù)的質(zhì)量與可追溯性,實現(xiàn)質(zhì)檢流程的精準(zhǔn)與高效。還具備設(shè)備異常自動識別與庫存預(yù)警能力,實現(xiàn)實時告警與智能研判,為構(gòu)建統(tǒng)一、智能的實驗室數(shù)字化管理體系奠定堅實基礎(chǔ),助力實驗室降本增效。 數(shù)據(jù)賦能:驅(qū)動決策優(yōu)化與科研創(chuàng)新依托 LIMS系統(tǒng)與高性能BI分析系統(tǒng),對實驗數(shù)據(jù)進行深度挖掘與多維度分析,充分釋放數(shù)據(jù)價值,為科研決策提供洞察與預(yù)測支撐。數(shù)據(jù)挖掘與知識發(fā)現(xiàn):基于歷史實驗數(shù)據(jù)識別潛在規(guī)律,生成可驗證的新實驗假設(shè);實驗設(shè)計優(yōu)化:借助數(shù)據(jù)分析推薦最優(yōu)實驗參數(shù)組合,減少試錯成本,加快研發(fā)迭代;成果轉(zhuǎn)化支持:自動生成標(biāo)準(zhǔn)實驗報告與完整數(shù)據(jù)包,無縫對接生產(chǎn)系統(tǒng),提升從研發(fā)到應(yīng)用的轉(zhuǎn)化效率。 智能自治:邁向流程自動化與執(zhí)行智能化在全面數(shù)字化的基礎(chǔ)上,推進系統(tǒng)對重復(fù)性任務(wù)的自主執(zhí)行,并輔助實驗人員實現(xiàn)更高效的科學(xué)決策。自動化實驗操作:通過實驗室流程自動控制平臺集合常見的實驗室自動化設(shè)備,串聯(lián)成完整的無人化實驗室,實現(xiàn)高通量、高重復(fù)性實驗的無人化運行。
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