人可替丁(Cotinine )酶聯(lián)免疫分析（ELISA） 藥品名稱： 通用名：人可替丁(Cotinine )酶聯(lián)免疫分析試劑盒 使用目的： 本試劑盒用于測定人血清，血漿及相關液體樣本中可替丁(Cotinine )含量 實驗原理 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人可替丁(Cotinine )水平用純化的人可替丁(Cotinine ) 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入可替丁(Cotinine )，再與HRP標記的可替丁(Cotinine )抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成Z終的黃色顏色的深淺和樣品中的人可替丁(Cotinine )呈正相關用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人可替丁(Cotinine )濃度 試劑盒組成 1 20倍濃縮洗滌液 30ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶 2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（27ng/L） 0.5ml×1瓶 3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份 5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個 標本要求 1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20保存，但應避免反復凍融 2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過氧化物酶的（HRP）活性 操作步驟 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在**第二孔中分別加標準品100l，然后在**第二孔中加標準品稀釋液50l，混勻；然后從**孔第二孔中各取100l分別加到第三孔和第四孔，再在第三第四孔分別加標準品稀釋液50l，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50l棄掉，再各取50l分別加到第五第六孔中，再在第五第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五第六孔中各取50l分別加到第七第八孔中，再在第七第八孔中分別加標準品稀釋液50l，混勻后從第七第八孔中分別取50l加到第九第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50l，混勻后從第九第十孔中各取50l棄掉（稀釋后各孔加樣量都為50l，濃度分別為18ng/L，12ng/L ，6ng/L，3ng/L， 1.5ng/L） 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）待測樣品孔在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l（樣品Z終稀釋度為5倍）加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻 溫育：用封板膜封板后置37溫育30分鐘 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干 加酶：每孔加入酶標試劑50l，空白孔除外 溫育：操作同3 洗滌：操作同5 顯色：每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50l，輕輕震蕩混勻，37避光顯色15分鐘. 終止：每孔加終止液50l，終止反應（此時藍色立轉黃色） 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值） 測定應在加終止液后15分鐘以內進行