高空間分辨率和低的光損傷風(fēng)險使得雙光子激光掃描顯微鏡TPLSM成為生物功能成像的選擇但是，如神經(jīng)鈣離子調(diào)控等功能性動態(tài)研究通常也需要一個高的時間分辨率目前，通過線掃描可以獲取速度的提升，但是將結(jié)構(gòu)的空間分辨率限制在一條軸上為克服高空間分辨率和高時間分辨率間的空白，我們改進了TPLSM，使用一個多倍分光器來在樣品中產(chǎn)生多個激光焦點通過使用一個電子倍增相機檢測這些焦點釋放的熒光，它可以支持同時進行多條線掃描除了多線掃描，高達64束的陣列也允許使用X-Y掃描模式去以高的幀速獲取整幅圖像為估測多線掃描TPLSM在功能性原位成像中的應(yīng)用，監(jiān)測了蒼蠅大腦中的視覺運動神經(jīng)元中的鈣離子信號以分枝狀軸突和棘突狀結(jié)構(gòu)的測量為例展示了我們的方法對于從不同細(xì)胞位置同時獲取信號的能力鈣離子動態(tài)依賴于分支大小，但是棘突與他們的母軸突并沒有系統(tǒng)性的區(qū)別我們設(shè)備的空間分辨率與激光共聚焦顯微鏡進行了嚴(yán)格比較并通過運行成像和點掃描模式直接評估圖像檢測過程中釋放光散射的負(fù)面效應(yīng) 雙光子熒光顯微鏡