升高溫度可誘導(dǎo)雙鏈核酸分離為單鏈。在一定溫度下，堿基對之間的氫鍵發(fā)生斷 裂。熱熔實(shí)驗(yàn)利用了腺嘌呤-胸腺嘧啶 (A=T) 與鳥嘌呤-胞嘧啶 (GΞC) 核苷酸之間氫鍵 數(shù)的差異。由于 GΞC 核苷酸含有三個氫鍵，解離所需熱能大于 A=T 對所需的熱能。 這表示含有更多 GΞC 對的 DNA 要在更高的溫度下才能熔解。熔解溫度 (Tm) 可指示 樣品中的堿基組成（GΞC 與 A=T 的比例）。制造商和研究人員常將 Tm 用作 QC 校驗(yàn) 指標(biāo)。 使用紫外-可見分光光度法測定熔點(diǎn)，利用的是單鏈核酸在 260 nm 處的吸光度高 于雙鏈核酸的原理。圖 1 顯示了使用小干擾 RNA (siRNA) 樣品的示例，與 25 °C 相 比，85 °C 下 260 nm 處的吸光度明顯更高。