近年來，由于多種高利潤的原創(chuàng)生物制劑的ZL保護期滿，生物仿制藥單克隆抗體(mAb) 的開發(fā)和生產(chǎn)迅速增長。盡管不存在有關(guān)生物仿制藥的監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)，但是業(yè)界一致認為生物仿制藥應(yīng)當(dāng)：(i) 與原創(chuàng)生物制劑具有高度生物物理和生物化學(xué)相似性，并且 (ii) 在純度、效價和安全性方面具有可比性。美國 FDA 等監(jiān)管機構(gòu)指出，可以使用高質(zhì)量分析數(shù)據(jù)來證明范圍較窄的體內(nèi)研究的合理性，強調(diào)了全面的高分辨率分析表征的重要性。

與小分子藥物不同，mAb 極其復(fù)雜，難以實施完整的分析表征。因此，生物制藥公司將確定一組需要監(jiān)測的關(guān)鍵質(zhì)量屬性 (CQA)，選擇 CQA 的原則是它們對生物制劑的整體質(zhì)量、安全性或有效性具有重大影響。由于同一工廠可能生產(chǎn)多種ZL藥物，因此 mAb 身份（鑒定）是一種 CQA，其Z有效的測定方法是完整蛋白質(zhì)質(zhì)譜法。此外，糖基化通常也被視為一種 CQA，因為非人類多聚糖基序可能觸發(fā)急性或慢性過敏反應(yīng)。另外，由于 mAb 由培養(yǎng)的細胞產(chǎn)生，而多聚糖對培養(yǎng)條件的變化非常敏感，因此它們是生產(chǎn)工藝發(fā)生非預(yù)期變化的有用的指標(biāo)。

本應(yīng)用分析了兩種利妥昔單抗生物仿制藥的完整質(zhì)量數(shù)、亞基質(zhì)量數(shù)和糖基化，并將它們與創(chuàng)新藥物分子進行了比較。我們使用四種不同的工作流程進行分析：(i) 完整 mAb，(ii) 還原態(tài)亞基，(iii) IdeS 酶解的亞基，以及 (iv) 游離多聚糖。在這些工作流程中，樣品前處理時間各不相同，有的無需樣品前處理（完整 mAb），有的需要大約三個小時（游離多聚糖）。包含更多樣品前處理步驟的工作流程的優(yōu)勢通常在于對低豐度多聚糖組分具有更高的靈敏度，從而提高了相應(yīng)技術(shù)的分析能力。

結(jié)果表明，由 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統(tǒng)和 Agilent 6545XT Q-TOF 組成的安捷倫高分辨率 LC/MS 非常適合執(zhí)行這些分析。此外，利用 AssayMAP Bravo 自動完成游離多聚糖工作流程中的樣品前處理，從而減少人為錯誤并縮短樣品前處理時間。標(biāo)記多聚糖可在小樣品量中以高濃度洗脫，無需冗長的干燥步驟。