Western Blot編輯本段回目錄此項技術是一種蛋白質的固定和分析技術，是將已用聚丙烯酰胺凝膠或其它凝膠或電泳分離的蛋白質轉移到硝酸纖維濾膜上，固定在濾膜上的蛋白質成分仍保留抗原活性及與其它大分子特異性結合的能力，所以能與特異性抗體或核酸結合，其程序Sonthern Blot相似，故稱為Western Blot,**抗體與膜上特異抗原結合后，再用標記的二抗(同位素或非同位素的酶)來檢測，此方法可檢測1ng抗原蛋白 1配液： (1)轉移電泳緩沖液：20mmol/L Tris HCL pH8.0 150mmol/L 甘氨酸 加14.5g Tris粉 67.08g甘氨酸于4L水中，加入1200mL 甲醇，加水至6L (2)麗春紅S溶液：0.5%麗春紅S 1%乙酸 2操作步驟： (1)用已制備好的SDS-PAGE分離的蛋白凝膠 (2)用一張濾紙，剪成與膠同樣大小，在轉移電泳緩沖液中預濕，放在Scotch-Brit Pad上，在膠的陰性端放上濾紙，膠的表面用該緩沖液浸濕，排出所有氣泡 (3)在膠的陽極面放置同樣大小浸濕的硝酸纖維素膜，排出氣泡，再在濾膜的陽極端放置一張濾紙，排出氣泡，再放一個Scotch-Brit Pad (4)將以上三明治樣裝置放入一個塑料支撐物中間，將支撐物放入電轉移裝置中，加入電轉移緩沖液 (5)接通電源：使膠上的蛋白轉移到硝酸纖維素膜上，電壓為14V 4轉移4小時或過夜 (6)將濾膜放入麗春紅S溶液中5分鐘，蛋白染色水中脫色2分鐘，照像，用印度墨水將分子量標準染色，在水中完全脫色 (7)將濾膜放在塑料袋中，每3張加入5mL封閉緩沖液(1克速溶去脂奶粉溶于100ml PBS中)，封閉特異性抗體結合位點，室溫1h，搖動，倒出封閉緩沖液 (8)在封閉緩沖液中稀釋**抗體，加入后室溫放置1小時，將濾膜轉到塑料盒中，用200mL PBS洗四次，搖動 (9)在封閉緩沖液中稀釋辣根過氧化物酶標記的二抗，重復步驟8 (10)將濾膜放在100mL新配制的DAB底物溶液中，大約2～3分鐘就可顯色，用水沖洗終止反應照像 結果分析：分析陽性(顯色)條帶的分子量大小，而且根據(jù)信號(顏色)強弱分析蛋白表達量