我們通常用紫外吸收光譜來檢測生物分子，獲得其有關(guān)濃度和樣品純度的重要信息。 STS-UV微型光譜儀的波長范圍在190-650 nm之間，光學(xué)分辨率約為1.5 nm，是此類檢測的理想之選。 STS-UV微型光譜儀的體積小巧、功能強(qiáng)大、性能出色，在寬泛的樣品濃度范圍內(nèi)能提供優(yōu)質(zhì)的紫外吸收數(shù)據(jù)。 在此應(yīng)用說明中，我們通過測定濃度在0.15至150 μg/ml之間的DNA樣品的吸光度，證實(shí)該光譜儀的jue佳性能。 

前言

DNA檢測通常需要測試濃度極高或極低的樣品，對于高濃度DNA溶液可進(jìn)行稀釋，而低濃度樣品的檢測難度更大。 沒有可調(diào)節(jié)光程的光譜儀或小容量采樣器更具比爾-伯朗定律，可將比色皿的光程調(diào)節(jié)為適合大小，從而符合測定多種濃度。 STS-UV的動態(tài)范圍大，信噪比高，能檢測濃度范圍較大的DNA樣品，而無需改變光程來適應(yīng)0.005至1.5吸光度單位（AU）范圍內(nèi)的吸光度水平。

實(shí)驗(yàn)詳細(xì)資料

用去離子水制備不同濃度的鮭魚 DNA（Sigma D-1626）。 使用1 cm光程比色皿和DH-2000-BAL平衡型氘-鹵鎢組合式光源中的氘燈檢測DNA的吸光度。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果資料

圖1.用STS-UV測量低濃度（0.15-2.5 μg/ml）DNA溶液的吸光度。

圖2.OD260處對應(yīng)DNA濃度（0.15至2.5 μg/ml DNA水溶液）

圖1和2中顯示了用STS-UV檢測低濃度DNA（0.15-2.5 μg/ml DNA）的吸收光譜和在260 nm（OD260)下的吸光度值。 對這些濃度進(jìn)行的重復(fù)測量顯示差異率不到0.0004AU（誤差條在數(shù)據(jù)標(biāo)記內(nèi)）。 用Z小二乘法把觀測數(shù)據(jù)擬合成直線，相關(guān)系數(shù)為0.9999，證實(shí)了低濃度數(shù)據(jù)的線性。 如圖1所示，即使當(dāng)吸光度數(shù)值低至0.005 AU時，STS-UV也能提供重復(fù)性高的優(yōu)質(zhì)DNA吸收數(shù)據(jù)。

圖3.OD260與DNA濃度（0.15至110 μg/ml DNA水溶液）

圖3進(jìn)一步證實(shí)用STS-UV檢測0.15-110 μg/mlDNA具有較好的線性和較寬的動態(tài)范圍。 R²（線性擬合度）值為0.9996，說明了在這一寬泛的濃度和吸光度范圍內(nèi)數(shù)據(jù)具有線性關(guān)系。 當(dāng)濃度為110 μg/ml時，吸光度曲線略微平坦化或衰減說明在100至110 μg/ml之間吸光度具有線性，約為1.6 AU。

圖4.OD260與DNA濃度（0.15至150 μg/ml DNA水溶液）

圖4顯示了用STS-UV檢測的ZD吸光度。 檢測出吸光度數(shù)值高達(dá)2.1 AU。 正如紅色的數(shù)據(jù)所示，在100和110 μg/ml之間DNA的OD260表現(xiàn)出較高的線性，約為1.6 AU。 當(dāng)濃度超過100 μg/ml，光譜圖平坦化或衰減說明了這些測量結(jié)果接近雜散光限值。

結(jié)論

STS-UV的動態(tài)范圍為4600:1，信噪比超過1500:1，它將出色的性能融入體積小巧、功能強(qiáng)大的微型光譜儀中。 STS-UV是DNA、RNA和蛋白質(zhì)檢測的理想之選，覆蓋了190至650 nm的整個范圍，光學(xué)分辨率約為1.5 nm。 正如濃度在0.15至150 μg/ml之間的DNA樣品所示，STS-UV能對寬泛的吸光度范圍（0.005至2.1 AU）進(jìn)行檢測。 STS-UV能在寬泛的濃度和吸光度范圍能進(jìn)行檢測，無需配備可調(diào)節(jié)的采樣配件，從而簡化了紫外吸收光譜的檢測過程。