【概述】

基于整體表征的中藥指紋圖譜是國(guó)內(nèi)外廣泛接受的一種中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)模式。中藥的復(fù)雜性決定了單一分離模式無法滿足中藥化學(xué)成分表征的需求，多種分離模式組合將有利于強(qiáng)極性組分、同系物組分和微量組分的表征。本文基于反相色譜（RPLC） 結(jié)合親水相互作用色譜（HILIC），采用紫外檢測(cè)（UV）結(jié)合電噴霧檢測(cè)(CAD)對(duì)血塞通和血栓通注射液的化學(xué)成分同時(shí)進(jìn)行指紋圖譜表征，采用 Vanquish Duo UHPLC 系統(tǒng)，快速有效對(duì)血塞通注射液進(jìn)行了質(zhì)量評(píng)價(jià)。

【實(shí)驗(yàn)/設(shè)備條件】

2.1.1 Vanquish Duo UHPLC 液相色譜儀ChromeleonTM Chromatography Data System ，變色龍色譜軟件，版本7.2 SR9

2.1.2 Corona CAD VEO 電霧式檢測(cè)器，

2.1.3 注射用血塞通：批號(hào)：16EB207；規(guī)格：200mg/ 支，注射用血栓通，批號(hào)為：16080310, 規(guī)格：150mg/ 支。

2.1.4 乙腈、甲醇 （色譜級(jí)，F(xiàn)isher 公司），去離子水（18.2MΩ，Millipore 純水機(jī)）， 甲酸（LC-MS，F(xiàn)isher 公司）。

2.2 色譜條件

2.2.1RPLC-CAD 分析

色譜柱：Thermo acclaim polar advantage C16 `

（100×2.1 mm,2.2 μm）

柱溫：25 ℃；

進(jìn)樣量：2 μL；

流動(dòng)相: A 相為乙腈，B 為0.1%（V/V）甲酸，梯度洗脫

程序見表2。

CAD 參數(shù)：采集頻率5Hz，F(xiàn)ilter，3.6s，Evaporator Temp，50℃，PF=1.0

【樣品提取】

樣品溶液制備：取注射用血塞通和血栓通樣品適量，精密稱定，加70% 甲醇溶解并制成濃度為5 mg/mL的樣品溶劑，直接進(jìn)樣分析。

【實(shí)驗(yàn)/操作方法】

皂苷類化合物是三七主要活性成分，圍繞三七皂苷類成分化學(xué)、結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化、生物轉(zhuǎn)化、藥理、質(zhì)量評(píng)價(jià)等研究較多。由于三七皂苷中分子量相同的結(jié)構(gòu)類似成分眾多，單一分離模式無法全面表征三七的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。RPLC 由于分離效能高，仍是分析人參皂苷的主流分離模式；親水相互作用色譜HILIC，是分離分析極性化合物的重要手段。人參皂苷一般是由親脂性的苷元基團(tuán)和親水性的糖鏈組成，因此RP 和HILIC 具有良好的正交選擇性。本試驗(yàn)采用15 種人參皂苷對(duì)照品對(duì)兩者的正交性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。

【實(shí)驗(yàn)結(jié)果/結(jié)論】

本文采用Vanquish Duo UHPLC 系統(tǒng)， 針對(duì)中藥注射劑血塞通和血栓通，建立了基于反相色譜- 電霧式檢測(cè)（RPLC-CAD）和親水相互作用色譜- 紫外檢測(cè)（HILIC-UV）的指紋圖譜，并同時(shí)對(duì)樣品中化學(xué)成分進(jìn)行了表征分析。采用Vanquish Duo 的并聯(lián)模式，在相同時(shí)間獲得了RPLC 和HILIC 兩維分離以及CAD 和UV 兩種檢測(cè)通道的數(shù)據(jù)，提高一倍分析效率的同時(shí)，獲取了更多的化學(xué)物質(zhì)組成信息。結(jié)果表明RPLC 和HILIC 對(duì)人參皂苷類化合物分離具有良好的正交性，結(jié)合兩種不同分離模式，可以更加全面表征從常量到微量、痕量人參皂苷的細(xì)微差異，為保證產(chǎn)品質(zhì)量和一致性奠定基礎(chǔ)。