產(chǎn)品簡介

Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit超快速DNA亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化試劑盒（柱式）可以快速地將DNA樣品中的未甲基化胞嘧啶轉(zhuǎn)化成尿嘧啶而甲基化胞嘧啶維持不變，雙鏈DNA經(jīng)過高溫亞硫酸氫鹽處理后，雙鏈DNA解鏈變成單鏈，在HSO₃^-作用下，導(dǎo)致胞嘧啶殘基發(fā)生脫氨基反應(yīng)并將它們轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，甲基化修飾的殘基保持不變。進(jìn)而在后續(xù)PCR擴(kuò)增過程中，尿嘧啶會被胸腺嘧啶(T)取代。轉(zhuǎn)化反應(yīng)時間僅需5 min；DNA投入量范圍100 pg-2 μg; 未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化效率≥99%。轉(zhuǎn)化后的產(chǎn)物適用于PCR擴(kuò)增和NGS測序等下游應(yīng)用。

產(chǎn)品信息

組分信息

注：10T/盒：向洗滌液中加入4.4 mL的無水乙醇；

50T/盒：向洗滌液中加入22 mL的無水乙醇；

加入無水乙醇后，顛倒混勻后備用，此時應(yīng)將瓶蓋擰緊，防止乙醇揮發(fā)影響試劑使用效果。

儲存條件  

12225-A轉(zhuǎn)化液室溫避光保存，其他組分室溫保存，有效期12個月。

注意事項

1. 為保證下游實(shí)驗的順利進(jìn)行，進(jìn)行轉(zhuǎn)化步驟時，應(yīng)對投入的DNA總量進(jìn)行精確定量，推薦使用Qubit3.0/4.0對投入DNA進(jìn)行定量，且A260 / A280比值在1.7 - 1.9之間；
2. DNA投入量范圍100 pg-2 μg，最佳投入量為100 ng - 1 μg，過低不利于下游檢測，過高可能導(dǎo)致回收率/轉(zhuǎn)化效率降低。
3. 轉(zhuǎn)化液/脫硫液/洗滌液中含有揮發(fā)性組分，使用完畢后，應(yīng)及時擰緊瓶蓋，室溫儲存。
4. 轉(zhuǎn)化后樣本，應(yīng)及時進(jìn)行下游實(shí)驗，若短暫儲存，可置于-20℃，長期儲存可置于-80℃。
5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并佩戴一次性手套操作。
6. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用說明

試劑及耗材準(zhǔn)備：1.5 mL的無菌離心管，無菌槍頭，無核酶水，無水乙醇，PCR管；

50. 亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化：

1. 根據(jù)需要實(shí)驗的樣本數(shù)量，準(zhǔn)備相應(yīng)的無菌PCR管，并按照下表要求配制反應(yīng)體系：
2. 轉(zhuǎn)化體系

用移液器將上述體系吹打混勻或短暫渦旋混勻5 s，短暫離心，將反應(yīng)液離心至PCR管底部。

5. 注意：1. 此時PCR管中反應(yīng)液總體積為200 μL，為使轉(zhuǎn)化更充分，應(yīng)在步驟2）吹打混勻后，將反應(yīng)液等分，轉(zhuǎn)移至新的無菌PCR管中，運(yùn)行轉(zhuǎn)化程序。轉(zhuǎn)化結(jié)束后，將兩個PCR管中的反應(yīng)液合并至同一個純化柱中進(jìn)行純化。

2. 如果樣本體積在 20-40 μL 之間，則減少轉(zhuǎn)化液的體積，總體積保持200 μL。
3. 如果樣本體積為50 μL，則轉(zhuǎn)化液加入150 μL，總體積保持200 μL，轉(zhuǎn)化時間延長至6 min以上。

3）CT轉(zhuǎn)化程序設(shè)置

將PCR管置于預(yù)設(shè)好程序的PCR儀上，進(jìn)行上述反應(yīng)。

50. 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物純化

1. 準(zhǔn)備好相應(yīng)樣本個數(shù)的純化柱套件，將200 μL的轉(zhuǎn)化后的反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至純化柱中，13000 g離心30-60 s，丟棄濾液，將純化柱重新放于收集管中；
2. 向純化柱中加入100 μL的洗滌液（確認(rèn)已經(jīng)添加無水乙醇），13000 g離心30-60s，丟棄濾液，將純化柱重新放于收集管中；
3. 向純化柱中加入200 μL的脫硫液，于室溫中靜置反應(yīng)20 min，反應(yīng)結(jié)束后13000 g離心30-60 s，丟棄濾液，將純化柱重新放于收集管中；
4. 向純化柱中加入200 μL的洗滌液，13000 g離心30-60s，丟棄濾液，將純化柱重新放于收集管中；
5. 重復(fù)步驟4）一次；
6. 將純化柱轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的1.5 mL的離心管中，開蓋晾干后，加入10-30 μL的洗脫液至濾膜中央，室溫靜置1min后，13000 g離心1 min，收集洗脫液；
7. 將洗脫后的樣本置于-20 ℃暫存，若長期保存，請將樣本置于-80 ℃保存，同時應(yīng)避免不必要的反復(fù)凍融。

注：純化后轉(zhuǎn)化產(chǎn)物可直接用于后續(xù)PCR反應(yīng)或測序流程。

Ver.CN20240222