免疫印跡法 (Western blotting) 是一種結(jié)合了免疫化學分析和技術(shù)高分辨率凝膠電泳的雜交技術(shù)。免疫印跡法是對蛋白質(zhì)特性、表達與分布進行檢測Z常用的一種方法，例如病毒的抗體或抗原檢測、多肽分子的質(zhì)量測定與組織抗原的定性定量檢測。免疫印跡法具有很強的特異性，很高的敏感度以及很大的分析容量。免疫印跡法(immunoblotting test,IBT)也叫做酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印斑法(enzyme linked immunoelectrotransfer blot,EITB),由于其類似于Southern早先建立的檢測核酸的印跡方法 Southern blot ，因此也被叫做Western-blot。

階段

免疫印跡法的進行包括三個階段

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）：

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）為diyi個階段。經(jīng)過SDS的處理，抗原等蛋白樣品帶有負電荷，在聚丙烯酰胺凝膠中，由陰極向陽極泳動，分子量與泳動速度成反比，肉眼不能觀察出該階段分離的效果（電泳區(qū)帶只有染色后才能被顯示出來）。

電轉(zhuǎn)移：

第二階段為電轉(zhuǎn)移。往硝酸纖維素膜上轉(zhuǎn)移在凝膠中已經(jīng)分離的條帶，選擇大電流（1～2A）以及低電壓（100V），通電45分鐘就能夠完成轉(zhuǎn)移。肉眼依然不能觀察出該階段分離的蛋白質(zhì)條帶。

酶免疫定位：

酶免疫定位為第三階段。依次將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜（相當于包被了抗原的固相載體）特異性抗體和酶標第二抗體作用后，將可以使得不溶性顯色物形成的酶反應底物，使區(qū)帶染色。4-氯-1-萘酚（呈藍紫色）和3,3'-二氨基聯(lián)苯胺（呈棕色）為常用的HRP底物。能夠清晰辨別陽性反應的條帶，并且能夠通過SDS-PAGE時加入的分子量標準，將各組分的分子量確定出。該方法是將ELISA法的高特異性和敏感性和SDS-PAGE的高分辨力相結(jié)合，分析手段非常有效，除了能夠在分析抗原組分及其免疫活性方面得到廣泛地應用，而且在疾病的診斷方面也能夠使用。在艾滋病病毒感染中此法作為確診試驗?？乖?jīng)電泳在硝酸纖維素膜上轉(zhuǎn)移后，將膜切成小條，與顯色底物制成的試劑盒和酶標抗體相結(jié)合，在實驗室中為檢測提供了方便。有無針對病毒的特異性抗體能夠通過出現(xiàn)顯色線條的位置判斷出來。