PCR是聚合酶鏈式反應(yīng)的簡稱，是一種酶促化學反應(yīng)，可以在試管里將待測的目的基因在很短的時間內(nèi)擴增五十萬倍乃至上百萬倍，大大提高了基因診斷的靈敏度，降低了分析的難度。PCR法是目前基因診斷中使用Z多的方法?，F(xiàn)在已經(jīng)發(fā)展到第三代PCR技術(shù)了：采用瓊脂糖電泳的方式對PCR產(chǎn)物進行分析的diyi代PCR， 熒光定量實PCR的第二代PCR，以微滴化處理步驟為主要特征的第三代PCR技術(shù)。下面就讓小編帶你了解一下PCR的方法。

試劑

引物：擴增的特異性由其決定。按照檢測的DNA的差異，選擇不一樣的引物。每種病原微生物均有其特異的引物。

耐熱的DNA聚合酶：從耐熱細菌中分離出此酶，此酶能夠耐受高溫90℃-100℃。

10×PCR緩沖液：1mg/ml 明膠、150mmol/L MgCl2、100mmol/L Tris-HCl(pH8.4,20℃)、500mmol/l KCl。

5mmol/L dNTP貯備液：合并dATP、dCTP、dGTP和dTTP鈉鹽各100mg，溶解于滅菌去離子水中，使用NaOH將pH調(diào)至中性，每份分裝300μl，在溫度-20℃下保存。Z好用UV吸收法精確測定dNTP濃度。

DNA模板：使用處理液處理待測標本，處理方法各異，操作也不相同，然而都是將標本中被檢測的DNA暴露的目的。

操作

在一微量離心管中分別加入PCR必需反應(yīng)成份，然后一定的循環(huán)參數(shù)條件下進行循環(huán)擴增為過去標準的PCR操作。操作如下：

1.將102-105拷貝DNA模板、引物各1μmol/L、dNTP1/10體積、10×PCR緩沖液各200μmol/L、ddH2O補到終體積（終體積50μl-100μl）加入到一微量離心管中混勻后，離心15s在管底讓反應(yīng)成分集中。

2.為了避免蒸發(fā)。在反應(yīng)液表面加50-100μl石蠟油，將反應(yīng)管放在97℃下變性10分鐘。

3.將溫度冷卻至延伸溫度，將1-5u Taq DNA聚合酶加入，離心30s充分混合酶和反應(yīng)液充分。

4.在溫度94℃下變性30s，5555℃退火20s，然后在72℃延伸30s，共循環(huán)30-35次。Z后一次循環(huán)結(jié)束后，再將反應(yīng)管置72℃溫育5min，以確保充分延伸。