臨床基因擴(kuò)增實驗又被叫做PCR實驗，是專門用來對艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測方法。它能夠通過擴(kuò)增病毒體內(nèi)所含的基因的方法，將含量不高的感染者體內(nèi)是否含有特定的病毒檢測出來。因為這種該檢測方法能夠?qū)⑵胀z驗難以檢測出的病毒檢測出來并且其靈敏度高、特異性高、快捷、對樣品要求低，所以受到了臨床醫(yī)生的廣泛認(rèn)可，已經(jīng)在對醫(yī)院的臨床診斷和各防疫檢測部門的禽疫病診斷廣泛的應(yīng)用。但是這種實驗對實驗環(huán)境和實驗人員的要求很高，需要確保實驗室安全、配置合理以及實驗人員操作非常規(guī)范。

這些年以來，人們越來越重視臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室的建設(shè)，因為它是檢測結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性和安全性的關(guān)鍵因素。下面就讓小編帶你來具體的了解一下。

實驗布局

原則上，臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室被分為試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域。必須嚴(yán)格遵守由單一方向進(jìn)入各個工作區(qū)域，就是只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，以防止交叉污染。應(yīng)該通過傳遞窗傳遞各實驗區(qū)之間的試劑及樣品。

通風(fēng)壓力控制

PCR實驗室的凈化要求不是很嚴(yán)格，然而應(yīng)當(dāng)采用全送全排的氣流組織形式以降低各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性。與此同時，為了保證各實驗區(qū)的壓力要求，要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例。

試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)

貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備為該實驗區(qū)主要的操作。試劑和用于標(biāo)本制作的材料不得經(jīng)過其他區(qū)域，應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)。必須在本區(qū)內(nèi)貯存試劑原材料，并且將所需的貯存試劑在本區(qū)內(nèi)制備成。本區(qū)對與氣流壓力的控制不作嚴(yán)格的要求。

標(biāo)本制備區(qū)

臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA）提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定RNA時cDNA的合成主要是本區(qū)域要進(jìn)行的操作。為了防止從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染，本區(qū)的壓力梯度要求為相對于鄰近區(qū)域為正壓。除此以外，因為氣溶膠污染可能在加樣操作中發(fā)生，因此在本區(qū)內(nèi)Z好不要有不必要的走動。

擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)

DNA或cDNA擴(kuò)增是本區(qū)域進(jìn)行的主要操作。除此之外，也會在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行已制備的DNA模板和合成的cDNA（來自樣本制備區(qū)）的加入和主反應(yīng)混合液（來自試劑貯存和制備區(qū)）制備成反應(yīng)混合液等。在巢式PCR測定中一般必須在diyi輪擴(kuò)增后打開反應(yīng)管，所以，巢式擴(kuò)增有較高的污染危險性，必須在在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行第二次加樣，為了防止氣溶膠從本區(qū)漏出，本區(qū)的壓力梯度要求為。相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓。應(yīng)當(dāng)對本區(qū)內(nèi)的不必要的走動盡量減少，以防止氣溶膠所致的污染。避免氣溶膠所致的污染個別操作。

擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)

擴(kuò)增片段的測定為該區(qū)域主要進(jìn)行的操作。若使用全自動封閉分析儀器檢測，可不設(shè)此區(qū)域。Z主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源于本區(qū)。所以，為了防止擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至其它區(qū)域，對本區(qū)的壓力梯度的要求為相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓。