紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的運(yùn)用十分廣泛。它能用于無(wú)機(jī)、有機(jī)化合物的定量分析及配合物的組成和穩(wěn)定常數(shù)的測(cè)定,還能用于有機(jī)化合物的鑒定、結(jié)構(gòu)分析及同分異構(gòu)體的鑒定。
1、光度測(cè)量
在食品生產(chǎn)中為了保證有顏色的飲料(如可樂(lè)、果汁及茶飲料)產(chǎn)品的顏色一致,可以在可見(jiàn)光區(qū)用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)來(lái)測(cè)定其吸光度值,使色差符合產(chǎn)品要求。在發(fā)酵業(yè)中也可通過(guò)測(cè)定吸光度值來(lái)確定產(chǎn)品的發(fā)酵完成程度。對(duì)于一些成分比較單一的產(chǎn)品也可通過(guò)測(cè)定吸光度值來(lái)確定產(chǎn)品合格與否。比如,判定營(yíng)養(yǎng)增強(qiáng)劑維生素B1的質(zhì)量就可以在400nm下測(cè)定其吸光度值,當(dāng)其值不超過(guò)0.020時(shí),即可確定為合格品。

2、成分的定性分析
物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了人射光中的某些特定波長(zhǎng)的光能量,相應(yīng)發(fā)生了分子振動(dòng)能級(jí)躍遷和電子能級(jí)躍遷的結(jié)果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),其吸收光熊量的情況也就不會(huì)相同,因此,每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線,可根據(jù)吸收光譜上的某些特性波長(zhǎng)處的Zda吸收峰(峰值)和波形圖來(lái)判斷某種物質(zhì)是否存在。
在食品生產(chǎn)中會(huì)使用一些食品添加劑,為了確定食品添加劑的質(zhì)量,可以用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)對(duì)其進(jìn)行光譜掃描。例如,對(duì)食品中涉及的一些復(fù)合甜味劑、復(fù)合防腐劑和復(fù)合鮮味劑等就可以用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行一個(gè)全面掃描以排除違禁添加劑的使用。另外,此方法還可以在物質(zhì)結(jié)構(gòu)分析方面作為紅外光譜(IR)、核磁共振((NMR)、質(zhì)譜(MS)等方法的輔助手段。
3、成分的定量分析
對(duì)于食品衛(wèi)生安全檢測(cè)中一些含量需要嚴(yán)格控制的成分項(xiàng)目可以用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)來(lái)準(zhǔn)確檢測(cè)。食品中常用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定。
4、DNA/蛋白分析
DNA/蛋白質(zhì)為生物大分子,所產(chǎn)生的紫外光吸收往往是其分子內(nèi)的小基團(tuán)所引起的,例如嘌呤堿、嘧啶堿、酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和肽鍵等。嘌呤堿、嘧啶堿以及由它們參與組成的核昔、核苷酸及核酸對(duì)紫外光有強(qiáng)烈的吸收,在吸收波長(zhǎng)260nm處有Zda吸收值。
在蛋白質(zhì)分子中,酪氨酸(TYR)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸((Trp)殘基的苯環(huán)含有共扼雙鍵,該共扼雙鍵對(duì)紫外光有吸收(其中Zda吸收Tyr在吸收波長(zhǎng)274nm;Phe在吸收波長(zhǎng)257nm;Trp在吸收波長(zhǎng)280nm),從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)對(duì)紫外光有吸收。肽鍵對(duì)紫外光的Zda吸收在吸收波長(zhǎng)238nm。紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)利用這個(gè)特性可以準(zhǔn)確、可靠地測(cè)定乳制品中蛋白質(zhì)含量。
5、核酸分析工作中的用途
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在氨基酸分析中的應(yīng)用,主要是用來(lái)對(duì)氨基酸的定量檢測(cè)。因?yàn)榘被釋?duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為230nm,所以,我們只要采用光度測(cè)量模式,將紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)儀器的波長(zhǎng)GOTO到氨基酸的Zda吸收峰230nm而計(jì)算出氨基酸的含量。

但是,因?yàn)榘被岱治鰰r(shí),一般是將它溶解在水中,而水在230nm附近有很多干擾吸收線,所以,在用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)對(duì)氨基酸分析檢測(cè)時(shí),要注意防止干擾的問(wèn)題。此外,還需注意:只有少數(shù)氨基酸有紫外吸收,多數(shù)氨基酸無(wú)紫外吸收或很弱,測(cè)定時(shí)要衍生化后再測(cè)。
6、糖類分析測(cè)試工作中的用途
紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在糖的分析中,主要是作定量檢測(cè)。因?yàn)樘菍?duì)紫外光的主要吸收波長(zhǎng)為218nm,所以,對(duì)糖類進(jìn)行分析時(shí),只要采用光度測(cè)量模式,將紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)儀器的波長(zhǎng)GOTO到氨基酸的Zda吸收峰218nm就可測(cè)試其吸光度大小,從而計(jì)算出糖的含量。
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