大腸桿菌(Escherichia coli,E.coli) 革蘭氏陰性短桿菌,大小0.5×1~3微米。周生鞭毛,能運(yùn)動(dòng),無(wú)芽孢。能發(fā)酵多種糖類產(chǎn)酸、產(chǎn)氣,是人和動(dòng)物腸道中的正常棲居菌,嬰兒出生后即隨哺乳進(jìn)入腸道,與人終身相伴,幾乎占糞便干重的1/3。國(guó)家規(guī)定,每毫升飲用水中的菌落總數(shù)小于100,每100毫升水中不得檢出總大腸菌群。下面就讓小編帶你了解一下大腸桿菌在生物技術(shù)中的應(yīng)用以及其分類。
大腸桿菌在生物技術(shù)中的應(yīng)用:
作為外源基因表達(dá)的宿主,大腸桿菌具有清晰的遺傳背景,簡(jiǎn)便的技術(shù)操作步驟,簡(jiǎn)單的培養(yǎng)條件,能夠進(jìn)行大規(guī)模發(fā)酵,是目前Z成功,得到Z廣泛應(yīng)用的表達(dá)體系,常常被作物GX表達(dá)的shou選體系,倍受遺傳工程專家的重視。它的基因組DNA是擬核中的一個(gè)環(huán)狀分子,能夠同時(shí)有多個(gè)環(huán)狀質(zhì)粒DNA。大腸桿菌細(xì)胞的擬核有1個(gè)DNA分子,大約有4700000個(gè)堿基對(duì)那么長(zhǎng),大概有4400個(gè)基因分布在DNA分子上,每個(gè)基因平均大概有1000個(gè)堿基對(duì)那么長(zhǎng)。
除了少數(shù)幾個(gè)例外,在DNA重組實(shí)驗(yàn)中所用的菌株以及分子生物學(xué)中常用的大腸桿菌菌株均是大腸桿菌菌株K12的衍生物。在遺傳、生化代謝等方面這些突變菌株各有不同程度的差異,對(duì)于做不同自菌株基因很適合。
分類
1:HB101菌株
特點(diǎn):該菌株具有穩(wěn)定的遺傳性能,可以方便的使用,對(duì)于各種基因重組實(shí)驗(yàn)均適宜。
基因型:SCS110或thi-1M110,leuB6,mtl-1,xyl-5,rpsL20,galK2,lacY1,proA2,ara-14,recA13,hsdS20(rB-mB-),supE44。
2:T*P10菌株
特點(diǎn):該菌株對(duì)于GX的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增很適用,能夠使得高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳得到確保。
基因型:nupG,(Strr)endA1,galK,rps,galU,araΔ139Δ(ara-leu)7697,recA1,△lacⅩ74,lacZΔM15,φ80,F(xiàn)-,mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)。
3:JM109菌株
特點(diǎn):該菌株在用M13phage載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染或使用pUC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)化時(shí),因?yàn)镴M09編碼的LacZΔM15和載體DNA產(chǎn)生的LacZa多肽進(jìn)行α-互補(bǔ),因而使得β-半乳糖苷酶活性顯示出來(lái),因此重組體菌株很容易被鑒別出來(lái)。
基因型:Δ(lac-proAB)/F’,relA1,supE44,hsdR17,thi-1,gyrA96,endA1,recA1。
4:BL21(DE3)pLysS菌株
特點(diǎn):該菌株由于含有質(zhì)粒pLysS,所以具有氯霉素抗性。PLysS包含表達(dá)T7溶菌酶的基因,可以使目的基因的背景表達(dá)水平降低卻不對(duì)目的蛋白的表達(dá)有所干擾。該菌株對(duì)于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達(dá)很適合。
基因型:dcm(DE3,pLysS,Camr),gal,ompThsdS(rBB-mB-),F(xiàn)-。
5:BL21(DE3)菌株
特點(diǎn):該菌株被用來(lái)對(duì)克隆于含有噬菌體T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體(如pET系列)的基因GX表達(dá)。T7噬菌體RNA聚合酶位于λ噬菌體DE3區(qū),λ噬菌體DE3區(qū)在BL21的染色體上整合。該菌株對(duì)于非毒性蛋白的表達(dá)很適合。
基因型:dcm(DE3),gal,hsdS(rBB-mB-),ompT,F(xiàn)-。
6:DH5a菌株
DH5a菌株常被用于質(zhì)粒克隆。E.coliDH5a在使用pUC系列質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化時(shí),可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α-互補(bǔ)??梢云鸬綄?duì)菌株進(jìn)行藍(lán)白斑篩選鑒別重組的作用。
基因型:relA1,gyrA96,thi-1,λ-,supE44,phoA,hsdR17(rk-,mk+),endA1,recA1,deoRΔ(lacZYA-argF)U169,,φ80dlacZΔM15,F(xiàn)-。
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