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紫外分析儀RFLP研究

更新時(shí)間:2025-10-18 12:26:35 類型: 閱讀量:1161
導(dǎo)讀:紫外分析儀有三用紫外分析儀、暗箱式紫外分析儀、可照相紫外分析儀等系列,不同的紫外分析儀有不同的用途。紫外分析儀采用不同波長(zhǎng)引進(jìn)電泳分析、檢測(cè),PCR產(chǎn)物檢測(cè),DNA指紋圖譜分析,紙層分析或薄層分析等。

紫外分析儀分為很多系列,有三用紫外分析儀、暗箱式紫外分析儀、可照相紫外分析儀等系列,不同的紫外分析儀有不同的用途。紫外分析儀采用不同波長(zhǎng)引進(jìn)電泳分析、檢測(cè),PCR產(chǎn)物檢測(cè),DNA指紋圖譜分析,紙層分析或薄層分析等。


介紹

在DNA標(biāo)記技術(shù)中,發(fā)展的Z早的即是RFLP標(biāo)記。RFLP是指基因型之間限制性片段長(zhǎng)度的不同,限制性酶切位點(diǎn)上堿基的插入、缺失、重排或點(diǎn)突變導(dǎo)致了這種差異。

自問(wèn)世以來(lái),RFLP(限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性)作為di一代分子生物學(xué)標(biāo)記在多門生物學(xué)科研究中得到了非常廣泛的應(yīng)用,然而,其僅在近幾年才開(kāi)始在植物抗性研究方面應(yīng)用。

RFLP可以定位和分離植物的抗性基因。利用RFLP技術(shù),對(duì)于核基因組或葉綠體基因組,特別是后者,如果可以對(duì)純凈DNA進(jìn)行提取,那么其多態(tài)性就能夠從酶切后的電泳圖譜直接地看出。在污染環(huán)境下種群內(nèi)、種群間不同水平的物種抗性分化進(jìn)化水平上的差異能夠通過(guò)這一方法測(cè)定出來(lái)。RFLP技術(shù)不但能夠在基因型分型研究中使用,而且同樣能夠在不同環(huán)境中微生物多樣性的研究中使用。


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基本類型

1、序列多態(tài)性

由于有較大部分的缺失、重復(fù)、插入等變異在DNA鏈內(nèi)發(fā)生,盡管沒(méi)有改變其內(nèi)切酶位點(diǎn)堿基序列,然而卻改變了原有的內(nèi)切酶位點(diǎn)相對(duì)位置,從而引發(fā)了RFLP的出現(xiàn)。


2、點(diǎn)的多態(tài)性

DNA鏈中發(fā)生單個(gè)堿基的突變是其表現(xiàn),并且一個(gè)新的酶切位點(diǎn)的形成或者一個(gè)原有酶切位點(diǎn)的丟失因?yàn)橥蛔兌斐?。Southern雜交就能夠診斷。


特點(diǎn)

相比于核酸序列分析,RFLP能夠?qū)⑿蛄蟹治鲋性S多非常繁瑣工序省去,然而和RAPD比較來(lái)說(shuō),RFLP更加的耗費(fèi)時(shí)間和精力,需要預(yù)先對(duì)DNA多種酶切、轉(zhuǎn)膜以及探針的制備等多個(gè)步驟進(jìn)行操作,只鑒定基因組單拷貝序列。然而其能夠?qū)Χ鄳B(tài)性產(chǎn)生的突變類型是由堿基突變或倒位、 還是由缺失、插入造成的進(jìn)行測(cè)定,也能夠被用于多態(tài)性是由父本還是母本產(chǎn)生的測(cè)定。

低拷貝編碼序列遍布于RFLP,并且穩(wěn)定性非常高,然而RFLP實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜,有著較為高昂的費(fèi)用,以及比較長(zhǎng)的檢測(cè)周期,對(duì)于大規(guī)模的分子育種不適用。在植物分子標(biāo)記輔助育種中需要用PCR為基礎(chǔ)的標(biāo)記替代RFLP。


主要步驟

1、提取DNA


2、DNA用限制性內(nèi)切酶酶切


3、用凝膠電泳分開(kāi)DNA片段


4、在濾膜上移入DNA片段


5、特定的DNA片段(Southern雜交)利用放射性標(biāo)記的探針雜交來(lái)顯示和對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。


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