紫外可見分光光度計有著廣泛的應(yīng)用范圍,其在機(jī)械制造、農(nóng)業(yè)林業(yè)以及環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域中發(fā)揮著重要的應(yīng)用價值。該文對紫外可見分光光度計的應(yīng)用情況進(jìn)行了介紹,還對其未來發(fā)展前景進(jìn)行了展望,希望可以促進(jìn)紫外可見分光光度計的推廣,使其發(fā)揮出更大的應(yīng)用價值。
隨著科技的不斷發(fā)展,紫外可見分光光度計的應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大,相關(guān)人員也對分光光度計儀器進(jìn)行了改進(jìn)與創(chuàng)新,使得這種儀器的功能越來越多,應(yīng)用的價值也越來越高,下面筆者對其具體的應(yīng)用情況進(jìn)行簡單介紹。
紫外分光光度計利用分光裝置將光源產(chǎn)生的連續(xù)光譜分成各種單色光,然后用單色光去照射待側(cè)樣品,研究樣品對不同波長吸收強(qiáng)弱的一種儀器。它具有靈敏度高,快速準(zhǔn)確、操作簡便和選擇性強(qiáng)等優(yōu)點,因此應(yīng)用非常廣泛。在紫外-可見分光光度計的基礎(chǔ)上發(fā)展了眾多的光電類儀器,如生化分析儀、熒光分光光度計、原子吸收分光光度計等。隨著新技術(shù)、新材料、新工藝的發(fā)展和滲透,特別是計算機(jī)的引入,使紫外-可見分光光度計的性能有了很大的提高,從而促使紫外-可見分光光度計在分子生物學(xué)、生物化學(xué)等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究中占有非常重要的地位。
根據(jù)吸收光譜圖上的一些特征吸收,特別是Zda吸收波長入max和摩爾吸收系數(shù)8,是檢定物質(zhì)的常用物理參數(shù)。
將分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以相同濃度配制在同一溶劑中,在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質(zhì),則兩者的光譜圖應(yīng)完全一致。如果沒有標(biāo)樣,也可以和現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照進(jìn)行比較。這種方法要求儀器準(zhǔn)確,精密度高,且測定條件要相同。
由于紫外吸收光譜只含有2-3個較寬的吸收帶,而紫外光譜主要是分子內(nèi)的發(fā)色團(tuán)在紫外區(qū)產(chǎn)生的吸收,與分子和其它部分關(guān)系不大。具有相同發(fā)色團(tuán)的不同分子結(jié)構(gòu),在較大分子中不影響發(fā)色團(tuán)的紫外吸收光譜,不同的分子結(jié)構(gòu)有可能有相同的紫外吸收光譜,但它們的吸收系數(shù)是有差別的。如果分析樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸收波長相同,吸收系數(shù)也相同,則可認(rèn)為分析樣品與標(biāo)準(zhǔn)樣品為同一物質(zhì)。
借助于分光光度法可以得出一些化學(xué)反應(yīng)速度常數(shù),并從兩個或兩個以上溫度條件下得到的速度數(shù)據(jù),得出反應(yīng)活化能。
紫外吸收光譜能測定化合物中含有微量的具有紫外吸收的雜質(zhì)。如果化合物的紫外可見光區(qū)沒有明顯的吸收峰,而它的雜質(zhì)在紫外區(qū)內(nèi)有較強(qiáng)的吸收峰,就可以檢測出化合物中的雜質(zhì)。
不同的極性溶劑產(chǎn)生氫鍵的強(qiáng)度也不同,這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強(qiáng)度,以確定選擇哪一種溶劑。
金屬離子常與有機(jī)物形成絡(luò)合物,多數(shù)絡(luò)合物在紫外可見區(qū)是有吸收的,我們可以利用分光光度法來研究其組成。
紫外可見分光光度計在生命科學(xué)中的應(yīng)用是非常廣泛的,那么具體應(yīng)用在哪些方面呢?以下將為您詳細(xì)說明:
紫外可見分光光度計在氨基酸分析中的應(yīng)用, 主要是用來對氨基酸的定量檢測。因為氨基酸對紫外光的主要吸收波長為230nm, 所以, 我們只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO 到氨基酸的Z大吸收峰230nm 上, 就可測試其吸光度大小, 從而計算出氨基酸的含量。但是, 因為氨基酸分析時, 一般是將它溶解在水中, 而水在230 nm 附近有很多干擾吸收線, 所以, 在用紫外可見分光光度計對氨基酸分析檢測時, 要注意防止干擾的問題。此外, 還需注意: 只有少數(shù)氨基酸有紫外吸收, 多數(shù)氨基酸無紫外吸收或很弱, 測定時要衍生化后再測。

紫外可見分光光度計在糖的分析中,主要是作定量檢測。因為糖對紫外光的主要吸收波長為218nm,所以,對糖類進(jìn)行分析時, 只要采用光度測量模式,將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO 到氨基酸的Zda吸收峰218 nm上,就可測試其吸光度大小,從而計算出糖的含量。
紫外可見分光光度計在蛋白質(zhì)的分析中, Z主要的是作蛋白質(zhì)含量檢測;一般是在蛋白質(zhì)的吸收峰上作吸光度測定。因為蛋白質(zhì)對紫外光的主要吸收波長為280nm, 所以, 采用光度測量模式, 將儀器的波長GOTO 到蛋白質(zhì)的Z大吸收峰波長280nm 上, 測試其吸光度大小, 就可完成對蛋白質(zhì)的定量檢測。
紫外可見分光光度計在多糖的分析中,主要也是作定量檢測。因為多糖對紫外光的主要吸收波長為206nm,所以,我們只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計儀器的波長GOTO到多糖的Zda吸收峰206nm上,就可測試其吸光度大小,從而計算出多糖的含量。
但是多糖的分析難度很大。因為,在206nm處的時候,光源(氘燈)的能量已經(jīng)很弱,儀器光學(xué)系統(tǒng)的能量輸出也很低, 光電倍增管的靈敏度也很低,206nm左右的干擾也很大。所以,用紫外可見分光光度計作多糖的分析是很難的事,目前許多科學(xué)家正在研究中。
紫外可見分光光度計在核酸分析中的應(yīng)用, 主要是用來對核酸的定量檢測;因為核酸的吸收峰在260nm。我們只要采用光度測量模式, 將紫外可見分光光度計的波長GOTO到核酸的Zda吸收峰260nm上, 測試其吸光度大小就是了。
分光光度計是杜包斯克(Duboscq)和奈斯勒(Nessler)等人在1854年將朗伯比爾定律應(yīng)用于定量分析化學(xué)領(lǐng)域,并且設(shè)計了diyi臺比色計。到1918年,美國國家標(biāo)準(zhǔn)局制成了diyi臺紫外可見分光光度計。此后,紫外可見分光光度計經(jīng)不斷改進(jìn),又出現(xiàn)自動記錄、自動打印、數(shù)字顯示、微機(jī)控制等各種類型的儀器,使光度法的靈敏度和準(zhǔn)確度也不斷提高,其應(yīng)用范圍也不斷擴(kuò)大。紫外可見分光光度法從問世以來,在應(yīng)用方面有了很大的發(fā)展,尤其是在相關(guān)學(xué)科發(fā)展的基礎(chǔ)上,促使分光光度計儀器的不斷創(chuàng)新,功能更加齊全,使得光度法的應(yīng)用更拓寬了范圍。目前,分光光度法已為工農(nóng)業(yè)各個部門和科學(xué)研究的各個領(lǐng)域所廣泛采用,成為人們從事生產(chǎn)和科研的有力測試手段。
紫外可見分光光度計技術(shù)在應(yīng)用的過程中,本質(zhì)上沒有太大的改變,但是相關(guān)儀器設(shè)備得到了優(yōu)化,隨著光學(xué)設(shè)計以及電子學(xué)技術(shù)的發(fā)展,相關(guān)研究人員設(shè)計出了新的軟件,降低了儀器使用的難度,提高了儀器設(shè)備的可靠性。紫外可見分光光度計在應(yīng)用的過程中需要借助較多的檢測器,工作效率大大提高了,可以對大樣品進(jìn)行測試,還能對固體樣品進(jìn)行分析,增加了快速掃描等功能。
在當(dāng)前社會,紫外可見分光光度計測量還應(yīng)用了高分辨數(shù)字成像這一新的技術(shù),這也是這一領(lǐng)域新的創(chuàng)新。另外,國外有公司將二極管陣列的制造與光纖采樣相結(jié)合制造出了新的儀器,能對沸騰的液體進(jìn)行原位檢測,還能在線監(jiān)測化學(xué)反應(yīng),與常規(guī)儀器相比,新的檢測方法可檢測濃度上漲了千倍。
紫外可見分光光度計具有儀器價格低廉,適用性廣泛,尤其是采用微機(jī)控制以來,該技術(shù)得到了突飛猛進(jìn)的發(fā)展。紫外可見分光光度計的光、機(jī)、電、算等任何一方面的新技術(shù)都可能再推動紫外可見分光光度計整體性能的進(jìn)步。在追求準(zhǔn)確、快速、可靠的同時,小型化、智能化、在線化、網(wǎng)絡(luò)化成為了現(xiàn)代紫外可見分光光度計新的增長點。紫外可見分光光度計作為一項產(chǎn)業(yè),用戶的需求是其發(fā)展的根本動力。
該文對紫外可見分光光度計的應(yīng)用情況進(jìn)行了介紹,其有著廣泛的應(yīng)用范圍,也收到了良好的應(yīng)用效果??萍荚诓粩噙M(jìn)步,測定儀器也在不斷優(yōu)化,隨著紫外可見分光光度計技術(shù)的不斷發(fā)展,其測定的精密度以及準(zhǔn)確度有著較大的提高,相關(guān)工作人員需要規(guī)范操作,減少實驗各個環(huán)節(jié)的失誤,保證測量數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,從而保證科研的嚴(yán)謹(jǐn)性。
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