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膜片鉗

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膜片鉗法的模式

更新時(shí)間:2025-10-21 03:25:59 類型:膜片鉗的其他相關(guān)知識(shí) 閱讀量:1691
導(dǎo)讀:膜片鉗技術(shù)是通過微玻管電極接觸細(xì)胞膜,用千兆歐姆以上的阻抗使之封接,在電學(xué)上分隔和電極尖開口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域以及其周圍,在此基礎(chǔ)上固定點(diǎn)位,對這膜片上的離子通道的離子電流進(jìn)行監(jiān)測記錄的方法。

1976年德國馬普生物物理研究所Neher和Sakmann創(chuàng)建了膜片鉗技術(shù)(patch clamp recording technique)。這是一種根據(jù)記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜單一的或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù)。生命科學(xué)研究因?yàn)樗突蚩寺〖夹g(shù),獲得了巨大的前進(jìn)動(dòng)力。

以下圖片是膜片鉗法各種模式的模式圖,細(xì)胞吸附式首先建立了單通道記錄,膜內(nèi)面向外和膜外面向內(nèi)的模式也建立了膜內(nèi)面向外和膜外面向內(nèi)的模式,Z近,又分別建立了開放的細(xì)胞吸附式膜內(nèi)面向外和穿孔囊泡膜外面向外的模式。在常規(guī)方法的基礎(chǔ)上,附加穿孔膜片的模式,即是全細(xì)胞記錄法,

常規(guī)全細(xì)胞模式

全細(xì)胞模式是指在細(xì)胞吸附模式上將膜打穿成孔,記錄膜片以外部位的全細(xì)胞膜的離子電流。


穿孔囊泡膜外面向外模式

從穿孔膜片模式  將膜片微電極向上提起,便在微電極處形成一個(gè)膜囊泡,若條件較好,此膜囊泡內(nèi)既會(huì)有細(xì)胞質(zhì)因子又可有線粒體等細(xì)胞器存在。


膜外面向內(nèi)模式

從全細(xì)胞模式將膜片微電極向上提起可得到切割分離的膜片,因?yàn)樗募?xì)胞膜內(nèi)側(cè)面面對膜片微電極腔內(nèi)液,膜外面自然封閉而對外,因此這個(gè)模式被稱為膜外面向內(nèi)模式。


膜內(nèi)面向外模式

將從細(xì)胞吸附模式將已形成巨阻抗封接的膜片微電極向上提起時(shí),則膜片和細(xì)胞體被切割分隔,形成膜內(nèi)面向外的模式。


細(xì)胞吸附模式

對細(xì)胞膜用膜片微電極吸附,進(jìn)行記錄離子通道電流的模式。它的優(yōu)點(diǎn)是在細(xì)胞內(nèi)環(huán)境保持正常的條件下,能夠觀察記錄離子通道活動(dòng)。然而因?yàn)椴荒苤苯拥乜刂萍?xì)胞內(nèi)環(huán)境條件,也不能確切的明確細(xì)胞內(nèi)點(diǎn)位,因此具有不清楚膜片上的實(shí)效點(diǎn)位的缺點(diǎn)。


開放細(xì)胞吸附膜內(nèi)面向外模式

機(jī)械地破壞細(xì)胞吸附模式的膜片以外的某部位的胞膜,在細(xì)胞吸附狀態(tài)下經(jīng)破壞孔調(diào)控細(xì)胞內(nèi)液對內(nèi)面向外的單一離子通道進(jìn)行記錄。


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