手工測序以及自動測序均屬于DNA序列測定,手工測序可分為maxam-gilbert化學(xué)降解法與sanger雙脫氧鏈終止法,事實上,目前dna序列分析的主流是自動測序。373型、377型、310型、3700和3100型等多種型號DNA測序儀均已經(jīng)被美國pe abi公司生產(chǎn)出來了,在這幾款DNA測序儀中,臨床檢測實驗室使用Z多的一種型號要屬310型。
自動測序法
基因分析儀是一臺對DNA片段的堿基順序或大小進行測定和定量的精密儀器,其能夠?qū)崿F(xiàn)灌膠自動化,進樣自動化,數(shù)據(jù)收集分析自動化。DNA測序膠(POP 6)和GeneScan膠(POP 4)等凝膠高分子聚合物也由PE公司來提供,這些凝膠有著均一的孔徑,從而使得配膠條件不一致對測序精度的影響避免了,毛細管電泳裝置、Macintosh電腦、彩色打印機和電泳等附件為其主要的構(gòu)成部件。由于全新的CCD攝影機檢測器為其所使用,因此將PCR片段大小分析和定量的時間縮短為10~40分鐘,將DNA測序縮短至2.5小時。

因為該儀器具有DNA測序,PCR片段大小分析和定量分析等功能,所以能夠進行微衛(wèi)星序列分析、長片段PCR、RT-PCR(定量PCR)等分析、雜合子分析、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(SSCP)、DNA測序。在臨床方面,不但能夠進行常規(guī)DNA測序,微生物與病毒的分型與鑒定、法醫(yī)學(xué)上的親子和個體鑒定、HLA配型、單核苷酸多態(tài)性(SNP)分析、基因突變檢測等均能夠進行。
該儀器的應(yīng)用相當?shù)貜V泛,能夠進行進行dna測序、雜合子分析、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(sscp)、微衛(wèi)星序列分析、長片段pcr、rt-pcr(定量pcr)等分析,臨床上不但能夠進行常規(guī)dna測序,而且還能夠進行法醫(yī)學(xué)上的親子和個體鑒定、微生物與病毒的分型與鑒定、基因突變檢測、hla配型、單核苷酸多態(tài)性(snp)分析等。該儀器之所以有如此多的用途是因為該儀器具有dna測序,pcr片段大小分析和定量分析等功能。
在DNA測序商業(yè)化的浪潮下,完成5個以上有重大經(jīng)濟價值的基因或蛋白的轉(zhuǎn)化應(yīng)用、約500個新的功能基因的發(fā)現(xiàn),10000種微生物、100種動植物基因組測序等目標在我國《生物產(chǎn)業(yè)發(fā)展“十二五”規(guī)劃》中被提出。根據(jù)30-50萬元為微生物進行“基因組完成圖”測序的大致費用而言,千億元級別為DNA測序帶來的市場容量,其還只是DNA測序商業(yè)應(yīng)用市場的冰山一角。
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