手工測(cè)序以及自動(dòng)測(cè)序均屬于DNA序列測(cè)定,手工測(cè)序可分為maxam-gilbert化學(xué)降解法與sanger雙脫氧鏈終止法,事實(shí)上,目前dna序列分析的主流是自動(dòng)測(cè)序。373型、377型、310型、3700和3100型等多種型號(hào)DNA測(cè)序儀均已經(jīng)被美國(guó)pe abi公司生產(chǎn)出來了,在這幾款DNA測(cè)序儀中,臨床檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室使用Z多的一種型號(hào)要屬310型。
測(cè)序凝膠板的制備
1、處理玻璃板
需要保持銀染測(cè)序的玻璃板十分干凈,通常先使用去污劑和溫水對(duì)其進(jìn)行洗滌,再使用去離子水對(duì)玻璃板進(jìn)行沖洗,將殘留的去污劑除去,Z后使用乙醇對(duì)玻璃板進(jìn)行清洗。凝膠染色時(shí)背景會(huì)由于玻璃板上遺留的去污劑微膜而偏高(棕色)。經(jīng)粘合溶液處理能夠在短玻璃板化學(xué)交聯(lián)凝膠。這一步在銀染操作過程中使凝膠撕裂得以避免起到非常重要的作用。

處理長(zhǎng)玻璃板
(1)清洗過的長(zhǎng)玻璃板用浸透Sigmacote溶液的棉紙進(jìn)行擦拭。
(2)5~10min以后,玻璃板上多余的Sigmacote溶液用吸水棉紙擦拭掉。
處理短玻璃板
(1)將5 ml粘合硅烷(Bind Silane)加入到1 ml95%乙醇,0.5%冰乙酸中,使新鮮的粘合溶液配置而成。
(2)必須使用經(jīng)新配的粘合溶液浸透的吸水棉紙對(duì)仔細(xì)清洗過并已經(jīng)自然干燥的玻璃板的整個(gè)板面進(jìn)行擦拭。
(3)在4-5min以后,使用95%乙醇對(duì)玻璃板進(jìn)行單向擦拭,之后沿垂直方向略用力進(jìn)行擦拭,將上述清洗過程重復(fù)三次,每次都必須替換干凈的紙,,將多余的粘合溶液除去。
2. 制備凝膠
(1)在使用粘合硅膠和Sigmacote對(duì)玻璃板進(jìn)行處理以后就能夠進(jìn)行玻璃板的固定。該方法是在玻璃板左右兩側(cè)放上0.2 mm或0.4 mm厚的邊條,在其上壓另一塊玻璃板。將鯊魚齒梳平的一面邊緣插入長(zhǎng)玻璃板的一側(cè),用夾子固定住。
(2)測(cè)序凝膠根據(jù)所需要的凝膠濃度按下表進(jìn)行制備,通常6%~8%的膠濃度能夠使比較好的結(jié)果獲得,在配制過程中,首先使用適量雙蒸水溶解尿素,再將Acr&Bis和10×TBE緩沖液加入,再將終體積使用雙蒸水調(diào)節(jié)到99.2毫升,并且使用0.45毫米的濾膜進(jìn)行過濾,然后將過硫酸銨和TEMED加入。對(duì)尿素進(jìn)行溶解的時(shí)候,加熱沒有必要。若確實(shí)需要加熱,那么應(yīng)當(dāng)?shù)鹊酵耆鋮s溶液以后,才能夠?qū)EMED和過硫酸銨加入,通常灌膠4~6min后,聚合就會(huì)開始,如果聚合不是太好,那么高濃度的TEMED和過硫酸銨就需要被使用。
(3)配制好膠以后,就能夠?qū)δz板進(jìn)行灌制。通常是沿著壓條邊緣往玻璃板的槽中緩慢地倒入凝膠,將凝膠倒完以后,靜止放置讓其完全聚合。
Zda的基因組測(cè)序及研究應(yīng)用ZX之一位于深圳的華大基因研究院,華大基因承擔(dān)了人類基因組計(jì)劃1%的工作任務(wù),之后又對(duì)國(guó)際HAPmap計(jì)劃進(jìn)行了參與與完成,并且將叫做“炎黃一號(hào)”di一個(gè)ZG人也是di一個(gè)亞洲人的基因組測(cè)序完成了。
在業(yè)內(nèi),DNA測(cè)序有著高貴的出身,其將堿基序列這一基因密碼破解,融合了IT技術(shù)與基因組學(xué),將生物信息學(xué)這一新興學(xué)科開創(chuàng)和發(fā)展了出來。傳統(tǒng)的生物學(xué)技術(shù)被以生物信息學(xué)為代表的基因技術(shù)徹底顛覆了,對(duì)生命科學(xué)未來發(fā)展潮流起到引ling作用,在YL健康、環(huán)境保護(hù)、新能源、新材料、現(xiàn)代農(nóng)業(yè)等熱門領(lǐng)域以它為代表的基因工程得到了廣泛地應(yīng)用。
該儀器的應(yīng)用相當(dāng)?shù)貜V泛,能夠進(jìn)行進(jìn)行dna測(cè)序、雜合子分析、單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(sscp)、微衛(wèi)星序列分析、長(zhǎng)片段pcr、rt-pcr(定量pcr)等分析,臨床上不但能夠進(jìn)行常規(guī)dna測(cè)序,而且還能夠進(jìn)行法醫(yī)學(xué)上的親子和個(gè)體鑒定、微生物與病毒的分型與鑒定、基因突變檢測(cè)、hla配型、單核苷酸多態(tài)性(snp)分析等。該儀器之所以有如此多的用途是因?yàn)樵搩x器具有dna測(cè)序,pcr片段大小分析和定量分析等功能。
全部評(píng)論(0條)
登錄或新用戶注冊(cè)
請(qǐng)用手機(jī)微信掃描下方二維碼
快速登錄或注冊(cè)新賬號(hào)
微信掃碼,手機(jī)電腦聯(lián)動(dòng)
①本文由儀器網(wǎng)入駐的作者或注冊(cè)的會(huì)員撰寫并發(fā)布,觀點(diǎn)僅代表作者本人,不代表儀器網(wǎng)立場(chǎng)。若內(nèi)容侵犯到您的合法權(quán)益,請(qǐng)及時(shí)告訴,我們立即通知作者,并馬上刪除。
②凡本網(wǎng)注明"來源:儀器網(wǎng)"的所有作品,版權(quán)均屬于儀器網(wǎng),轉(zhuǎn)載時(shí)須經(jīng)本網(wǎng)同意,并請(qǐng)注明儀器網(wǎng)(m.sdczts.cn)。
③本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明來源的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)或證實(shí)其內(nèi)容的真實(shí)性,不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
④若本站內(nèi)容侵犯到您的合法權(quán)益,請(qǐng)及時(shí)告訴,我們馬上修改或刪除。郵箱:hezou_yiqi
【避坑指南】你的等離子切割機(jī)為什么總燒噴嘴?90%是這3個(gè)原因!
參與評(píng)論
登錄后參與評(píng)論