微流式細(xì)胞儀:以微毛細(xì)管技術(shù)為基礎(chǔ)的新一代高性能流式細(xì)胞儀。自1998年微毛細(xì)管技術(shù)用于流式細(xì)胞檢測(cè)的技術(shù)在美國(guó)獲得專li以來(lái),微流式技術(shù)以微樣本量、微操作量、微學(xué)習(xí)量、微負(fù)擔(dān)以及微體積,為腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、慢性疾病研究以及新藥研發(fā)和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域提供檢測(cè)方案。
組成
微流式細(xì)胞分析儀主要由四部分組成:以微毛細(xì)管專li技術(shù)為基礎(chǔ)的液流系統(tǒng);激光和光學(xué)系統(tǒng);光電檢測(cè)器件;以及軟件系統(tǒng)。
微流式特色的液流系統(tǒng)
微毛細(xì)管技術(shù):樣品上樣時(shí),由微毛細(xì)管與樣品液體接觸的橫截面ZX形成的負(fù)壓區(qū),形成單細(xì)胞流上行。注射泵提供穩(wěn)定精確的上樣流與上樣體積。由微毛細(xì)管和注射泵協(xié)同作用形成的單細(xì)胞流更加精確與穩(wěn)定。運(yùn)行8小時(shí)只產(chǎn)生不到50ml的廢液;允許檢測(cè)樣本Z小上樣量?jī)H為1000個(gè)細(xì)胞;同時(shí)無(wú)鞘液系統(tǒng)的液流系統(tǒng)成固定狀態(tài),儀器操作簡(jiǎn)單,縮短學(xué)習(xí)時(shí)間,從而提高研究效率。
激光和光學(xué)系統(tǒng)
微流式通過激光照射對(duì)細(xì)胞上不同的特性進(jìn)行檢測(cè)。激光器的選擇對(duì)細(xì)胞分析檢測(cè)尤為重要。全固態(tài)激光器(DPL)具有體積小、重量輕、效率高、性能穩(wěn)定、可靠性好、壽命長(zhǎng)、光束質(zhì)量高等優(yōu)點(diǎn)。由于其單位輸出的熱負(fù)荷降低,可獲取更高的功率,更長(zhǎng)的系統(tǒng)壽命和可靠性。除了激光器材料的選擇外,還可根據(jù)激發(fā)波長(zhǎng)對(duì)激光器進(jìn)行選擇。488nm是Z通用的激光器波長(zhǎng),可以激發(fā)包括FITC, PE, PE-Cy5.5, PE-Cy7,PI, CFSC等多種熒光素。640nm激光器是紅色激光器,通用熒光素包括了APC, AlexaFluor647, APC-Cy7等熒光素,多用于免疫檢測(cè)。
光學(xué)系統(tǒng)中的多種濾片的組合設(shè)計(jì)為提高熒光信號(hào)的信噪比提供了保障。帶通濾片(band-Pass filter)是一個(gè)允許特定頻段的波通過,同時(shí)屏蔽其他頻段的濾光光片,如: 690/50表示只有665-715nm范圍內(nèi)的光才能通過,任何小于665nm或大于715nm的光不被透過。因此,確保了對(duì)特異性熒光的檢測(cè),并提高信噪比。
光電檢測(cè)器件
經(jīng)激光激發(fā)的特異性熒光信號(hào),必須通過光電轉(zhuǎn)換器才能將光信號(hào)轉(zhuǎn)換為電子信號(hào),并被計(jì)算機(jī)處理。光電倍增管(PMT)是被廣泛應(yīng)用于熒光信號(hào)檢測(cè)器件。PMT可將微弱熒光信號(hào)通過光電效應(yīng)轉(zhuǎn)變成電信號(hào)并利用二次發(fā)射電極轉(zhuǎn)為電子培增的電真空器件。
由PMT檢測(cè)器輸出的脈沖信號(hào)經(jīng)快速模數(shù)轉(zhuǎn)換器(FAST ADC)處理后輸入到計(jì)算機(jī)內(nèi)。Fast ADC比傳統(tǒng)A/D處理處理速度更快,反應(yīng)更靈敏。
軟件系統(tǒng)
軟件系統(tǒng)是用戶直接接觸的界面。軟件系統(tǒng)通??刂屏藘x器的啟動(dòng)、維護(hù)、樣本的采集和數(shù)據(jù)分析功能。軟件系統(tǒng)的智能化程度決定了儀器的可操作程度。目前被普遍接受的軟件系統(tǒng)通常包括了模塊化的維護(hù)程序、智能化應(yīng)用模塊以及用戶可調(diào)的開放模塊。智能化應(yīng)用模塊越齊全,用戶的學(xué)習(xí)周期則越短,越能盡早上手操作系統(tǒng)。如多色熒光檢測(cè)時(shí)的多色熒光補(bǔ)償通常限制了入門級(jí)用戶操作儀器的難點(diǎn)。Zxin的軟件系統(tǒng)支持自動(dòng)熒光補(bǔ)償,以準(zhǔn)確、標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)置提高儀器的可操作度,擺脫對(duì)經(jīng)驗(yàn)的依賴并確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
由此可見,軟件系統(tǒng)的數(shù)據(jù)分析力是判斷儀器總體表現(xiàn)重要環(huán)節(jié)。提供數(shù)據(jù)分析策略的軟件,往往能提供更直觀的分析結(jié)果,整合縱向數(shù)據(jù)進(jìn)行比較,結(jié)合Z先進(jìn)的統(tǒng)計(jì)模塊,并為實(shí)現(xiàn)自動(dòng)熒光補(bǔ)償提供策略。
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