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膜片鉗

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膜片鉗技術(shù)的發(fā)展?fàn)顩r

更新時間:2025-10-18 12:28:13 類型:膜片鉗的應(yīng)用 閱讀量:1475
導(dǎo)讀:膜片鉗技術(shù)是通過微玻管電極接觸細(xì)胞膜,用千兆歐姆以上的阻抗使之封接,在電學(xué)上分隔和電極尖開口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域以及其周圍,在此基礎(chǔ)上固定點(diǎn)位,對這膜片上的離子通道的離子電流進(jìn)行監(jiān)測記錄的方法。

1976年德國馬普生物物理研究所Neher和Sakmann創(chuàng)建了膜片鉗技術(shù)(patch clamp recording technique)。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜單一的或多個的離子通道分子活動的技術(shù)。它和基因克隆技術(shù)(gene cloning)并架齊驅(qū),給生命科學(xué)研究帶來了巨大的前進(jìn)動力。


發(fā)展?fàn)顩r:

1.記錄方式發(fā)生了很大變化

不僅有傳統(tǒng)的單通道記錄方式與一般的全細(xì)胞幾路方式,還陸陸續(xù)續(xù)發(fā)展了松散封接記錄方式、膜穿孔記錄方式、巨膜片記錄方式等等。

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2.不斷出現(xiàn)的應(yīng)用技術(shù)

發(fā)展了微電極內(nèi)灌注技術(shù)以便能夠從電極內(nèi)施加藥物和更換電極內(nèi)液。在研究細(xì)胞間的縫隙連接通道事,發(fā)展了雙膜片記錄法。膜片探針技術(shù)指的是通過把富含神經(jīng)遞質(zhì)受體的游離膜片靠近突觸部位,能夠檢測突觸活動以及遞質(zhì)釋放。膜片填塞技術(shù)是指如果把特異的膜片探針插入卵母細(xì)胞,能夠檢測細(xì)胞里第二信使的含量。發(fā)展了膜電容測定法,為了方便研究細(xì)胞的胞吞和胞吐機(jī)制。


3.有很多能夠使用的標(biāo)本種類

有各種各樣的標(biāo)本可以提供使用,從Z早的內(nèi)分泌細(xì)胞、肌細(xì)胞(心肌、平滑肌、骨骼肌)和神經(jīng)元發(fā)展到胃壁細(xì)胞、上皮細(xì)胞、血細(xì)胞、肝細(xì)胞免疫細(xì)胞、精母細(xì)胞、耳窩毛細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞;從培養(yǎng)細(xì)胞(包括細(xì)胞株)以及急性分散細(xì)胞發(fā)展到組織片(如腦片、脊髓片)乃至整體動物;從青蛙、蠑螈、爪蟾卵母、蝸牛細(xì)胞發(fā)展到雞細(xì)胞、人細(xì)胞、大鼠細(xì)胞等等;從動物細(xì)胞發(fā)展到真菌、植物以及細(xì)胞細(xì)菌。除此以外膜片鉗技術(shù)在平面雙分子層(Planar bilayer)、脂質(zhì)體(Liposome)等人工標(biāo)本上也得到了廣泛的應(yīng)用。


4.研究的對象不再只是離子通道

如今,不僅可以對離子通道(配體門控性、電壓門控性、第二信使介導(dǎo)的離子通道、機(jī)械敏感性離子通道和縫隙連接通道等等)進(jìn)行研究,而且可以可以對離子泵、交換體和可興奮細(xì)胞的胞吞以及胞吐機(jī)制進(jìn)行研究。


5.膜電極不僅僅是傳統(tǒng)意義上的電信號記錄電極

它還能成為其他研究方法的工具,例如它作為進(jìn)行單細(xì)胞PCR技術(shù)時的細(xì)胞內(nèi)容物抽吸工具被使用。


6.越來越廣泛的應(yīng)用范圍

膜片鉗技術(shù)已經(jīng)運(yùn)用在如分子生物學(xué)、藥理學(xué)、免疫學(xué)等等生物領(lǐng)域的很多學(xué)科里。變成生物學(xué)研究的主要技術(shù)手段之一。膜片鉗的主要發(fā)展趨勢是和其他生物學(xué)技術(shù)結(jié)合應(yīng)用。


7.全自動膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用

全自動膜片鉗技術(shù)不但通量高,一次性可以記錄幾十個甚至幾百個細(xì)胞,并且記錄的質(zhì)量均一,一致。實(shí)現(xiàn)了自動化找細(xì)胞、形成封接。破膜等等,避免了復(fù)雜的操作,節(jié)省了精力和時間。


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