Real-timePCR是在PCR擴增過程中，通過熒光信號，對PCR進程進行實時檢測。由于在PCR擴增的指數(shù)時期，模板的Ct值和該模板的起始拷貝數(shù)存在線性關(guān)系，所以成為定量的依據(jù)。

技術(shù)原理：

在PCR反應(yīng)體系中，將熒光基因加入，利用熒光信號累積對整個PCR進程進行實時監(jiān)測，Z后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線定量分析未知模板的方法，被稱為real-time Q-PCR技術(shù)。在 real-time 技術(shù)的發(fā)展過程中，起關(guān)鍵作用的是兩個重要的發(fā)現(xiàn)：

1.90年代早期，發(fā)現(xiàn)了TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性，其能夠?qū)⑻禺愋詿晒庥浱结樈到?，所以，具備了對PCR產(chǎn)物間接的檢可能性。

2.在這之后，在一密閉的反應(yīng)管中，可以通過對熒光雙標(biāo)記探針的運用對反應(yīng)全過程實時地監(jiān)測。real-time Q-PCR方法由于這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展在在研究工作中得到了廣泛地運用。

PCR反應(yīng)過程中，產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，Z終PCR反應(yīng)進入平臺期，不再以指數(shù)方式生成模板。

在傳統(tǒng)的PCR中，PCR反應(yīng)的Z終擴增產(chǎn)物是通過凝膠電泳分離并且通過熒光染色來檢測的。所以對PCR產(chǎn)物定量的終點法存在不可靠之處。

在real-time Q-PCR中，整個PCR反應(yīng)擴增過程，對擴增的相關(guān)的熒光信號進行了實時的監(jiān)測和連續(xù)地分析。隨著反應(yīng)時間的進行，監(jiān)測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲 線。在PCR反應(yīng)早期，不能明顯地區(qū)分產(chǎn)生熒光的水平不能與背景，而后熒光的產(chǎn)生進入指數(shù)期、線性期和Z終的平臺期，PCR產(chǎn)物的量可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點上的時候進行檢測并且對模板Z初的含量進行推斷。

相關(guān)應(yīng)用：

應(yīng)用行業(yè)

各級各類YL機構(gòu)、大學(xué)及研究所、CDC、檢驗檢疫局、獸醫(yī)站、食品企業(yè)及乳品廠等。

由于qPCR是實時定量檢測致病病原體基因核酸，因此它比化學(xué)發(fā)光、時間分辨、蛋白芯片等免疫學(xué)方法更具獨到優(yōu)勢。

科學(xué)研究

醫(yī)學(xué)、農(nóng)牧、生物相關(guān)分子生物學(xué)定量研究。

食品安全

食源微生物、食品過敏源、轉(zhuǎn)基因、乳品企業(yè)阪崎腸桿菌等檢測。

動物疾病檢測

禽流感、新城疫、口蹄疫、豬瘟、沙門菌、大腸埃希菌、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲病等、炭疽芽孢桿菌。

臨床疾病診斷

各型肝炎、艾滋病、禽流感、結(jié)核、性病等傳染病診斷和LX評價；地中海貧血、血友病、性別發(fā)育異常、智力低下綜合癥、胎兒畸形等優(yōu)生優(yōu)育檢測；腫瘤標(biāo)志物及瘤基因檢測實現(xiàn)腫瘤病診斷；遺傳基因檢測實現(xiàn)遺傳病診斷。