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人Klotho蛋白酶聯免疫分析試劑盒使用說明

本文由 上??婆d商貿有限公司 整理匯編

2018-10-03 10:00 147閱讀次數

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本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T5U/L-200U/L使用目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中Klotho蛋白含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人Klotho蛋白水平。用純化的人Klotho蛋白抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入Klotho蛋白,再與HRP標記的Klotho蛋白抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Klotho蛋白呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人Klotho蛋白濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(320U/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。160U/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液80U/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液40U/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液20U/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液10U/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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