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P糖蛋白(P-gp)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明

本文由 上海科興商貿(mào)有限公司 整理匯編

2018-10-03 10:00 183閱讀次數(shù)

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本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T5.0pg/ml-160pg/ml使用目的:本試劑盒用于測定樣本中P糖蛋白(P-gp)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中P糖蛋白(P-gp)水平。用純化的P糖蛋白(P-gp)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入P糖蛋白(P-gp),再與HRP標記的P糖蛋白(P-gp)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的P糖蛋白(P-gp)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中P糖蛋白(P-gp)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(320pg/ml)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1、標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。160pg/ml5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液80pg/ml4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液40pg/ml3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液20pg/ml2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液10pg/ml1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7、溫育:操作同3。8、洗滌:操作同5。9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11、測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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