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人Insulin定量EIA試劑盒使用說明

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2018-09-13 10:01 392閱讀次數(shù)

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電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com人Insulin定量EIA試劑盒使用說明原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人Insulin單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的Insulin與單抗結(jié)合,加入酶標(biāo)抗體,形成免疫復(fù)合物連接在板上,加入酶底物TMB,出現(xiàn)藍(lán)色,加終止液硫酸,顏色變黃,在450nm處測OD值,Insulin濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中Insulin濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)6ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):6瓶一套20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml封板紙一張底物工作液(TMBSolution)12ml坐標(biāo)紙一張終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時(shí);更長時(shí)間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品**次使用時(shí)用0.5ml的蒸餾水溶解,放置半小時(shí)混勻后使用,用后放在-20oC保存。溶解后濃度分別為140、80、32、16、8、0uIU/ml。3.標(biāo)本如果需要稀釋可以用蒸餾水稀釋。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.建立標(biāo)準(zhǔn)曲線:設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔6孔,每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul。2.加樣:待測品孔每孔各加入待測樣品50ul。3.每孔加酶標(biāo)抗體工作液50ul。將反應(yīng)板置37℃120分鐘。(室溫過夜可以提高靈敏度)4.洗板:同前。5.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。6.每孔加入100ul終止液混勻。7.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品140、80、32、16、8、0uIU/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)Insulin含量。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的Insulin檢測濃度小于4uIU/ml。2.特異性:可同時(shí)檢測重組或天然的人Insulin。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷!

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