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酶組織化學(xué)對(duì)組織處理的基本要求
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2015-03-03 00:00 833閱讀次數(shù)
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酶組織化學(xué)對(duì)組織處理的基本要求
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酶組織化學(xué)對(duì)組織處理的基本要求- 酶組織化學(xué)對(duì)組織處理的基本要求[詳細(xì)]
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2015-03-03 00:00
報(bào)價(jià)單
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免疫酶組織化學(xué)技術(shù)的常用酶及其底物- 免疫酶組織化學(xué)技術(shù)的常用酶及其底物（一）辣根過(guò)氧化物酶在免疫酶技術(shù)中，辣根過(guò)氧化物酶（HRP）是Z理想、應(yīng)用Z多的標(biāo)記酶，是從一種稱為辣根的植物根部分離、純化獲得。HRP分子中含有含鐵血紅素基團(tuán)（高鐵血紅素），是HRP的活性基團(tuán)，在溶液中呈棕黃色，HRP中的高鐵血紅素與H202形成一種復(fù)合物，然后脫水，氧原子形成。幾種底物可使HRP氧化，Z常用的有二種，即多酚和硝基鹽。HRP的優(yōu)點(diǎn)有以下幾個(gè)方面。（1）體積小（分子質(zhì)量40kDa），不會(huì)遮蓋抗原的結(jié)合部位，且穿透力強(qiáng)，易與細(xì)胞內(nèi)抗原結(jié)合。（2）穩(wěn)定且易獲得高純度酶制品。（3）具有較高活性及特異性。（4）不溶性好，終產(chǎn)物不向周邊擴(kuò)散。（5）組織中內(nèi)源性酶較少，YZ方法較多。（6）價(jià)格相對(duì)較便宜。（7）特異性底物是過(guò)氧化氫（H202），可選用不同電子供體（發(fā)色基團(tuán)），使終產(chǎn)物呈不同顏色。例如3，3’二氨基聯(lián)苯胺（DAB）為棕褐色，3氨基9乙基卡巴唑（AEC）為紅色，4氯1苯酚（CN）為藍(lán)色。AEC室溫下較穩(wěn)定，產(chǎn)物不溶于水，但溶于有機(jī)溶劑，所以不能進(jìn)行脫水等處理；又因其需用水溶性封固劑，時(shí)間長(zhǎng)易褪色，限制了其應(yīng)用。DAB是廣泛應(yīng)用的電子供體，產(chǎn)物既不溶于水，又不溶于有機(jī)溶液，可長(zhǎng)期保存。其終產(chǎn)物具有嗜鋨性，經(jīng)鋨酸處理后電子密度增加，適用于電鏡下觀察。但DAB的缺點(diǎn)是具有潛在的致癌性，所以應(yīng)盡量減少吸人和接觸次數(shù)，并嚴(yán)格管理廢液。盡管有人反對(duì)應(yīng)用DAB，但目前還未找到一種比它更好的替代品，所以應(yīng)用依然Z為廣泛。HRP與底物H202呈色反應(yīng)原理見圖4l。HRP的特異底物為H202，在分解Hz02過(guò)程中，與H202形成初級(jí)復(fù)合物，無(wú)電子供體時(shí)，反應(yīng)不再繼續(xù)進(jìn)行，當(dāng)電子供體存在時(shí)，反應(yīng)以一定的速度形成第二種復(fù)合物。HRP催化H202已形成的中間型產(chǎn)物，迅速生成水，酶被還原，電子供體被氧化、聚合，再經(jīng)氧化環(huán)化?Z后形成吲哚胺多聚體，此多聚體進(jìn)一步氧化、環(huán)化，形成苯乙肼聚合體，如供氫體是DAB，產(chǎn)物為棕褐色；如是AEC，產(chǎn)物為紅色。（二）堿性磷酸酶目前商品化的AKP均來(lái)源于牛小腸，稱為牛腸堿性磷酸酶（calfintestinalkalinephosphatase），其分子質(zhì)量為100kDa，故而穿透細(xì)胞組織的能力較弱。某些組織細(xì)胞內(nèi)含有較高的內(nèi)源性堿性和酸性磷酸酶，例如人體和鼠類、狗等動(dòng)物組織的肝、腎、腸，對(duì)IHC染色會(huì)產(chǎn)生一定的干擾，因此限制了它的應(yīng)用。AKP主要用于血涂片或涂片的白細(xì)胞抗原檢測(cè)。但是由于AKP的呈色反應(yīng)的敏感性要比HRP高23倍，顯色時(shí)間可從30min到48h，可與HRP組合進(jìn)行IHC的雙重或多重標(biāo)記。另外，內(nèi)源性堿性磷酸酶可以在底物緩沖液中加入左旋咪唑（1evamisole）和鎂離子（氯化鎂），或提高底物緩沖液的pH值，可以有效地消除內(nèi)源性堿性磷酸酶，使該酶應(yīng)用比例日趨增多。目前該酶已廣泛應(yīng)用于原位雜交檢測(cè)的顯色和雙重酶標(biāo)染色。（三）葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶（glucoseoxdase，GOD）以葡萄糖為底物，生成藍(lán)色不溶性沉淀。該終產(chǎn)物較穩(wěn)定，不溶于有機(jī)溶劑，故易保存，但因其分子質(zhì)量為150kDa，不能穿人細(xì)胞，影響了其應(yīng)用。另外，該酶的敏感性較低，主要是酶與底物反應(yīng)敏感性低。目前主要用于IHC的多重標(biāo)記。免疫酶組織化學(xué)技術(shù)的常用酶及其底物[詳細(xì)]
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2018-09-14 10:01
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標(biāo)準(zhǔn)
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- 主要用途組織對(duì)氧磷酶1（PON1）有機(jī)磷酸酶活性光度法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)對(duì)氧磷酶1反應(yīng)系統(tǒng)中，水解有機(jī)磷酸，釋放出對(duì)硝基苯產(chǎn)物，出現(xiàn)吸光峰值的變化，即采用光度法來(lái)測(cè)定組織樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種動(dòng)物和人體組織裂解懸液樣品對(duì)氧磷酶1的有機(jī)磷酸酶活性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。技術(shù)背景對(duì)氧磷酶（parapxonase；PON；EC3.1.8.1）是一種水解酯類（esters）、有機(jī)磷酸酯（organophosphate）和內(nèi)酯（lactone）的多態(tài)性酶，分成三個(gè)亞型：PON1、PON2、PON3。結(jié)構(gòu)同源性在基因?qū)用嫔线_(dá)70%，在氨基酸層面上達(dá)65%。其中PON1，為鈣離子依賴性和高密度脂蛋白（highdensitylipoprotein；HDL）相關(guān)性糖蛋白，含有354氨基酸，43Kd分子量，分布在肝臟、腎臟、小腸和血清（50毫克/升）中。具有有機(jī)磷酸酶（organophosphtase）、磷酸三酯酶（phosphotriesterase）、芳香酯酶（arylesterase）和硫內(nèi)酯酶（thiolactonase）等多重活性：PON1與HDL結(jié)合，水解各種LDL和HDL上的氧化性磷酯，以及芳香族羧酸酯、芳香族和脂肪族內(nèi)酯等，例如殺蟲劑對(duì)硫磷（parathion）降解產(chǎn)物對(duì)氧磷（paraoxon）、毒死蜱（chlorpyriphos）、神經(jīng)毒因子*（sarin）和*（soman）、同型半胱氨酸（homocysteine）硫內(nèi)酯、二氫香豆素（dihydrocourmarin；DHC）、γ-丁內(nèi)酯（γ-butyrolactone）等，延緩和YZ低密度脂蛋白（lowdensitylipoprotein；LDL）氧化作用，阻止脂質(zhì)過(guò)氧化物產(chǎn)生，保護(hù)脂蛋白以及質(zhì)膜受到氧化損傷，達(dá)到抗粥樣硬化（antiatherogenic）、、抗氧化的功能。PON1活性降低與慢性腎衰、糖尿病、外周神經(jīng)病變、家屬性高膽固醇血癥、心血管疾病、肝纖維化等有關(guān)。PON2為44Kd分子量，分布在腦、肝臟、肺、腎臟、睪丸等大多數(shù)組織中，但血清中測(cè)不到。PON2具有水解芳香酯和內(nèi)酯酶的功能，但不能水解有機(jī)磷酸。具有細(xì)胞內(nèi)抗氧化作用，預(yù)防粥樣硬化等功能。PON3為40Kd分子量，主要分布在肝臟中，少量在腎臟中。主要水解各種內(nèi)酯和環(huán)狀羧酸酯，具有抗氧化功能。基于人工合成底物對(duì)硝基苯磷酸二乙酯（diethyl-p-nitrophenylphosphate），在對(duì)氧磷酶1的作用下，水解產(chǎn)生對(duì)硝基苯（p-nitrophenol）和磷酸二乙酯（diethylphosphate），通過(guò)對(duì)硝基苯產(chǎn)物吸收峰值的變化（405nm波長(zhǎng)），來(lái)定量分析對(duì)氧磷酶1的有機(jī)磷酸酶活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為：[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
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2016-07-05 00:00
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2008-01-11 00:00
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2008-01-08 00:00
選購(gòu)指南
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- 樣品前處理有可能影響水分活度的測(cè)量結(jié)果。消除或者減少這個(gè)前處理帶來(lái)的可能變化會(huì)得到更加一致和準(zhǔn)確的水分活度測(cè)量結(jié)果。減少由于樣品前處理帶來(lái)的結(jié)果變化會(huì)確保研究人員和技術(shù)人員更好的分析其他因素影響對(duì)樣品水分活度帶來(lái)的變化。了解樣品前處理對(duì)水分活度結(jié)果的影響，以及建立可靠的前處理方法來(lái)減少結(jié)果的變化是非常重要的。因此，非常有必要了解不同的前處理方法是怎樣影響不同樣品的水分活度結(jié)果。Decagon的研究人員對(duì)許多多組分食品、藥物和化妝品進(jìn)行了3種不同前處理方法的水分活度結(jié)果進(jìn)行了分析和研究。[詳細(xì)]
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2019-01-02 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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- SM2000對(duì)紡織品的前處理
- SM2000對(duì)紡織品的前處理[詳細(xì)]
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2024-09-13 23:04
應(yīng)用文章
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- 測(cè)量中對(duì)水質(zhì)分析的基本要求及如何提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性
- 測(cè)量中對(duì)水質(zhì)分析的基本要求及如何提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性[詳細(xì)]
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2024-09-28 21:14
標(biāo)準(zhǔn)
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- 奶粉對(duì)包裝與材料基本要求及質(zhì)量控制解決方案
- 奶粉對(duì)包裝與材料基本要求及質(zhì)量控制解決方案[詳細(xì)]
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2015-07-09 00:00
其它
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- 顯微組織對(duì)2530鑄鋼件力學(xué)性能的影響[詳細(xì)]
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2015-12-14 00:00
應(yīng)用文章
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- 組織蛋白去乙?；?HD)ELISA試劑盒
- 組織蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2016-07-11 00:00
選購(gòu)指南
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