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生孢梭菌制備

本文由 上海研生實(shí)業(yè)有限公司 整理匯編

2018-09-28 10:00 1001閱讀次數(shù)

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生孢梭菌制備是要計(jì)可培養(yǎng)的數(shù)量還是測(cè)菌液內(nèi)菌的數(shù)量。如果計(jì)可培養(yǎng)的數(shù)量的話就直接涂布到瓊脂培養(yǎng)基上,培養(yǎng)后計(jì)數(shù)就可以。若是要計(jì)菌液里的數(shù)量可以測(cè)一下OD值或者用熒光燃料染色后再在顯微鏡下計(jì)數(shù)。菌懸液的濃度要求的確是每毫升小于100cfu,但是**在50到100cfu之間,小于50的話容易出現(xiàn)假陰性。還有你是要做無菌的方法驗(yàn)證還是無菌培養(yǎng)基的靈敏度檢查呢?至于確定菌的量,是在硫乙醇中計(jì)數(shù)的。其實(shí)無菌方法驗(yàn)證中的菌懸液的制備也是依ZG藥典(2005年版二部)附錄XIH無菌檢查法中“培養(yǎng)基靈敏度檢查”項(xiàng)下的方法,制備成小于100CFU/ml的對(duì)照用菌液。所以無論你做什么,菌懸液的制備方法都是一樣的。具體方法就是,先把生孢梭菌在硫乙醇中培養(yǎng)24小時(shí),然后吸取1毫升培養(yǎng)液用生理鹽水進(jìn)行10倍稀釋,我的經(jīng)驗(yàn)是,稀釋到10的-7次方就是在100cfu以下了(這個(gè)你得自己多做幾次平行實(shí)驗(yàn)或驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),看到底稀釋到多少倍。Z初不好把握的時(shí)候可以同時(shí)培養(yǎng)幾個(gè)臨近的梯度),然后取至少200ml的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基到試管里(要求無菌),然后接種1ml制備好的菌懸液到硫乙醇試管里,在32.5度下培養(yǎng)18h,然后開始計(jì)數(shù)。生孢梭菌在液體的硫乙醇里會(huì)長成梭子一樣的單個(gè)菌落,這時(shí)拿的時(shí)候千萬不要震動(dòng),然后開始計(jì)數(shù)(一個(gè)單獨(dú)的“梭子”計(jì)一個(gè)菌落)。注:如果培養(yǎng)時(shí)間太長會(huì)產(chǎn)生渾濁,不便于計(jì)數(shù)。如果震動(dòng)試管也會(huì)渾濁。硫乙醇的量盡量大一點(diǎn),這樣便于計(jì)數(shù)。一些具體的東西,還需要你實(shí)際去操作后,發(fā)現(xiàn)問題,再解決問題。貌似你現(xiàn)在的經(jīng)驗(yàn)不是很足,**的是找個(gè)懂的人帶你做幾次,或去別的公司或研究所參觀學(xué)習(xí),這樣學(xué)起來會(huì)快一點(diǎn)。

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