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腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒實驗需求

本文由 研域(上海)化學(xué)試劑有限公司 整理匯編

2018-09-19 10:00 428閱讀次數(shù)

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腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒需要的器材(1)聚苯乙烯塑料板(簡稱酶標(biāo)板)40孔或96孔,人ELISA試劑盒ELISA檢測儀,50μl及100μl加樣器,塑料滴頭,小毛巾,洗滌瓶。(2)小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。(3)4℃冰箱,37℃孵育箱。腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒需要的試劑(1)包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):NaHCO31.59克NaHCO32.93克加蒸餾水至1000ml(2)洗滌緩沖液(PH7.4PBS):0.15MKH2PO40.2克Na2HPO412H2O2.9克NaCl8.0克KCl0.2克Tween-200.05%0.5ml加蒸餾水至1000ml(3)稀釋液:牛血清白蛋白(BSA)0.1克人ELISA試劑盒加洗滌緩沖液至100ml或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。(4)終止液(2MH2SO4):蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。(5)底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml0.1M檸檬酸(19.2克/L)24.3ml加蒸餾水50ml。(6)TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml底物緩沖液(PH5.5)10ml0.75%H2O232μl(7)ABTS使用液:ABTS0.5mg底物緩沖液(PH5.5)1ml3%H2O22μl(8)抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。(9)正常人血清和陽性對照血清。腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒的包被:包被用抗原或抗體的濃度,包被的溫度和時間,包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗的特點和材料的性質(zhì)而選定。抗體和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置一夜,37℃中保溫2小時被認(rèn)為具有同等的包被效果。包被的Z適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化,每批材料需通過實驗與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒的封閉:封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。抗原或抗體包被時所用的濃度較低,吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙,封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,從而排斥在ELISA其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。封閉的手續(xù)與包被相類似。Z常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白,也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑,其Zda的特點是價廉,可以高濃度使用(5%)。高質(zhì)量的速溶食用低脂奶粉即可直接當(dāng)作封閉劑使用,但由于奶粉的成份復(fù)雜,而且封閉后的載體不易長期保存,因此在試劑盒的制備中較少應(yīng)用。

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