本文由 北京華安麥科生物技術(shù)有限公司 整理匯編

2012-08-24 00:00 203閱讀次數(shù)

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  www.biokanu.com(Digoxin)酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。1使用目的：本試劑盒用于血液、血清、尿液等樣本中(Digoxin)殘留的定量檢測(cè)。2實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔板包被有(Digoxin)偶聯(lián)抗原，加入(Digoxin)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離(Digoxin)與微孔條上預(yù)包被的(Digoxin)偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)(Digoxin)抗體酶標(biāo)記物，用TMB底物顯色，加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)，吸光值與樣品中(Digoxin)含量成反比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中(Digoxin)的含量。3試劑盒組成3.1預(yù)包被的(Digoxin)偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板：1塊（12孔×8條）。3.2(Digoxin)標(biāo)準(zhǔn)品：6瓶（1ml/瓶），含量分別是：0ug/L,0.01ug/L,0.03ug/L,0.15ug/L,0.45ug/L,1.35ug/L3.3抗(Digoxin)抗體酶結(jié)合物：1瓶（6ml）。3.4顯色液A：1瓶（6ml）。3.5顯色液B：1瓶（6ml）。3.6終止液：1瓶（6ml），2M硫酸。3.7樣本稀釋液：1瓶（10×,6ml），用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。3.9說明書一份。4需要而未提供的材料4.1設(shè)備4.1.1波長(zhǎng)450nm酶標(biāo)儀。4.1.2粉碎機(jī)。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相當(dāng)?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2甲醇。5貯存5.1試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍5.2未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存6注意事項(xiàng)6.1使用試劑盒前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書。6.2不要使用過期試劑盒。6.3試劑盒使用前，將試劑恢復(fù)至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時(shí)。6.4標(biāo)準(zhǔn)品中含有(Digoxin)，使用時(shí)應(yīng)特別注意，操作時(shí)應(yīng)帶手套。6.5終止液中含有硫酸，使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用，否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。6.7不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用；不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。6.8稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果6.9混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。7工作液準(zhǔn)備7.1(Digoxin)標(biāo)準(zhǔn)品溶液：0ug/L,0.01ug/L,0.03ug/L,0.15ug/L,0.45ug/L,1.35ug/L7.2濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用7.3樣本稀釋液：備用7.3顯色劑：已備用，避免光線直照7.4反應(yīng)終止液：已備用8樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴(yán)格按說明書操作，提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋，否則會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存）8.1取10g粉碎的樣品，加20ml70%甲醇溶液8.2QL振蕩3分鐘8.3用WhatmanNo1濾紙過濾8.4取100l處理后的樣品，加入400l樣本稀釋液8.5取50μl稀釋液進(jìn)行分析（稀釋倍數(shù)10）動(dòng)物組織前處理8.6準(zhǔn)確稱取1±0.05g勻漿后的組織樣品到50ml的聚苯乙烯離心管中；加入3ml乙腈--丙酮提取溶液，2000rpm劇烈震蕩20s后4000r/min以上離心5min8.7取上清液0.8ml在50℃氮?dú)饬飨麓蹈?.8加入2mL1×樣品稀釋液Ⅰ,750rpm渦旋20s8.9取100ml用于分析飼料前處理方法8.10準(zhǔn)確稱取1±0.05g粉碎飼料樣品到50ml的聚苯乙烯離心管中；加入4ml乙腈，1ml丙酮，2000rpm劇烈震蕩20s后4000r/min以上離心3min8.11取上清液0.7ml在50℃氮?dú)饬飨麓蹈?.12加入1mL1×樣品稀釋液Ⅰ,渦旋20s，取出100ml加到900ml1×樣品稀釋液Ⅰ，混勻后取100ml用于分析牛奶前處理方法8.13取1ml牛奶樣品到2ml離心管中；用1×樣品稀釋液Ⅱ稀釋30倍，混勻后取100ml用于分析奶粉前處理方法8.14準(zhǔn)確稱取0.3g奶粉樣品到7ml的聚苯乙烯離心管中；加入2ml1×樣品稀釋液Ⅲ，2ml正己烷，震蕩混勻8.154000r/min以上離心5min，去除有機(jī)層和中間層，取下層溶液100ml到300ml1×樣品稀釋液Ⅲ8.16混勻后取100ml用于分析9酶免分析步驟9.1實(shí)驗(yàn)須知9.1.1實(shí)驗(yàn)開始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫（25±2℃），時(shí)間約2小時(shí)?；販刂潦覝兀?5±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注：一定保證回溫充分，否則影響檢測(cè)的極ng確度和準(zhǔn)確度。9.1.2使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存9.1.3請(qǐng)不要改變分析程序9.1.4請(qǐng)使用極ng確的微量移液器9.1.5操作一旦開始，請(qǐng)不要中斷任何程序9.1.6ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序，請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作9.1.7為避免交叉污染，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣9.1.8加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面9.2分析步驟9.2.1預(yù)先進(jìn)行編號(hào)，標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，推薦進(jìn)行雙孔檢測(cè)9.2.2取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（20×）稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)9.2.4在B0孔中加入50l0.0ug/L標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.5在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.6在各樣品孔中加入50l樣品溶液9.2.7在所有孔中加入50l的抗(Digoxin)抗體酶結(jié)合物9.2.8輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。9.337℃溫浴30min（溫浴過程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板，可以減少雙孔誤差）9.3.1甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，Z后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。9.4反應(yīng)9.4.1洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50l顯色液A，再加50l顯色液B；輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之徹底混勻9.4.237℃溫浴10min9.4.3每孔中加入50l終止液，混勻9.4.4在450nm下檢測(cè)吸光度，結(jié)果在5min內(nèi)讀取。10結(jié)果計(jì)算10.1定量分析10.1.1所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B0）再乘以1**%，即百分吸光度值。B標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B00ug/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值10.1.2以(Digoxin)濃度的對(duì)數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值，可從曲線上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo)，即為(Digoxin)濃度的對(duì)數(shù)值，求得反對(duì)數(shù)即為測(cè)定液中(Digoxin)濃度C（ug/L）10.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋，因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。10.2半定量測(cè)定10.1.1目測(cè)半定量測(cè)定：首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。10.1.2儀器半定量測(cè)定：首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。11特異性物質(zhì)交叉反應(yīng)(Digoxin)1**%12試劑盒參數(shù)本試劑盒檢測(cè)下限為0.01ug/LB0吸光度**值應(yīng)大于1.0試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8％，板間誤差小于15％。用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80％。13標(biāo)準(zhǔn)曲線模式（僅供參考）試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.01ug/L~1.35ug/L。14分析限制本試劑盒檢測(cè)為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。[詳細(xì)]

  2018-09-22 10:00

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  2024-10-02 18:27

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• 內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒說明

  顯色基質(zhì)鱟試劑盒使用說明書（終點(diǎn)顯色法，含偶氮化試劑）【用途】顯色基質(zhì)鱟試劑（ChromogenicEnd-pointTachypleusAmebocyteLysate,CETAL）用于體外細(xì)菌內(nèi)毒素的定量檢測(cè)，禁止以任何途徑進(jìn)入機(jī)體?！驹怼亏c試劑為鱟科動(dòng)物東方鱟的血液變形細(xì)胞溶解物的冷凍干燥品,鱟試劑中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在適宜的條件下（溫度，pH值及無干擾物質(zhì)），細(xì)菌內(nèi)毒素激活C因子，引起一系列酶促反應(yīng)，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的顯色基質(zhì)，使其分解為多肽和黃色的對(duì)硝基苯胺（pNA，λmax=405nm）。在一定時(shí)間內(nèi)，pNA的生成量與細(xì)菌內(nèi)毒素濃度成正相關(guān)，據(jù)此，可以定量供試品的內(nèi)毒素濃度。同時(shí)，對(duì)硝基苯胺（pNA）也可用偶氮化試劑染成玫瑰紅色（λmax=545nm），避免了供試品本身的顏色對(duì)405nm處吸收峰的干擾?！緳z測(cè)限】按反應(yīng)時(shí)間不同可檢測(cè)0.1EU/ml-1EU/ml和0.01EU/ml-0.1EU/ml兩個(gè)區(qū)間（反應(yīng)時(shí)間T1和T2見出廠檢驗(yàn)報(bào)告）?！驹噭┖薪M成】細(xì)菌內(nèi)毒素工作品，2支鱟試劑，1.7ml/支，2支顯色基質(zhì)，1.7ml/支，2支偶氮化試劑1，10ml/支，2支偶氮化試劑2，10ml/支，2支偶氮化試劑3，10ml/支，2支HCl（反應(yīng)終止劑），50ml/瓶，1瓶細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，50ml/瓶，2瓶【貯存】陰涼處,**2-8℃,避光貯存?！居梅ā?.材料和設(shè)備1.1試劑鱟試劑、細(xì)菌內(nèi)毒素工作品、顯色基質(zhì)、偶氮化試劑1、偶氮化試劑2、偶氮化試劑3、HCl（反應(yīng)終止劑）、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水。1.2器材旋渦混合儀、移液器、多道移液器、封口膜、試管架。恒溫水浴箱（37±1℃）、分光光度計(jì)。注意：接觸試劑及供試品的所有器皿必須是無熱原的（我公司提供無熱原耗材）。玻璃器皿可經(jīng)250℃干烤至少60分鐘去除熱原。2.供試品的貯存與預(yù)處理備注：若供試品為血液類，請(qǐng)參照配套血液相關(guān)處理試劑使用說明書。2.1供試品的pH值應(yīng)在6-8之間，若超出此范圍，需用無熱原緩沖液、0.1N氫氧化鈉或0.1N鹽酸調(diào)節(jié)。2.2若供試品中可能存在鱟實(shí)驗(yàn)的干擾物質(zhì)，處理參見【供試品的干擾試驗(yàn)】。2.3若供試品中可能含有β－葡聚糖（β－葡聚糖會(huì)產(chǎn)生G因子旁路反應(yīng)，干擾內(nèi)毒素檢測(cè)），需選用特異性鱟試劑（我公司提供）。2.4若供試品為一些KJ素如頭孢類KJ素和磺胺制劑會(huì)對(duì)偶氮染色劑產(chǎn)生偶聯(lián)反應(yīng)而干擾偶氮化顯色，需要選用不含偶氮化試劑的試劑盒（我公司提供）。2.5若供試品的本底吸光度值大于0.5,必須對(duì)供試品進(jìn)行稀釋后再檢測(cè)。2.6若供試品顏色較深（例如溶血），或在酸性條件下顏色加深（例如一些組織培養(yǎng)介質(zhì)）,必須設(shè)置供試品空白管以扣除供試品自身的顏色本底。供試品空白管不加入鱟試劑，以等體積鱟試劑的溶劑（該處為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水）代替。其余操作同供試品管。3.實(shí)驗(yàn)操作3.1細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線所采用的內(nèi)毒素濃度可以為0.01,0.025,0.05,0.1EU/ml或0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml。稀釋方法如下（以0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml為例）：取細(xì)菌內(nèi)毒素工作品1支，按細(xì)菌內(nèi)毒素工作品使用說明書稀釋為10EU/ml的內(nèi)毒素溶液，再稀釋為1.0EU/ml的內(nèi)毒素溶液，以1.0EU/ml的內(nèi)毒素溶液為母液按下表稀釋成0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml的濃度梯度。配制好的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)用完。表1內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制內(nèi)毒素濃度（EU/ml）10.50.250.1加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（ml）00.50.750.9加1EU/ml內(nèi)毒素溶液（ml）10.50.250.1鱟試劑：按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于鱟試劑中，輕輕振搖使鱟試劑完全溶解,注意不要用旋渦混勻儀激烈振搖。溶解的鱟試劑應(yīng)在10分鐘內(nèi)用完。顯色基質(zhì)：按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于顯色基質(zhì)中，輕輕振搖使顯色基質(zhì)完全溶解。顯色基質(zhì)溶液可在無污染的條件下于4C貯存8小時(shí)以內(nèi)。偶氮化試劑1：按標(biāo)示量加反應(yīng)終止劑鹽酸于偶氮化試劑1中，偶氮化試劑2：按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于偶氮化試劑2中，偶氮化試劑3：按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于偶氮化試劑3中，偶氮化試劑溶液可于4C貯存1周。3.4實(shí)驗(yàn)操作取無熱原試管，加入100ml細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水、內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，或供試品。再加入100ml鱟試劑溶液，混勻，37C溫育T1分鐘。溫育結(jié)束，加入100ml顯色基質(zhì)溶液，混勻，37C溫育T2分鐘。溫育結(jié)束，加入500ml偶氮化試劑1溶液，混勻，加入500ml偶氮化試劑2溶液，混勻加入500ml偶氮化試劑3溶液，混勻，靜置5分鐘，于545nm波長(zhǎng)處讀取吸光度值。（見表２）表2實(shí)驗(yàn)操作陰性對(duì)照內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)供試品加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（ml）100加內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液（ml）100加供試品（ml）100加鱟試劑（ml）100100100混勻，37C溫育T1分鐘加顯色基質(zhì)溶液（ml）100100100混勻，37C溫育T2分鐘加偶氮化試劑1溶液（ml）5005005004.數(shù)據(jù)處理建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：Y=bX+a，其中Y為545nm處吸光度值，X為內(nèi)毒素的濃度，b為直線斜率，a為Y軸截距。當(dāng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)同時(shí)滿足如下三個(gè)條件時(shí)實(shí)驗(yàn)才有效：1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)r≥0.980，2.標(biāo)準(zhǔn)曲線Zdi點(diǎn)的Y值大于陰性對(duì)照的Y值，3.供試品平行管的平均值在標(biāo)準(zhǔn)曲線的區(qū)間內(nèi)?！竟┰嚻返母蓴_試驗(yàn)】供試品的干擾試驗(yàn)詳見《中華人民共和國(guó)藥典》2005版中《細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法》的“光度測(cè)定法干擾試驗(yàn)”。當(dāng)鱟試劑、供試品的來源、配方、生產(chǎn)工藝改變或試驗(yàn)環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的變化時(shí)，須進(jìn)行干擾試驗(yàn),步驟如下:1選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線中點(diǎn)或一個(gè)靠近中點(diǎn)的內(nèi)毒素濃度（設(shè)為λm），作為供試品干擾試驗(yàn)中添加的內(nèi)毒素濃度，配制含λm內(nèi)毒素的供試品陽性對(duì)照，測(cè)量出該溶液的內(nèi)毒素濃度,稱為Cs；2測(cè)量出未添加外源內(nèi)毒素的供試品溶液內(nèi)毒素濃度,稱為Ct；3計(jì)算該試驗(yàn)條件下的回收率R＝（CsCt）/λm×1**%4當(dāng)R在50%～200%之間，則認(rèn)為在此試驗(yàn)條件下供試品溶液不存在干擾作用。5當(dāng)R在50%～200%之外，需對(duì)供試品進(jìn)行系列稀釋（稀釋倍數(shù)不得超過Zda有效稀釋倍數(shù)MVD）或進(jìn)行其它處理消除干擾,每一稀釋溶液都重復(fù)步驟1-3,直到內(nèi)毒素的回收率R在50%～200%之間。選擇回收率RZ接近1**%的稀釋倍數(shù)進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)。[詳細(xì)]

  2018-09-18 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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