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FH0100-人張氏肝細(xì)胞;Changliver
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2024-05-30 09:33 60閱讀次數(shù)
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FH0100-人張氏肝細(xì)胞;Changliver
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FH0100-人張氏肝細(xì)胞;Changliver
- FH0100-人張氏肝細(xì)胞;Changliver[詳細(xì)]
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2024-05-30 09:33
應(yīng)用文章
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FH0080-人肝細(xì)胞;QSG-7701
- FH0080-人肝細(xì)胞;QSG-7701[詳細(xì)]
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2024-05-30 09:33
應(yīng)用文章
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人肝細(xì)胞生長因子ELISA檢測
- 人肝細(xì)胞生長因子ELISA檢測本試劑僅供研究使用標(biāo)本:血清人肝細(xì)胞生長因子ELISA檢測二、注意事項(xiàng)此試劑為體外檢測試劑,效期內(nèi)使用,試劑應(yīng)視為傳染物,不同總批號(hào)的試劑不能混用。使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出,室溫放置至少30分鐘。保存于2-8℃,請勿冷凍,有效期請見盒內(nèi)標(biāo)示。濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后,請于37℃孵育15分鐘人肝細(xì)胞生長因子ELISA檢測三、操作步驟每孔分別加入已稀釋的樣品、標(biāo)準(zhǔn)品各100ul。將板置于37℃溫育30分鐘。甩盡板中液體,用應(yīng)用洗滌液進(jìn)行洗滌,每次停留30秒,在紙上拍干。重復(fù)操作5次。每孔加入酶標(biāo)偶合液100ul。將板置于37℃溫育30分鐘。甩盡板中液體,用應(yīng)用洗滌液進(jìn)行洗滌,每次停留30秒,在紙上拍干。重復(fù)操作5次。每孔加底物A、底物B各50ul,置37℃恒溫箱反應(yīng)15分鐘。8.每孔加終止液50ul,于450nm波長讀O.D.值。人肝細(xì)胞生長因子ELISA檢測四、結(jié)果判斷儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值。檢測值范圍:0800pg/ml敏感度:1.0pg/mlKLH血藍(lán)蛋白抗體0.2mlKLH小鼠抗血藍(lán)蛋白抗體0.2mlLamininalpha5層粘蛋白α5抗體0.1mlIntegrinβ3/CD61(Integrinbeta3)整合素β3抗體0.2mlJAK1(Tyrosine-proteinkinaseJAK1;Januskinase1)蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-1抗體0.2mlJAK2(Tyrosine-proteinkinaseJAK2;Januskinase2;JAK-2)蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-2抗體0.1mlJAK2(Tyrosine-proteinkinaseJAK2;Januskinase2;JAK-2)蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-2抗體0.2mlphosphoJAK2(phospho-Tyr1007+Tyr1008)磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗體0.2mlJNK1/3(c-Junamino-terminalkinase1/3)c-Jun氨基末端激酶1/3抗體0.2mlJab1(c-Junactivationdomain-bindingprotein1)Jun激活區(qū)域-連接蛋白1抗體0.2mlphospho-JNK1/2/3(pThr183/pTyr185)抗磷酸化氨基末端激酶1/2/3抗體0.2mlJNK1/2/3抗氨基末端激酶1/2/3抗體0.2mlKCNA5(Potassiumvoltage-gatedchannelsubfamilyAmember5)鉀電壓閥門通道混合器相關(guān)亞家族成員5抗體0.2mlKi-67Ki-67Antigen抗體0.2mlKi-67(AntigenidentifiedbymonoclonalantibodyKi67)Ki67抗體0.1mlKif14protein驅(qū)動(dòng)蛋白家族Member14蛋白抗體0.2mlKiss-1(Metastasis-suppressorKiSS-1precursor)腫瘤轉(zhuǎn)移YZ基因抗體0.2mlKlf4(Kruppellikefactor4)腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子/上皮鋅指蛋白4抗體0.2mlphospho-Klf5/CKLF/Kruppellikefactor5(pSer272)磷酸化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗體0.2mlKLF6(Kruppel-likefactor6)轉(zhuǎn)染抑癌基因KLF6抗體0.2mlKLF13/RFLAT-1(Kruppellikefactor13)腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子130.2mlKLK1(Kallikrein1)激肽釋放酶1抗體0.2mlκOR(kappaOpioidreceptor)kappa型受體抗體0.2mlKLK3(Kallikrein3)激肽釋放酶3/舒血管素3抗體0.2mlRabbitIgG/AlexaFluor350AlexaFluor350標(biāo)記兔IgG(細(xì)胞流式同型對照)0.1mlMouseIgG/AlexaFluor350AlexaFluor350標(biāo)記小鼠IgG(細(xì)胞流式同型對照)0.1mlGoatIgG/AlexaFluor350AlexaFluor350標(biāo)記羊IgG(細(xì)胞流式同型對照)0.1mlKLK4(Kallikrein4)激肽釋放酶4抗體0.2mlKLK7(Kallikrein7)激肽釋放酶7抗體0.2mlKLK9(Kallikrein9)激肽釋放酶9抗體0.2mlKLK10(Kallikrein10)激肽釋放酶10抗體0.2mlKLK14(Kallikrein14)激肽釋放酶14抗體0.2mlK-ras原癌基因K-ras抗體0.1mlK-ras原癌基因K-ras抗體0.2mlKu70(ATPdependentDNAhelicase2subunit1)DNA修復(fù)酶Ku70抗體0.1mlGoatanti-rabbitIgG/AlexaFluor488AlexaFluor488標(biāo)記山羊抗兔IgG(H+L)0.1mlGoatanti-mouseIgG/AlexaFluor488AlexaFluor488標(biāo)記山羊抗小鼠IgG(H+L)0.1mlRabbitanti-mouseIgG/AlexaFluor488AlexaFluor488標(biāo)記兔抗小鼠IgG(H+L)0.1mlGoatanti-humanIgG/AlexaFluor488AlexaFluor488標(biāo)記山羊抗人IgG0.1mlKu70(ATPdependentDNAhelicase2subunit1)DNA修復(fù)酶Ku70抗體0.2mlKu-80DNA修復(fù)酶Ku-80抗體0.2mlKv1.3/PCN3(PotassiumChannelKv1.3)離子通道蛋白Kv1.3抗體0.2mlKv3.3/Kcnc3(potassiumvoltagegatedchannel,Shaw-relatedsubfamily,member3)離子通道蛋白Kv3.3抗體0.2mlLAMA3/Laminin5alpha3(Lamininalpha3)層粘蛋白α3抗體0.2mlβ-lactoglobulin(bovine)牛β-乳球蛋白抗體0.2mlLAG-3/CD223(Lymphocyteactivationgene3)淋巴細(xì)胞活化基因-3抗體0.2mlLangerin/CD207/CLEC4K(C-typelectindomainfamily4memberK)白細(xì)胞分化抗原CD207抗體0.2mlGoatanti-bovineIgG/AlexaFluor488AlexaFluor488標(biāo)記羊抗牛IgG0.1mlGoatanti-bovIgM/AlexaFluor488AlexaFluor488標(biāo)記羊抗牛IgM0.1mlGoatanti-chiIgG/AlexaFluor488AlexaFluor488標(biāo)記羊抗雞IgG0.1mlGoatanti-humanIgA/AlexaFluor488AlexaFluor488標(biāo)記羊抗人IgA0.1mlLAP18/stathmin(leukemiaassociatedprotein18)白血病相關(guān)蛋白18/癌蛋白18抗體0.2mlLAT/LAT1(LinkerforactivationofTcell1)T細(xì)胞活化連接蛋白0.2mlLAIR-1/CD305(Leukocyte-associatedimmunoglobulin-likereceptor1)白細(xì)胞相關(guān)免疫球蛋白樣受體1抗體0.2mlLayilin透明質(zhì)酸受體抗體0.2mlgoatanti-mouseIgG(beads)兔抗小鼠IgG免疫磁珠2mlLAIR-2/CD306(Leukocyte-associatedimmunoglobulin-likereceptor2)白細(xì)胞相關(guān)免疫球蛋白樣受體2抗體0.2mlLCAT(lecithincholesterolacyltransferase)卵磷膽固醇?;D(zhuǎn)移酶抗體0.2mlLDL-R(Low-densitylipoproteinreceptorprecursor)低密度脂蛋白受體抗體0.2mlox-LDL(oxidizedlowdensitylipoprotein)抗氧化低密度脂蛋白抗體0.2ml[詳細(xì)]
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2018-09-14 10:01
產(chǎn)品樣冊
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FH0109-人肝細(xì)胞;HL-7702[L-02]
- FH0109-人肝細(xì)胞;HL-7702[L-02][詳細(xì)]
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2024-05-30 09:33
應(yīng)用文章
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FH1140-人正常肝細(xì)胞;WRL68
- FH1140-人正常肝細(xì)胞;WRL68[詳細(xì)]
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2024-05-30 09:33
應(yīng)用文章
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人肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒
- 人肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2013-12-06 00:00
操作手冊
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人肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒
- 人肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2013-12-05 00:00
專利
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人肝細(xì)胞生長因子(HGF)檢測試劑盒
- 人肝細(xì)胞生長因子(HGF)檢測試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-29 09:37
報(bào)價(jià)單
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人肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒說明書
- 人肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人HGF單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的HGF與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人HGF,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液,在450nm處測OD值,HGF濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中HGF濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):4.8ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時(shí);更長時(shí)間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.3ml蒸餾水混勻,配成16000pg/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,每管加入標(biāo)本稀釋液300ul。在**管中加入16000pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出300ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品8000、4000、2000、1000、500、250、125、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)HGF含量。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的HGF檢測濃度小于50pg/ml。2.特異性:可同時(shí)檢測重組或天然的人HGF。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:01
產(chǎn)品樣冊
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人肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA檢測試劑盒
- 人肝細(xì)胞生長因子(HGF)樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。人肝細(xì)胞生長因子(HGF)操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為1200ng/L,800ng/L,400ng/L,200ng/L,100ng/L)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。[詳細(xì)]
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2018-09-19 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒使用說明書
- 人肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒使用說明書[詳細(xì)]
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2014-06-30 00:00
其它
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人肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒使用說明書
- 人肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒使用說明書[詳細(xì)]
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2014-05-29 00:00
選購指南
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大鼠肝細(xì)胞瘤
- 大鼠肝細(xì)胞瘤[詳細(xì)]
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2015-10-23 00:00
課件
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大鼠肝細(xì)胞ELISA試劑盒
- 大鼠肝細(xì)胞生長因子(HGF)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中肝細(xì)胞生長因子(HGF)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠肝細(xì)胞生長因子(HGF)水平。用純化的大鼠肝細(xì)胞生長因子(HGF)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入肝細(xì)胞生長因子(HGF),再與HRP標(biāo)記的肝細(xì)胞生長因子(HGF)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的肝細(xì)胞生長因子(HGF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠肝細(xì)胞生長因子(HGF)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(1600ng/L)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-09-14 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠肝細(xì)胞的分離
- 實(shí)驗(yàn)試劑鈉60mg/kg鏈蛋白酶E灌注液含Ⅳ型膠原酶的灌注液Histodenz液RPMI1640液胎牛血清碘酒乙醇實(shí)驗(yàn)設(shè)備高速離心機(jī)平皿硅化三角燒瓶“0”號(hào)絲線針管一次性輸液管恒溫振蕩器120目、300目鋼網(wǎng)50ml聚丙烯離心管實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)室大鼠實(shí)驗(yàn)步驟1.大鼠以3%鈉60mg/kg麻醉后,依次碘酒、乙醇消毒;2.以十字型切口打開腹腔,暴露內(nèi)臟,將腸管推向腹腔的左側(cè),暴露出下腔靜脈和門靜脈,首先游離出下腔靜脈,將膽總管結(jié)扎。然后分離門靜脈,將其分支一一結(jié)扎,并在門靜脈的近端和遠(yuǎn)端分別預(yù)置“0”號(hào)絲線一根,用針管內(nèi)預(yù)先吸有肝素的l8號(hào)套管針穿刺門靜脈,退出針芯,見門靜脈有回血后結(jié)扎固定,迅速接通灌注系統(tǒng),并剪開下腔靜脈建立流出道,以20ml/min的速率灌注預(yù)灌注液(37℃),同時(shí)將肝臟完整地分離下來,置入一平皿中;3.灌注約10min后,肝臟完全變?yōu)榈S褐色,關(guān)閉預(yù)灌注液三通開關(guān),以15ml/min速率灌注50ml(25mg)鏈蛋白酶E灌注液,然后再以15ml/min速率灌注含Ⅳ型膠原酶的灌注液(37℃);4.將一根一次性輸液管一端浸入培養(yǎng)皿液面以下,另一端插入膠原酶溶液瓶,建立膠原酶的循環(huán)灌注;5.20~25min后,當(dāng)肝臟組織完全變軟,撕去肝包膜,去除結(jié)締組織,鈍性粉碎肝組織制備細(xì)胞懸液;6.將細(xì)胞懸液倒入一預(yù)先裝有100ml、37℃預(yù)熱的振蕩消化液硅化三角燒瓶中,將三角燒瓶放恒溫振蕩器中振蕩消化30min(200r/min,37℃),振蕩消化后的細(xì)胞懸液依次經(jīng)120目、300目鋼網(wǎng)過濾,收集于2個(gè)50ml聚丙烯離心管中;7.1700r/min離心5min(4℃),吸棄上清液。每管加入40mlRPMI1640液,反復(fù)吹打,使細(xì)胞充分懸??;8.200r/min離心2min(20℃)2次,使細(xì)胞懸液中剩余的肝細(xì)胞沉淀,去除肝細(xì)胞;9.上清液l700r/min離心5min(4℃),沉淀肝的非實(shí)質(zhì)細(xì)胞,吸棄上清液,用RPMI1640液1700r/min離心5min(4℃)再?zèng)_洗2~3次;10.將33%的Histodenz液以RPMI1640液稀釋成為11%Histodenz液,加入l1%Histodenz液重懸細(xì)胞沉淀,反復(fù)輕柔吹打,使細(xì)胞充分懸浮;11.配制15%的Histodenz液,在10ml離心管的底部先小心地鋪4ml15%的Histodenz,然后將l1%Histodenz細(xì)胞懸液小心地鋪在15%的Histodenz液上,上面再小心地滴加一層無血清的RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)液。在這一過程中一定要避免各層液體混合;12.兩離心管3000r/min離心30min(4℃),垂直位小心取下離心管,可以看到明顯的細(xì)胞分層,將11%Histodenz液與15%Histodenz液交界面間的細(xì)胞仔細(xì)地吸出,用無血清RPMI1640液1700r/min離心5min(4℃)沖洗2次;13.培養(yǎng):用含體積分?jǐn)?shù)20%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液將細(xì)胞懸浮,移人培養(yǎng)瓶,于37℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)30min,計(jì)數(shù),以1×106個(gè)/ml的濃度接種于新瓶中培養(yǎng),24h后洗去未貼壁的細(xì)胞,即可獲得純化的大鼠肝細(xì)胞。[詳細(xì)]
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2018-10-08 10:01
產(chǎn)品樣冊
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FH0338-小鼠肝細(xì)胞;AML12
- FH0338-小鼠肝細(xì)胞;AML12[詳細(xì)]
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2024-05-30 09:33
應(yīng)用文章
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FH0403-大鼠肝細(xì)胞;BRL
- FH0403-大鼠肝細(xì)胞;BRL[詳細(xì)]
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2024-05-30 09:33
應(yīng)用文章
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FH1265-大鼠肝細(xì)胞;IAR20
- FH1265-大鼠肝細(xì)胞;IAR20[詳細(xì)]
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2024-05-30 09:33
應(yīng)用文章
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FH0003-人尤文氏肉瘤;RD-ES
- FH0003-人尤文氏肉瘤;RD-ES[詳細(xì)]
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2024-05-30 09:33
應(yīng)用文章
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人抗肝細(xì)胞胞質(zhì)1型抗體(LC1)ELISA試劑盒
- 人抗肝細(xì)胞胞質(zhì)1型抗體(LC1)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中人抗肝細(xì)胞胞質(zhì)1型抗體(LC1)含量。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人抗肝細(xì)胞胞質(zhì)1型抗體(LC1)水平。用純化的人抗肝細(xì)胞胞質(zhì)1型抗體(LC1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入抗肝細(xì)胞胞質(zhì)1型抗體(LC1),再與HRP標(biāo)記的抗肝細(xì)胞胞質(zhì)1型抗體(LC1)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的抗肝細(xì)胞胞質(zhì)1型抗體(LC1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人抗肝細(xì)胞胞質(zhì)1型抗體(LC1)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。操作步驟:1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng):1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時(shí)請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-10-19 10:00
產(chǎn)品樣冊
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