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簡化內毒素檢測—從庫存到批次放行
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2024-09-20 01:54 462閱讀次數
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簡化內毒素檢測—從庫存到批次放行
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簡化內毒素檢測—從庫存到批次放行
- 簡化內毒素檢測—從庫存到批次放行[詳細]
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2024-09-20 01:54
產品樣冊
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內毒素檢測恒溫儀
- 《ZG藥典》2002年版細菌內毒素檢查法要求:反應試管應“垂直放入37±1℃適宜恒溫器中,保溫60±2分鐘”。根據這一要求,公司研制開發(fā)了一種專用于凝膠法細菌內毒素檢查的實驗設備N10型試管恒溫儀。與傳統(tǒng)使用的恒溫水浴箱比較,N10型試管恒溫儀有如下特點:產品特點1.即時溫度顯示、時間遞減顯示2.自動故障檢測及報警功能3.蜂鳴器報警提示功能4.溫度偏差校準功能5.便捷的模塊更換,便于清潔與消毒6.內置超溫保護裝置7.具有中斷暫停功能8.液晶顯示,薄膜開關[詳細]
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2018-09-10 11:11
產品樣冊
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300 30003 CS - 簡化細菌內毒素檢測:全球先進的實驗室配備Sievers Eclipse
- QC微生物實驗室需要更簡便、更快速的細菌內毒素檢測(BET,bacterial endotoxin testing),同時完全保持合規(guī)性和可靠性。[詳細]
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2025-07-29 13:31
應用文章
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內毒素檢測試劑盒說明
- 顯色基質鱟試劑盒使用說明書(終點顯色法,含偶氮化試劑)【用途】顯色基質鱟試劑(ChromogenicEnd-pointTachypleusAmebocyteLysate,CETAL)用于體外細菌內毒素的定量檢測,禁止以任何途徑進入機體?!驹怼亏c試劑為鱟科動物東方鱟的血液變形細胞溶解物的冷凍干燥品,鱟試劑中含有C因子、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在適宜的條件下(溫度,pH值及無干擾物質),細菌內毒素激活C因子,引起一系列酶促反應,激活凝固酶原形成凝固酶,凝固酶分解人工合成的顯色基質,使其分解為多肽和黃色的對硝基苯胺(pNA,λmax=405nm)。在一定時間內,pNA的生成量與細菌內毒素濃度成正相關,據此,可以定量供試品的內毒素濃度。同時,對硝基苯胺(pNA)也可用偶氮化試劑染成玫瑰紅色(λmax=545nm),避免了供試品本身的顏色對405nm處吸收峰的干擾?!緳z測限】按反應時間不同可檢測0.1EU/ml-1EU/ml和0.01EU/ml-0.1EU/ml兩個區(qū)間(反應時間T1和T2見出廠檢驗報告)?!驹噭┖薪M成】細菌內毒素工作品,2支鱟試劑,1.7ml/支,2支顯色基質,1.7ml/支,2支偶氮化試劑1,10ml/支,2支偶氮化試劑2,10ml/支,2支偶氮化試劑3,10ml/支,2支HCl(反應終止劑),50ml/瓶,1瓶細菌內毒素檢查用水,50ml/瓶,2瓶【貯存】陰涼處,**2-8℃,避光貯存。【用法】1.材料和設備1.1試劑鱟試劑、細菌內毒素工作品、顯色基質、偶氮化試劑1、偶氮化試劑2、偶氮化試劑3、HCl(反應終止劑)、細菌內毒素檢查用水。1.2器材旋渦混合儀、移液器、多道移液器、封口膜、試管架。恒溫水浴箱(37±1℃)、分光光度計。注意:接觸試劑及供試品的所有器皿必須是無熱原的(我公司提供無熱原耗材)。玻璃器皿可經250℃干烤至少60分鐘去除熱原。2.供試品的貯存與預處理備注:若供試品為血液類,請參照配套血液相關處理試劑使用說明書。2.1供試品的pH值應在6-8之間,若超出此范圍,需用無熱原緩沖液、0.1N氫氧化鈉或0.1N鹽酸調節(jié)。2.2若供試品中可能存在鱟實驗的干擾物質,處理參見【供試品的干擾試驗】。2.3若供試品中可能含有β-葡聚糖(β-葡聚糖會產生G因子旁路反應,干擾內毒素檢測),需選用特異性鱟試劑(我公司提供)。2.4若供試品為一些KJ素如頭孢類KJ素和磺胺制劑會對偶氮染色劑產生偶聯反應而干擾偶氮化顯色,需要選用不含偶氮化試劑的試劑盒(我公司提供)。2.5若供試品的本底吸光度值大于0.5,必須對供試品進行稀釋后再檢測。2.6若供試品顏色較深(例如溶血),或在酸性條件下顏色加深(例如一些組織培養(yǎng)介質),必須設置供試品空白管以扣除供試品自身的顏色本底。供試品空白管不加入鱟試劑,以等體積鱟試劑的溶劑(該處為細菌內毒素檢查用水)代替。其余操作同供試品管。3.實驗操作3.1細菌內毒素標準溶液配制標準曲線所采用的內毒素濃度可以為0.01,0.025,0.05,0.1EU/ml或0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml。稀釋方法如下(以0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml為例):取細菌內毒素工作品1支,按細菌內毒素工作品使用說明書稀釋為10EU/ml的內毒素溶液,再稀釋為1.0EU/ml的內毒素溶液,以1.0EU/ml的內毒素溶液為母液按下表稀釋成0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml的濃度梯度。配制好的內毒素標準溶液應在4小時內用完。表1內毒素標準溶液配制內毒素濃度(EU/ml)10.50.250.1加細菌內毒素檢查用水(ml)00.50.750.9加1EU/ml內毒素溶液(ml)10.50.250.1鱟試劑:按標示量加細菌內毒素檢查用水于鱟試劑中,輕輕振搖使鱟試劑完全溶解,注意不要用旋渦混勻儀激烈振搖。溶解的鱟試劑應在10分鐘內用完。顯色基質:按標示量加細菌內毒素檢查用水于顯色基質中,輕輕振搖使顯色基質完全溶解。顯色基質溶液可在無污染的條件下于4C貯存8小時以內。偶氮化試劑1:按標示量加反應終止劑鹽酸于偶氮化試劑1中,偶氮化試劑2:按標示量加細菌內毒素檢查用水于偶氮化試劑2中,偶氮化試劑3:按標示量加細菌內毒素檢查用水于偶氮化試劑3中,偶氮化試劑溶液可于4C貯存1周。3.4實驗操作取無熱原試管,加入100ml細菌內毒素檢查用水、內毒素標準溶液,或供試品。再加入100ml鱟試劑溶液,混勻,37C溫育T1分鐘。溫育結束,加入100ml顯色基質溶液,混勻,37C溫育T2分鐘。溫育結束,加入500ml偶氮化試劑1溶液,混勻,加入500ml偶氮化試劑2溶液,混勻加入500ml偶氮化試劑3溶液,混勻,靜置5分鐘,于545nm波長處讀取吸光度值。(見表2)表2實驗操作陰性對照內毒素標準供試品加細菌內毒素檢查用水(ml)100加內毒素標準溶液(ml)100加供試品(ml)100加鱟試劑(ml)100100100混勻,37C溫育T1分鐘加顯色基質溶液(ml)100100100混勻,37C溫育T2分鐘加偶氮化試劑1溶液(ml)5005005004.數據處理建立標準曲線:Y=bX+a,其中Y為545nm處吸光度值,X為內毒素的濃度,b為直線斜率,a為Y軸截距。當實驗數據同時滿足如下三個條件時實驗才有效:1.標準曲線的相關系數r≥0.980,2.標準曲線Zdi點的Y值大于陰性對照的Y值,3.供試品平行管的平均值在標準曲線的區(qū)間內?!竟┰嚻返母蓴_試驗】供試品的干擾試驗詳見《中華人民共和國藥典》2005版中《細菌內毒素檢查法》的“光度測定法干擾試驗”。當鱟試劑、供試品的來源、配方、生產工藝改變或試驗環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗結果的變化時,須進行干擾試驗,步驟如下:1選擇標準曲線中點或一個靠近中點的內毒素濃度(設為λm),作為供試品干擾試驗中添加的內毒素濃度,配制含λm內毒素的供試品陽性對照,測量出該溶液的內毒素濃度,稱為Cs;2測量出未添加外源內毒素的供試品溶液內毒素濃度,稱為Ct;3計算該試驗條件下的回收率R=(CsCt)/λm×1**%4當R在50%~200%之間,則認為在此試驗條件下供試品溶液不存在干擾作用。5當R在50%~200%之外,需對供試品進行系列稀釋(稀釋倍數不得超過Zda有效稀釋倍數MVD)或進行其它處理消除干擾,每一稀釋溶液都重復步驟1-3,直到內毒素的回收率R在50%~200%之間。選擇回收率RZ接近1**%的稀釋倍數進行內毒素檢測。[詳細]
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2018-09-18 10:00
產品樣冊
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簡化光譜儀
- 簡化光譜儀[詳細]
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2008-10-14 00:00
報價單
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兔內毒素ELISA檢測試劑盒
- 兔內毒素ELISA檢測試劑盒本試劑僅供研究使用標本:血清或血漿試驗原理:Endotoxins試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知Endotoxins濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將Endotoxins和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中Endotoxins的濃度呈比例關系。試劑盒內容及其配制試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標準品:80pg/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進行稀稀空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型標準品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素標記的抗Endotoxins抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進行稀釋底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型標本稀釋液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型自備材料1.蒸餾水。2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3.振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。2.實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項1.試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。2.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。3.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6.洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。7.底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。8.加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。9.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液5、保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。兔內毒素ELISA檢測試劑盒試劑的準備1.標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:80pg/ml(6號標準品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。40pg/ml(5號標準品)100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液20pg/ml(4號標準品)100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液10pg/ml(3號標準品)100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液5.0pg/ml(2號標準品)100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液2.5pg/ml(1號標準品)100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液0pg/ml(空白對照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。操作步驟1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。4.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。6.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。9.在450nm波長處測定各孔的OD值。建議使用的實驗方案標準品濃度(pg/ml)A8080樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品局限6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到極ng確的結果。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。兔內毒素ELISA檢測試劑盒樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。2.特異性:不與其它細胞因子反應。3.重復性:板內、板間變異系數均小于10%。結果判斷與分析1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的Endotoxins標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的Endotoxins含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。3、檢測值范圍:0-80pg/ml4、敏感度:0.1pg/ml[詳細]
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2018-11-04 10:00
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2024-09-30 22:50
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2015-11-23 00:00
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2015-03-17 00:00
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- N10_細菌_內毒素檢測_恒溫儀產品樣冊[詳細]
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2016-10-19 17:24
期刊論文
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大鼠內毒素(Endotoxin)ELISA 檢測試劑盒現貨
- 大鼠(Rat)內毒素(Endotoxin)ELISA檢測試劑盒用途:大鼠EndotoxinELISA試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、緩沖液中細胞上清液及各種體液中的Endotoxin。本試劑盒可以檢測天然和重組的Endotoxin。本試劑盒專用于科研、而非用于臨床診斷。試驗原理:大鼠Endotoxin試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知Endotoxin濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將Endotoxin和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中Endotoxin的濃度呈比例關系。試劑盒內容及其配制試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標準品:80pg/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進行稀稀空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型標準品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素標記的抗Endotoxin抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型洗滌緩沖液1瓶(60ml)1瓶(30ml)按說明書進行稀釋底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型大鼠(Rat)內毒素(Endotoxin)ELISA檢測試劑盒自備材料1.蒸餾水。2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500u、1000lul。3.振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。2.實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項1.試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。2.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。3.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6.洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。7.底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。8.加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。9.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準備1.標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:80pg/ml(6號標準品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。40pg/ml(5號標準品)100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液20pg/ml(4號標準品)100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液10pg/ml(3號標準品)100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液5.0pg/ml(2號標準品)100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液2.5pg/ml(1號標準品)100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液0pg/ml(空白對照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。2.洗滌緩沖液(20×)的稀釋:蒸餾水20倍稀釋。大鼠(Rat)內毒素(Endotoxin)ELISA檢測試劑盒操作步驟1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。4.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。6.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。9.在450nm波長處測定各孔的OD值。建議使用的實驗方案標準品濃度(pg/ml)A8080樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品結果分析以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的Endotoxin標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的Endotoxin含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。大鼠(Rat)內毒素(Endotoxin)ELISA檢測試劑盒局限6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到極ng確的結果。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。2.特異性:不與人其它細胞因子反應。3.重復性:板內、板間變異系數均小于10%。[詳細]
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2018-09-19 10:00
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膜分離技術檢測內毒素及去除方法
- 膜分離技術檢測內毒素及去除方法[詳細]
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2024-09-17 20:02
實驗操作
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2023-06-20 10:45
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