本文由 上海昨非實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司 整理匯編

2016-10-19 17:24 704閱讀次數(shù)

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• N10_細(xì)菌_內(nèi)毒素檢測(cè)_恒溫儀產(chǎn)品樣冊(cè)

  N10_細(xì)菌_內(nèi)毒素檢測(cè)_恒溫儀產(chǎn)品樣冊(cè)[詳細(xì)]

  2016-10-19 17:24

  期刊論文

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• 細(xì)菌內(nèi)毒素恒溫儀樣本

  細(xì)菌內(nèi)毒素恒溫儀WN10,內(nèi)毒素檢測(cè)儀WN10資料[詳細(xì)]

  2018-08-20 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 內(nèi)毒素檢測(cè)恒溫儀

  《ZG藥典》2002年版細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法要求：反應(yīng)試管應(yīng)“垂直放入37±1℃適宜恒溫器中，保溫60±2分鐘”。根據(jù)這一要求，公司研制開(kāi)發(fā)了一種專用于凝膠法細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的實(shí)驗(yàn)設(shè)備N10型試管恒溫儀。與傳統(tǒng)使用的恒溫水浴箱比較，N10型試管恒溫儀有如下特點(diǎn)：產(chǎn)品特點(diǎn)1.即時(shí)溫度顯示、時(shí)間遞減顯示2.自動(dòng)故障檢測(cè)及報(bào)警功能3.蜂鳴器報(bào)警提示功能4.溫度偏差校準(zhǔn)功能5.便捷的模塊更換,便于清潔與消毒6.內(nèi)置超溫保護(hù)裝置7.具有中斷暫停功能8.液晶顯示,薄膜開(kāi)關(guān)[詳細(xì)]

  2018-09-10 11:11

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法

  細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法[詳細(xì)]

  2012-03-29 00:00

  其它

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• 300 30001 - 細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)白皮書(shū)

  300 30001 - 細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)白皮書(shū)[詳細(xì)]

  2024-09-15 03:26

  應(yīng)用文章

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• Eclipse細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)儀-產(chǎn)品樣本

  Eclipse細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)儀-產(chǎn)品樣本[詳細(xì)]

  2024-09-19 07:21

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• SG-40試管恒溫儀產(chǎn)品樣冊(cè)

  SG-40試管恒溫儀產(chǎn)品樣冊(cè)[詳細(xì)]

  2016-10-19 17:33

  實(shí)驗(yàn)操作

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• 300 40080 CS - Eclipse細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)克服抑制/增強(qiáng)干擾的操作程序

  Sievers Eclipse 細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)儀（以下稱 Eclipse）采用動(dòng)態(tài)顯色法，用 405 nm 波長(zhǎng)（即動(dòng)態(tài)顯色法的典型波長(zhǎng)）來(lái)測(cè)量和分析內(nèi)毒素的濃度。[詳細(xì)]

  2025-08-05 21:01

  標(biāo)準(zhǔn)

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• 內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒說(shuō)明

  顯色基質(zhì)鱟試劑盒使用說(shuō)明書(shū)（終點(diǎn)顯色法，含偶氮化試劑）【用途】顯色基質(zhì)鱟試劑（ChromogenicEnd-pointTachypleusAmebocyteLysate,CETAL）用于體外細(xì)菌內(nèi)毒素的定量檢測(cè)，禁止以任何途徑進(jìn)入機(jī)體。【原理】鱟試劑為鱟科動(dòng)物東方鱟的血液變形細(xì)胞溶解物的冷凍干燥品,鱟試劑中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在適宜的條件下（溫度，pH值及無(wú)干擾物質(zhì)），細(xì)菌內(nèi)毒素激活C因子，引起一系列酶促反應(yīng)，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的顯色基質(zhì)，使其分解為多肽和黃色的對(duì)硝基苯胺（pNA，λmax=405nm）。在一定時(shí)間內(nèi)，pNA的生成量與細(xì)菌內(nèi)毒素濃度成正相關(guān)，據(jù)此，可以定量供試品的內(nèi)毒素濃度。同時(shí)，對(duì)硝基苯胺（pNA）也可用偶氮化試劑染成玫瑰紅色（λmax=545nm），避免了供試品本身的顏色對(duì)405nm處吸收峰的干擾?！緳z測(cè)限】按反應(yīng)時(shí)間不同可檢測(cè)0.1EU/ml-1EU/ml和0.01EU/ml-0.1EU/ml兩個(gè)區(qū)間（反應(yīng)時(shí)間T1和T2見(jiàn)出廠檢驗(yàn)報(bào)告）。【試劑盒組成】細(xì)菌內(nèi)毒素工作品，2支鱟試劑，1.7ml/支，2支顯色基質(zhì)，1.7ml/支，2支偶氮化試劑1，10ml/支，2支偶氮化試劑2，10ml/支，2支偶氮化試劑3，10ml/支，2支HCl（反應(yīng)終止劑），50ml/瓶，1瓶細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水，50ml/瓶，2瓶【貯存】陰涼處,**2-8℃,避光貯存?！居梅ā?.材料和設(shè)備1.1試劑鱟試劑、細(xì)菌內(nèi)毒素工作品、顯色基質(zhì)、偶氮化試劑1、偶氮化試劑2、偶氮化試劑3、HCl（反應(yīng)終止劑）、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水。1.2器材旋渦混合儀、移液器、多道移液器、封口膜、試管架。恒溫水浴箱（37±1℃）、分光光度計(jì)。注意：接觸試劑及供試品的所有器皿必須是無(wú)熱原的（我公司提供無(wú)熱原耗材）。玻璃器皿可經(jīng)250℃干烤至少60分鐘去除熱原。2.供試品的貯存與預(yù)處理備注：若供試品為血液類，請(qǐng)參照配套血液相關(guān)處理試劑使用說(shuō)明書(shū)。2.1供試品的pH值應(yīng)在6-8之間，若超出此范圍，需用無(wú)熱原緩沖液、0.1N氫氧化鈉或0.1N鹽酸調(diào)節(jié)。2.2若供試品中可能存在鱟實(shí)驗(yàn)的干擾物質(zhì)，處理參見(jiàn)【供試品的干擾試驗(yàn)】。2.3若供試品中可能含有β－葡聚糖（β－葡聚糖會(huì)產(chǎn)生G因子旁路反應(yīng)，干擾內(nèi)毒素檢測(cè)），需選用特異性鱟試劑（我公司提供）。2.4若供試品為一些KJ素如頭孢類KJ素和磺胺制劑會(huì)對(duì)偶氮染色劑產(chǎn)生偶聯(lián)反應(yīng)而干擾偶氮化顯色，需要選用不含偶氮化試劑的試劑盒（我公司提供）。2.5若供試品的本底吸光度值大于0.5,必須對(duì)供試品進(jìn)行稀釋后再檢測(cè)。2.6若供試品顏色較深（例如溶血），或在酸性條件下顏色加深（例如一些組織培養(yǎng)介質(zhì)）,必須設(shè)置供試品空白管以扣除供試品自身的顏色本底。供試品空白管不加入鱟試劑，以等體積鱟試劑的溶劑（該處為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水）代替。其余操作同供試品管。3.實(shí)驗(yàn)操作3.1細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線所采用的內(nèi)毒素濃度可以為0.01,0.025,0.05,0.1EU/ml或0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml。稀釋方法如下（以0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml為例）：取細(xì)菌內(nèi)毒素工作品1支，按細(xì)菌內(nèi)毒素工作品使用說(shuō)明書(shū)稀釋為10EU/ml的內(nèi)毒素溶液，再稀釋為1.0EU/ml的內(nèi)毒素溶液，以1.0EU/ml的內(nèi)毒素溶液為母液按下表稀釋成0.1,0.25,0.5,1.0EU/ml的濃度梯度。配制好的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)用完。表1內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制內(nèi)毒素濃度（EU/ml）10.50.250.1加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（ml）00.50.750.9加1EU/ml內(nèi)毒素溶液（ml）10.50.250.1鱟試劑：按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于鱟試劑中，輕輕振搖使鱟試劑完全溶解,注意不要用旋渦混勻儀激烈振搖。溶解的鱟試劑應(yīng)在10分鐘內(nèi)用完。顯色基質(zhì)：按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于顯色基質(zhì)中，輕輕振搖使顯色基質(zhì)完全溶解。顯色基質(zhì)溶液可在無(wú)污染的條件下于4C貯存8小時(shí)以內(nèi)。偶氮化試劑1：按標(biāo)示量加反應(yīng)終止劑鹽酸于偶氮化試劑1中，偶氮化試劑2：按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于偶氮化試劑2中，偶氮化試劑3：按標(biāo)示量加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水于偶氮化試劑3中，偶氮化試劑溶液可于4C貯存1周。3.4實(shí)驗(yàn)操作取無(wú)熱原試管，加入100ml細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水、內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，或供試品。再加入100ml鱟試劑溶液，混勻，37C溫育T1分鐘。溫育結(jié)束，加入100ml顯色基質(zhì)溶液，混勻，37C溫育T2分鐘。溫育結(jié)束，加入500ml偶氮化試劑1溶液，混勻，加入500ml偶氮化試劑2溶液，混勻加入500ml偶氮化試劑3溶液，混勻，靜置5分鐘，于545nm波長(zhǎng)處讀取吸光度值。（見(jiàn)表２）表2實(shí)驗(yàn)操作陰性對(duì)照內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)供試品加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（ml）100加內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液（ml）100加供試品（ml）100加鱟試劑（ml）100100100混勻，37C溫育T1分鐘加顯色基質(zhì)溶液（ml）100100100混勻，37C溫育T2分鐘加偶氮化試劑1溶液（ml）5005005004.數(shù)據(jù)處理建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：Y=bX+a，其中Y為545nm處吸光度值，X為內(nèi)毒素的濃度，b為直線斜率，a為Y軸截距。當(dāng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)同時(shí)滿足如下三個(gè)條件時(shí)實(shí)驗(yàn)才有效：1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)r≥0.980，2.標(biāo)準(zhǔn)曲線Zdi點(diǎn)的Y值大于陰性對(duì)照的Y值，3.供試品平行管的平均值在標(biāo)準(zhǔn)曲線的區(qū)間內(nèi)?！竟┰嚻返母蓴_試驗(yàn)】供試品的干擾試驗(yàn)詳見(jiàn)《中華人民共和國(guó)藥典》2005版中《細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法》的“光度測(cè)定法干擾試驗(yàn)”。當(dāng)鱟試劑、供試品的來(lái)源、配方、生產(chǎn)工藝改變或試驗(yàn)環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗(yàn)結(jié)果的變化時(shí)，須進(jìn)行干擾試驗(yàn),步驟如下:1選擇標(biāo)準(zhǔn)曲線中點(diǎn)或一個(gè)靠近中點(diǎn)的內(nèi)毒素濃度（設(shè)為λm），作為供試品干擾試驗(yàn)中添加的內(nèi)毒素濃度，配制含λm內(nèi)毒素的供試品陽(yáng)性對(duì)照，測(cè)量出該溶液的內(nèi)毒素濃度,稱為Cs；2測(cè)量出未添加外源內(nèi)毒素的供試品溶液內(nèi)毒素濃度,稱為Ct；3計(jì)算該試驗(yàn)條件下的回收率R＝（CsCt）/λm×1**%4當(dāng)R在50%～200%之間，則認(rèn)為在此試驗(yàn)條件下供試品溶液不存在干擾作用。5當(dāng)R在50%～200%之外，需對(duì)供試品進(jìn)行系列稀釋（稀釋倍數(shù)不得超過(guò)Zda有效稀釋倍數(shù)MVD）或進(jìn)行其它處理消除干擾,每一稀釋溶液都重復(fù)步驟1-3,直到內(nèi)毒素的回收率R在50%～200%之間。選擇回收率RZ接近1**%的稀釋倍數(shù)進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)。[詳細(xì)]

  2018-09-18 10:00

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  QC微生物實(shí)驗(yàn)室需要更簡(jiǎn)便、更快速的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)(BET，bacterial endotoxin testing)，同時(shí)完全保持合規(guī)性和可靠性。[詳細(xì)]

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  2016-10-19 18:00

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• 兔內(nèi)毒素ELISA檢測(cè)試劑盒

  兔內(nèi)毒素ELISA檢測(cè)試劑盒本試劑僅供研究使用標(biāo)本：血清或血漿試驗(yàn)原理：Endotoxins試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知Endotoxins濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將Endotoxins和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Endotoxins的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標(biāo)板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品：80pg/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀稀空白對(duì)照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素標(biāo)記的抗Endotoxins抗體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型親和鏈酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型標(biāo)本稀釋液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自備材料1．蒸餾水。2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3．振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。2．實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項(xiàng)1．試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。2．實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。3．不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6．洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。7．底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。8．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。9．按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液5、保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。兔內(nèi)毒素ELISA檢測(cè)試劑盒試劑的準(zhǔn)備1．標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：80pg/ml（6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。40pg/ml（5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20pg/ml（4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10pg/ml（3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液5.0pg/ml（2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.5pg/ml（1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0pg/ml（空白對(duì)照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。操作步驟1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2．根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。3．加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。8．取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。9．在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。建議使用的實(shí)驗(yàn)方案標(biāo)準(zhǔn)品濃度（pg/ml）A8080樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品局限6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到極ng確的結(jié)果。試劑盒性能1.靈敏度：Z小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。兔內(nèi)毒素ELISA檢測(cè)試劑盒樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。結(jié)果判斷與分析1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的Endotoxins標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的Endotoxins含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。3、檢測(cè)值范圍：0-80pg/ml4、敏感度：0.1pg/ml[詳細(xì)]

  2018-11-04 10:00

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  2023-08-21 16:05

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