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造成血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒失誤的原因

本文由 研域(上海)化學(xué)試劑有限公司 整理匯編

2018-09-19 10:00 304閱讀次數(shù)

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下面分析血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法。1加樣可能原因:1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣;2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí));3)加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。解決辦法:1)標(biāo)本為血清:**將血液先自然存放1-2小時(shí)后,再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時(shí)間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。2)加樣后及時(shí)放入孵箱。3)加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。4)如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,**選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。5)標(biāo)本較多時(shí),請分批操作。2孵育可能原因:1)孵育時(shí)未貼封片或加蓋,使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗徹底;2)孵育時(shí)間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗徹底。解決辦法:1)貼封片或加蓋;2)按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。3洗板可能原因:1)采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。2)采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足,導(dǎo)致洗板不徹底;洗板針堵塞,抽吸不完全;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。3)反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。解決辦法:1)保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后**在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;2)合理安排,或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。4顯色可能原因:1)顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑;2)加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法:1)顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用;2)加樣時(shí)保持顯色劑不外流;3)A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。5終止可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。血管生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒收集樣品、處理及保存方法:1.血清:需使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,在操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心機(jī)離心30分鐘取上清。3.細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心機(jī)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心機(jī)離心10分鐘取上清。5.保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

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