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  小鼠骨涎蛋白（BSP）ELISA試劑盒（用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和尿液、骨組織裂解物生物體液內(nèi)）原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗小鼠BSP單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的BSP與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗小鼠BSP，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍色，Z后加終止液，在450nm處測OD值，BSP濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中BSP濃度。試劑盒組成（2-8℃保存）酶標板（CoatedWells）96孔酶標抗體工作液（EnzymeConjugate）12ml10×標本稀釋液（SampleBuffer）12ml20×濃縮洗滌液（WashBuffer）50ml標準品（Standards）：1000ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗體工作液（BiotinylatedAntibody）12ml終止液（StopSolution）12ml準備試劑與收集血樣1.收集標本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復(fù)凍融。血清測定前用標本稀釋液作1：5至10倍稀釋。2.標準品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻，配成1000ng/ml的溶液。設(shè)標準管8管，**管加標本稀釋液900ul，第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在**管中加入1000ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。4.洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）檢測程序1.加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板：同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。2.以標準品100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56、0ng/ml為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)BSP含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度：Z小的BSP檢測濃度小于1ng/ml。2.特異性：可同時檢測重組或天然的小鼠BSP。不與小鼠其它細胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10.2％。注意事項1.以上標準孔及待測樣品均建議做復(fù)孔，每次測定應(yīng)同時做標準曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！[詳細]

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