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三聚氰胺酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用與分析
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2018-10-03 10:00 446閱讀次數(shù)
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三聚氰胺酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用與分析1使用目的:本試劑盒用于飼料、肉類組織(如雞、牛肉和豬肉),雞蛋、牛奶中三聚氰胺殘留的定量檢測(cè)。2實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔板包被有三聚氰胺偶聯(lián)抗原,加入三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離三聚氰胺與微孔條上預(yù)包被的三聚氰胺偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)抗三聚氰胺抗體酶標(biāo)記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè),吸光值與樣品中三聚氰胺含量成反比,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中三聚氰胺的含量。3試劑盒組成3.1預(yù)包被的三聚氰胺偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1塊(12孔×8條)。3.2三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。3.3抗三聚氰胺抗體酶結(jié)合物:1瓶(6ml)。3.4顯色液A:1瓶(6ml)。3.5顯色液B:1瓶(6ml)。3.6終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。3.7樣本稀釋液:1瓶(10×,6ml),用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。3.9說(shuō)明書一份。4需要而未提供的材料4.1設(shè)備4.1.1波長(zhǎng)450nm酶標(biāo)儀。4.1.2粉碎機(jī)。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相當(dāng)?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2甲醇。5貯存5.1試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍5.2未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存6注意事項(xiàng)6.1使用試劑盒前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。26.2不要使用過(guò)期試劑盒。6.3試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時(shí)。6.4標(biāo)準(zhǔn)品中含有三聚氰胺,使用時(shí)應(yīng)特別注意,操作時(shí)應(yīng)帶手套。6.5終止液中含有硫酸,使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用,否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。6.7不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用;不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。6.8稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果6.9混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。7工作液準(zhǔn)備7.1三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb7.2濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用7.3樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用7.3顯色劑:已備用,避免光線直照7.4反應(yīng)終止液:已備用8樣品處理程序(樣品在提取過(guò)程中,要嚴(yán)格按說(shuō)明書操作,提取過(guò)程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,否則會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)8.1取10g粉碎的樣品,加20ml70%甲醇溶液8.2QL振蕩3分鐘8.3用WhatmanNo1濾紙過(guò)濾8.4取25μl處理后的樣品,加入25μl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2)9酶免分析步驟9.1實(shí)驗(yàn)須知9.1.1實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),時(shí)間約2小時(shí)?;販刂潦覝兀?5±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存。注:一定保證回溫充分,否則影響檢測(cè)的極ng確度和準(zhǔn)確度。9.1.2使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存9.1.3請(qǐng)不要改變分析程序9.1.4請(qǐng)使用極ng確的微量移液器9.1.5操作一旦開(kāi)始,請(qǐng)不要中斷任何程序9.1.6ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作9.1.7為避免交叉污染,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣9.1.8加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面9.2分析步驟9.2.1預(yù)先進(jìn)行編號(hào),標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,推薦進(jìn)行雙孔檢測(cè)9.2.2取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)9.2.4在B0孔中加入50μl0.0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.5在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.6在各樣品孔中加入50μl樣品溶液9.2.7在所有孔中加入50μl的抗三聚氰胺抗體酶結(jié)合物9.2.8輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。9.337℃溫浴30min(溫浴過(guò)程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)9.3.1甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,Z后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液3體。9.4反應(yīng)9.4.1洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50μl顯色液A,再加50μl顯色液B;輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之徹底混勻9.4.237℃溫浴10min9.4.3每孔中加入50μl終止液,混勻9.4.4在450nm下檢測(cè)吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。10結(jié)果計(jì)算10.1定量分析10.1.1所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以1**%,即百分吸光度值。B標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B00μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值10.1.2以三聚氰胺濃度的對(duì)數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo),即為三聚氰胺濃度的對(duì)數(shù)值,求得反對(duì)數(shù)即為測(cè)定液中三聚氰胺濃度C(ppb)10.1.3由于樣品經(jīng)過(guò)了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。10.2半定量測(cè)定10.1.1目測(cè)半定量測(cè)定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。10.1.2儀器半定量測(cè)定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。11特異性物質(zhì)交叉反應(yīng)三聚氰胺1**%12試劑盒參數(shù)本試劑盒檢測(cè)下限為0.05ppbB0吸光度**值應(yīng)大于1.0試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。用本說(shuō)明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。13標(biāo)準(zhǔn)曲線模式(僅供參考)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.1ppb~8.1ppb。414分析限制本試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。__
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三聚氰胺酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用與分析
- 三聚氰胺酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用與分析1使用目的:本試劑盒用于飼料、肉類組織(如雞、牛肉和豬肉),雞蛋、牛奶中三聚氰胺殘留的定量檢測(cè)。2實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔板包被有三聚氰胺偶聯(lián)抗原,加入三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離三聚氰胺與微孔條上預(yù)包被的三聚氰胺偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)抗三聚氰胺抗體酶標(biāo)記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè),吸光值與樣品中三聚氰胺含量成反比,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中三聚氰胺的含量。3試劑盒組成3.1預(yù)包被的三聚氰胺偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1塊(12孔×8條)。3.2三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。3.3抗三聚氰胺抗體酶結(jié)合物:1瓶(6ml)。3.4顯色液A:1瓶(6ml)。3.5顯色液B:1瓶(6ml)。3.6終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。3.7樣本稀釋液:1瓶(10×,6ml),用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。3.9說(shuō)明書一份。4需要而未提供的材料4.1設(shè)備4.1.1波長(zhǎng)450nm酶標(biāo)儀。4.1.2粉碎機(jī)。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相當(dāng)?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2甲醇。5貯存5.1試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍5.2未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存6注意事項(xiàng)6.1使用試劑盒前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。26.2不要使用過(guò)期試劑盒。6.3試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時(shí)。6.4標(biāo)準(zhǔn)品中含有三聚氰胺,使用時(shí)應(yīng)特別注意,操作時(shí)應(yīng)帶手套。6.5終止液中含有硫酸,使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用,否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。6.7不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用;不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。6.8稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果6.9混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。7工作液準(zhǔn)備7.1三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb7.2濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用7.3樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用7.3顯色劑:已備用,避免光線直照7.4反應(yīng)終止液:已備用8樣品處理程序(樣品在提取過(guò)程中,要嚴(yán)格按說(shuō)明書操作,提取過(guò)程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,否則會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)8.1取10g粉碎的樣品,加20ml70%甲醇溶液8.2QL振蕩3分鐘8.3用WhatmanNo1濾紙過(guò)濾8.4取25μl處理后的樣品,加入25μl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2)9酶免分析步驟9.1實(shí)驗(yàn)須知9.1.1實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),時(shí)間約2小時(shí)?;販刂潦覝兀?5±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存。注:一定保證回溫充分,否則影響檢測(cè)的極ng確度和準(zhǔn)確度。9.1.2使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存9.1.3請(qǐng)不要改變分析程序9.1.4請(qǐng)使用極ng確的微量移液器9.1.5操作一旦開(kāi)始,請(qǐng)不要中斷任何程序9.1.6ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作9.1.7為避免交叉污染,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣9.1.8加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面9.2分析步驟9.2.1預(yù)先進(jìn)行編號(hào),標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,推薦進(jìn)行雙孔檢測(cè)9.2.2取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)9.2.4在B0孔中加入50μl0.0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.5在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.6在各樣品孔中加入50μl樣品溶液9.2.7在所有孔中加入50μl的抗三聚氰胺抗體酶結(jié)合物9.2.8輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。9.337℃溫浴30min(溫浴過(guò)程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)9.3.1甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,Z后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液3體。9.4反應(yīng)9.4.1洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50μl顯色液A,再加50μl顯色液B;輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之徹底混勻9.4.237℃溫浴10min9.4.3每孔中加入50μl終止液,混勻9.4.4在450nm下檢測(cè)吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。10結(jié)果計(jì)算10.1定量分析10.1.1所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以1**%,即百分吸光度值。B標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B00μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值10.1.2以三聚氰胺濃度的對(duì)數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo),即為三聚氰胺濃度的對(duì)數(shù)值,求得反對(duì)數(shù)即為測(cè)定液中三聚氰胺濃度C(ppb)10.1.3由于樣品經(jīng)過(guò)了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。10.2半定量測(cè)定10.1.1目測(cè)半定量測(cè)定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。10.1.2儀器半定量測(cè)定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。11特異性物質(zhì)交叉反應(yīng)三聚氰胺1**%12試劑盒參數(shù)本試劑盒檢測(cè)下限為0.05ppbB0吸光度**值應(yīng)大于1.0試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。用本說(shuō)明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。13標(biāo)準(zhǔn)曲線模式(僅供參考)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.1ppb~8.1ppb。414分析限制本試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。__[詳細(xì)]
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2018-10-03 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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三聚氰胺酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用與分析
- 1使用目的:本試劑盒用于飼料、肉類組織(如雞、牛肉和豬肉),雞蛋、牛奶中三聚氰胺殘留的定量檢測(cè)。2實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔板包被有三聚氰胺偶聯(lián)抗原,加入三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離三聚氰胺與微孔條上預(yù)包被的三聚氰胺偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)抗三聚氰胺抗體酶標(biāo)記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè),吸光值與樣品中三聚氰胺含量成反比,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中三聚氰胺的含量。3試劑盒組成3.1預(yù)包被的三聚氰胺偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1塊(12孔×8條)。3.2三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。3.3抗三聚氰胺抗體酶結(jié)合物:1瓶(6ml)。3.4顯色液A:1瓶(6ml)。3.5顯色液B:1瓶(6ml)。3.6終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。3.7樣本稀釋液:1瓶(10×,6ml),用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。3.9說(shuō)明書一份。4需要而未提供的材料4.1設(shè)備4.1.1波長(zhǎng)450nm酶標(biāo)儀。4.1.2粉碎機(jī)。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相當(dāng)?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2甲醇。5貯存5.1試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍5.2未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存6注意事項(xiàng)6.1使用試劑盒前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。26.2不要使用過(guò)期試劑盒。6.3試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時(shí)。6.4標(biāo)準(zhǔn)品中含有三聚氰胺,使用時(shí)應(yīng)特別注意,操作時(shí)應(yīng)帶手套。6.5終止液中含有硫酸,使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用,否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。6.7不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用;不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。6.8稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果6.9混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。7工作液準(zhǔn)備7.1三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb7.2濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用7.3樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用7.3顯色劑:已備用,避免光線直照7.4反應(yīng)終止液:已備用8樣品處理程序(樣品在提取過(guò)程中,要嚴(yán)格按說(shuō)明書操作,提取過(guò)程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,否則會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)8.1取10g粉碎的樣品,加20ml70%甲醇溶液8.2QL振蕩3分鐘8.3用WhatmanNo1濾紙過(guò)濾8.4取25μl處理后的樣品,加入25μl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2)9酶免分析步驟9.1實(shí)驗(yàn)須知9.1.1實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),時(shí)間約2小時(shí)?;販刂潦覝兀?5±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存。注:一定保證回溫充分,否則影響檢測(cè)的極ng確度和準(zhǔn)確度。9.1.2使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存9.1.3請(qǐng)不要改變分析程序9.1.4請(qǐng)使用極ng確的微量移液器9.1.5操作一旦開(kāi)始,請(qǐng)不要中斷任何程序9.1.6ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作9.1.7為避免交叉污染,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣9.1.8加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面9.2分析步驟9.2.1預(yù)先進(jìn)行編號(hào),標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,推薦進(jìn)行雙孔檢測(cè)9.2.2取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)9.2.4在B0孔中加入50μl0.0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.5在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.6在各樣品孔中加入50μl樣品溶液9.2.7在所有孔中加入50μl的抗三聚氰胺抗體酶結(jié)合物9.2.8輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。9.337℃溫浴30min(溫浴過(guò)程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)9.3.1甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,Z后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液3體。9.4反應(yīng)9.4.1洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50μl顯色液A,再加50μl顯色液B;輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之徹底混勻9.4.237℃溫浴10min9.4.3每孔中加入50μl終止液,混勻9.4.4在450nm下檢測(cè)吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。10結(jié)果計(jì)算10.1定量分析10.1.1所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以1**%,即百分吸光度值。B標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B00μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值10.1.2以三聚氰胺濃度的對(duì)數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo),即為三聚氰胺濃度的對(duì)數(shù)值,求得反對(duì)數(shù)即為測(cè)定液中三聚氰胺濃度C(ppb)10.1.3由于樣品經(jīng)過(guò)了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。10.2半定量測(cè)定10.1.1目測(cè)半定量測(cè)定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。10.1.2儀器半定量測(cè)定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。11特異性物質(zhì)交叉反應(yīng)三聚氰胺1**%12試劑盒參數(shù)本試劑盒檢測(cè)下限為0.05ppbB0吸光度**值應(yīng)大于1.0試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。用本說(shuō)明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。13標(biāo)準(zhǔn)曲線模式(僅供參考)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.1ppb~8.1ppb。414分析限制本試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。__[詳細(xì)]
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2018-10-03 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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酶聯(lián)免疫分析Elisa試劑盒
- 大鼠磷酸二酯酶(PDE)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中磷酸二酯酶(PDE)的活性。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠磷酸二酯酶(PDE)水平。用純化的大鼠磷酸二酯酶(PDE)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入磷酸二酯酶(PDE),再與HRP標(biāo)記的磷酸二酯酶(PDE)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的磷酸二酯酶(PDE)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠磷酸二酯酶(PDE)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說(shuō)明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:540U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4……本公司為國(guó)內(nèi)權(quán)威試劑盒供應(yīng)商之一,質(zhì)量保證。專業(yè)供應(yīng)Elisa試劑盒,品質(zhì)保證,價(jià)格優(yōu)惠,可免費(fèi)提供代測(cè)服務(wù),歡迎咨詢:13671597285,021-60723333公司Elisa試劑盒主頁(yè):http://www.shgrsw.comCAS號(hào):613-91-2,苯乙酮肟?CAS號(hào):1405-37-4,硫酸卷曲霉素,Potency700-1050μG/mgCAS號(hào):128110-37-2,(1R,2S)-(-)-2-氨基-1-氫氯化環(huán)戊烷羧基酸CAS號(hào):6825-20-3,3,6-二溴咔唑,98%CAS號(hào):111-45-5,乙二醇單烯丙基醚大鼠信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7(Smad7)ELISA試劑盒人基質(zhì)裂解蛋白(MAT)ELISA試劑盒HumanCortisolELISAKit鴨主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA試劑盒人激肽釋放酶10(KLK10)ELISA試劑盒小鼠β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA試劑盒CAS號(hào):68515-48-0,鄰苯二甲酸二異壬酯,分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%CAS號(hào):142-73-4,亞氨基二乙酸,98%人可提取核抗原(ENA)ELISA試劑盒CAS號(hào):60719-84-8,氨力農(nóng),98%CAS號(hào):66778-17-4,七葉苷(倍半水),98%雞巨噬細(xì)胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)ELISA試劑盒CAS號(hào):35303-76-5,4-(2-氨乙基)苯磺酰胺,99%Humancytovillin/ezrinELISAKitCAS號(hào):136-95-8,2-氨基苯并噻唑,97%CAS號(hào):1873-92-3,丙烯基甲基二氯硅烷?CAS號(hào):16919-58-7,氯鉑酸銨,AR人纖維介素蛋白(fgl2)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2018-10-23 10:31
產(chǎn)品樣冊(cè)
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擬除蟲(chóng)菊酯酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書
- 1使用目的:本試劑盒用于蔬菜、水果、相應(yīng)食物、水及中毒殘留物中擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)殘留的定量檢測(cè)。2實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔板包被有擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)偶聯(lián)抗原,加入擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)與微孔條上預(yù)包被的擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)抗擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)抗體酶標(biāo)記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè),吸光值與樣品中擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)含量成反比,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)的含量。3試劑盒組成3.1預(yù)包被的擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1塊(12孔×8條)。3.2擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是:0ng/ml,0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml。3.3抗擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)抗體酶結(jié)合物:1瓶(6ml)。3.4顯色液A:1瓶(6ml)。3.5顯色液B:1瓶(6ml)。3.6終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。3.7樣本稀釋液:1瓶(10×,6ml),用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。3.9說(shuō)明書一份。4需要而未提供的材料4.1設(shè)備4.1.1波長(zhǎng)450nm酶標(biāo)儀。4.1.2粉碎機(jī)。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相當(dāng)?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2甲醇。5貯存5.1試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍5.2未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存6注意事項(xiàng)6.1使用試劑盒前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。6.2不要使用過(guò)期試劑盒。6.3試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時(shí)。6.4標(biāo)準(zhǔn)品中含有擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids),使用時(shí)應(yīng)特別注意,操作時(shí)應(yīng)帶手套。6.5終止液中含有硫酸,使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用,否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。6.7不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用;不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。6.8稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果6.9混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。7工作液準(zhǔn)備7.1擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ng/ml,0.025ng/ml,0.1ng/ml,0.25ng/ml,1ng/ml,4ng/ml7.2濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用7.3樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用7.3顯色劑:已備用,避免光線直照7.4反應(yīng)終止液:已備用8樣品處理程序(樣品在提取過(guò)程中,要嚴(yán)格按說(shuō)明書操作,提取過(guò)程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,否則會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)8.1取10g粉碎的樣品,加20ml70%甲醇溶液8.2QL振蕩3分鐘8.3用WhatmanNo1濾紙過(guò)濾8.4取25l處理后的樣品,加入25l樣本稀釋液于反應(yīng)孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2)9酶免分析步驟9.1實(shí)驗(yàn)須知9.1.1實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),時(shí)間約2小時(shí)?;販刂潦覝兀?5±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注:一定保證回溫充分,否則影響檢測(cè)的極ng確度和準(zhǔn)確度。9.1.2使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存9.1.3請(qǐng)不要改變分析程序9.1.4請(qǐng)使用極ng確的微量移液器9.1.5操作一旦開(kāi)始,請(qǐng)不要中斷任何程序9.1.6ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作9.1.7為避免交叉污染,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣9.1.8加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面9.2分析步驟9.2.1預(yù)先進(jìn)行編號(hào),標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,推薦進(jìn)行雙孔檢測(cè)9.2.2取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)9.2.4在B0孔中加入50l0.0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.5在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50l的標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.6在各樣品孔中加入50l樣品溶液9.2.7在所有孔中加入50l的抗擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)抗體酶結(jié)合物9.2.8輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。9.337℃溫浴30min(溫浴過(guò)程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)9.3.1甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,Z后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。9.4反應(yīng)9.4.1洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50l顯色液A,再加50l顯色液B;輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之徹底混勻9.4.237℃溫浴10min9.4.3每孔中加入50l終止液,混勻9.4.4在450nm下檢測(cè)吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。10結(jié)果計(jì)算10.1定量分析10.1.1所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以1**%,即百分吸光度值。B標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B00g/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值10.1.2以擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)濃度的對(duì)數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo),即為擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)濃度的對(duì)數(shù)值,求得反對(duì)數(shù)即為測(cè)定液中擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)濃度C(ng/ml)10.1.3由于樣品經(jīng)過(guò)了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。10.2半定量測(cè)定10.1.1目測(cè)半定量測(cè)定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。10.1.2儀器半定量測(cè)定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。11特異性物質(zhì)交叉反應(yīng)擬除蟲(chóng)菊酯(Pyrethroids)1**%12試劑盒參數(shù)本試劑盒檢測(cè)下限為0.005ng/mlB0吸光度**值應(yīng)大于1.0試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。用本說(shuō)明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。13標(biāo)準(zhǔn)曲線模式(僅供參考)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0ng/ml~4ng/ml。414分析限制本試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。[詳細(xì)]
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2024-09-28 06:59
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒
- 人酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒試劑盒使用說(shuō)明書本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T1μg/L-40μg/L使用目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中(DKK1)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人(DKK1)水平。用純化的人(DKK1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入(DKK1),再與HRP標(biāo)記的(DKK1)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的DKK1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人(DKK1)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(80μg/L)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說(shuō)明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。40μg/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20μg/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10μg/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液5μg/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.5μg/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié):計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說(shuō)明書有異,以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-09-19 10:01
產(chǎn)品樣冊(cè)
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莫能菌素酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒
- 莫能菌素酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒試劑盒使用說(shuō)明書本試劑盒僅供研究使用。1使用目的:本試劑盒用于飼料、肉類組織(如雞、牛肉和豬肉),雞蛋、牛奶和尿樣中莫能菌素殘留的定量檢測(cè)。2實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔板包被有莫能菌素偶聯(lián)抗原,加入莫能菌素標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離莫能菌素與微孔條上預(yù)包被的莫能菌素偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)抗莫能菌素抗體酶標(biāo)記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè),吸光值與樣品中莫能菌素含量成反比,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中莫能菌素的含量。3試劑盒組成3.1預(yù)包被的莫能菌素偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1塊(12孔×8條)。3.2莫能菌素標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。3.3抗莫能菌素抗體酶結(jié)合物:1瓶(6ml)。3.4顯色液A:1瓶(6ml)。3.5顯色液B:1瓶(6ml)。3.6終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。3.7樣本稀釋液:1瓶(10×,6ml),用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。3.9說(shuō)明書一份。[詳細(xì)]
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2018-09-19 10:01
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人白介素1酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書
- 人白介素1酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書[詳細(xì)]
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2015-03-16 00:00
安裝說(shuō)明
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大鼠CD28酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書
- 大鼠CD28酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書[詳細(xì)]
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2015-05-29 00:00
報(bào)價(jià)單
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磺胺嘧啶(SD)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書
- 1使用目的:本試劑盒用于雞肉/肝,豬肉/肝,蜂蜜,雞蛋,血清,尿液,牛奶中磺胺嘧啶(SD)殘留的定量檢測(cè)。2實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔板包被有磺胺嘧啶(SD)偶聯(lián)抗原,加入磺胺嘧啶(SD)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離磺胺嘧啶(SD)與微孔條上預(yù)包被的磺胺嘧啶(SD)偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)抗磺胺嘧啶(SD)抗體酶標(biāo)記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè),吸光值與樣品中磺胺嘧啶(SD)含量成反比,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中磺胺嘧啶(SD)的含量。3試劑盒組成3.1預(yù)包被的磺胺嘧啶(SD)偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1塊(12孔×4條)。3.2磺胺嘧啶(SD)標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。3.3抗磺胺嘧啶(SD)抗體酶結(jié)合物:1瓶(3ml)。3.4顯色液A:1瓶(3ml)。3.5顯色液B:1瓶(3ml)。3.6終止液:1瓶(3ml),2M硫酸。3.7樣本稀釋液:1瓶(10×,3ml),用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。3.9說(shuō)明書一份。4需要而未提供的材料4.1設(shè)備4.1.1波長(zhǎng)450nm酶標(biāo)儀。4.1.2粉碎機(jī)。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相當(dāng)?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2甲醇。5貯存5.1試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍5.2未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存6注意事項(xiàng)6.1使用試劑盒前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。6.2不要使用過(guò)期試劑盒。6.3試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時(shí)。6.4標(biāo)準(zhǔn)品中含有磺胺嘧啶(SD),使用時(shí)應(yīng)特別注意,操作時(shí)應(yīng)帶手套。6.5終止液中含有硫酸,使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用,否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。6.7不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用;不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。6.8稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果6.9混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。7工作液準(zhǔn)備7.1磺胺二甲嘧啶(SM2)標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb7.2濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用7.3樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用7.3顯色劑:已備用,避免光線直照7.4反應(yīng)終止液:已備用8樣品處理程序(樣品在提取過(guò)程中,要嚴(yán)格按說(shuō)明書操作,提取過(guò)程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,否則會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)8.1取10g粉碎的樣品,加20ml70%甲醇溶液8.2QL振蕩3分鐘8.3用WhatmanNo1濾紙過(guò)濾8.4取25μl處理后的樣品,加入25μl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2)9酶免分析步驟9.1實(shí)驗(yàn)須知9.1.1實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),時(shí)間約2小時(shí)?;販刂潦覝兀?5±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注:一定保證回溫充分,否則影響檢測(cè)的極ng確度和準(zhǔn)確度。9.1.2使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存9.1.3請(qǐng)不要改變分析程序9.1.4請(qǐng)使用極ng確的微量移液器9.1.5操作一旦開(kāi)始,請(qǐng)不要中斷任何程序9.1.6ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作9.1.7為避免交叉污染,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣9.1.8加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面9.2分析步驟9.2.1預(yù)先進(jìn)行編號(hào),標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,推薦進(jìn)行雙孔檢測(cè)9.2.2取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)9.2.4在B0孔中加入50μl0.0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.5在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.6在各樣品孔中加入50μl樣品溶液9.2.7在所有孔中加入50μl的磺胺嘧啶(SD)抗體酶結(jié)合物9.2.8輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。9.337℃溫浴30min(溫浴過(guò)程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)9.3.1甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,Z后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。9.4反應(yīng)9.4.1洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50μl顯色液A,再加50μl顯色液B;輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之徹底混勻9.4.237℃溫浴10min9.4.3每孔中加入50μl終止液,混勻9.4.4在450nm下檢測(cè)吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。10結(jié)果計(jì)算10.1定量分析10.1.1所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以1**%,即百分吸光度值。B標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B00μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值10.1.2以磺胺嘧啶(SD)濃度的對(duì)數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo),即為磺胺嘧啶(SD)濃度的對(duì)數(shù)值,求得反對(duì)數(shù)即為測(cè)定液中磺胺嘧啶(SD)濃度C(ppb)10.1.3由于樣品經(jīng)過(guò)了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。10.2半定量測(cè)定10.1.1目測(cè)半定量測(cè)定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。10.1.2儀器半定量測(cè)定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。11特異性物質(zhì)交叉反應(yīng)磺胺嘧啶(SD)1**%磺胺甲基嘧啶70%磺胺噻唑(ST)<0.15%磺胺惡唑<1.0%磺胺吡啶<0.2%12試劑盒參數(shù)本試劑盒檢測(cè)下限為0.05ppbB0吸光度**值應(yīng)大于1.0試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。用本說(shuō)明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。13試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.1ppb~8.1ppb。14分析限制本試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。[詳細(xì)]
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2018-10-03 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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2014-04-15 00:00
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2014-03-07 00:00
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2015-03-23 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
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牛γ干擾素(IFN-γ)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書
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2015-03-23 00:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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牛γ干擾素(IFN-γ)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書
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2015-03-23 00:00
專利
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牛γ干擾素(IFN-γ)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書
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2015-03-23 00:00
應(yīng)用文章
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2015-03-23 00:00
報(bào)價(jià)單
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牛γ干擾素(IFN-γ)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書
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2015-03-23 00:00
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2014-11-26 00:00
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2015-05-06 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
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小鼠γ干擾素(IFN-γ)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書
- 小鼠γ干擾素(IFN-γ)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清,組織及相關(guān)液體樣本中γ干擾素(IFN-γ)含量。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠γ干擾素(IFN-γ)水平。用純化的小鼠γ干擾素(IFN-γ)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入γ干擾素(IFN-γ),再與HRP標(biāo)記的羊抗鼠抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的γ干擾素(IFN-γ)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠γ干擾素(IFN-γ)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說(shuō)明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:1800ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存小鼠γ干擾素(IFN-γ)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。小鼠γ干擾素(IFN-γ)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為1200ng/L,800ng/L,400ng/L,200ng/L,100ng/L)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng):1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說(shuō)明書有異,以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。[詳細(xì)]
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2018-09-14 10:01
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