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免疫鐵蛋白電鏡技術(shù)
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2018-10-08 10:00 210閱讀次數(shù)
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上海金穗生物公司是一家專業(yè)經(jīng)營(yíng)生物試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、試劑耗材的公司,生物引擎在廣大用戶的幫助和支持下,經(jīng)過(guò)不懈的努力,已成為國(guó)內(nèi)生命科學(xué)領(lǐng)域產(chǎn)品的主要供應(yīng)商之一,主要經(jīng)營(yíng)ELISA試劑盒、細(xì)胞、血清、抗體、金標(biāo)試劑盒、生物試劑、耗材、培養(yǎng)基、一抗、二抗等產(chǎn)品,產(chǎn)品暢銷(xiāo)國(guó)內(nèi)大部分地區(qū),銷(xiāo)售額逐年穩(wěn)步提高。上海金穗生物公司擁有雄厚的實(shí)力、合理的價(jià)格和優(yōu)良的服務(wù),能夠及時(shí)解決和滿足客戶的各方面的需求,公司的服務(wù)和業(yè)務(wù)網(wǎng)絡(luò)遍及全國(guó),在同行獲得一致好評(píng)。www.shjsbio.com
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免疫鐵蛋白電鏡技術(shù)
- 上海金穗生物公司是一家專業(yè)經(jīng)營(yíng)生物試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、試劑耗材的公司,生物引擎在廣大用戶的幫助和支持下,經(jīng)過(guò)不懈的努力,已成為國(guó)內(nèi)生命科學(xué)領(lǐng)域產(chǎn)品的主要供應(yīng)商之一,主要經(jīng)營(yíng)ELISA試劑盒、細(xì)胞、血清、抗體、金標(biāo)試劑盒、生物試劑、耗材、培養(yǎng)基、一抗、二抗等產(chǎn)品,產(chǎn)品暢銷(xiāo)國(guó)內(nèi)大部分地區(qū),銷(xiāo)售額逐年穩(wěn)步提高。上海金穗生物公司擁有雄厚的實(shí)力、合理的價(jià)格和優(yōu)良的服務(wù),能夠及時(shí)解決和滿足客戶的各方面的需求,公司的服務(wù)和業(yè)務(wù)網(wǎng)絡(luò)遍及全國(guó),在同行獲得一致好評(píng)。www.shjsbio.com[詳細(xì)]
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2018-10-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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免疫電鏡技術(shù)
- 免疫電鏡技術(shù)(immunoelectronmicroscopy,IEM)又稱為免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù),是在免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的,它是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,在超微結(jié)構(gòu)水平上定位、定性及半定量抗原的技術(shù)方法。該方法為極ng確定位各種抗原的存在部位、研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系及其在病理情況下所發(fā)生的變化提供了有效的手段。免疫電鏡技術(shù)主要經(jīng)歷了鐵蛋白標(biāo)記技術(shù)、酶標(biāo)記技術(shù)以及膠體金標(biāo)記技術(shù)三個(gè)主要發(fā)展階段。詳見(jiàn)附件。[詳細(xì)]
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2018-09-20 10:00
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免疫親和柱
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2018-11-05 10:00
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免疫標(biāo)記技術(shù)
- 免疫標(biāo)記技術(shù)[詳細(xì)]
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2024-09-28 07:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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免疫酶組織化學(xué)技術(shù)的常用酶及其底物
- 免疫酶組織化學(xué)技術(shù)的常用酶及其底物(一)辣根過(guò)氧化物酶在免疫酶技術(shù)中,辣根過(guò)氧化物酶(HRP)是Z理想、應(yīng)用Z多的標(biāo)記酶,是從一種稱為辣根的植物根部分離、純化獲得。HRP分子中含有含鐵血紅素基團(tuán)(高鐵血紅素),是HRP的活性基團(tuán),在溶液中呈棕黃色,HRP中的高鐵血紅素與H202形成一種復(fù)合物,然后脫水,氧原子形成。幾種底物可使HRP氧化,Z常用的有二種,即多酚和硝基鹽。HRP的優(yōu)點(diǎn)有以下幾個(gè)方面。(1)體積?。ǚ肿淤|(zhì)量40kDa),不會(huì)遮蓋抗原的結(jié)合部位,且穿透力強(qiáng),易與細(xì)胞內(nèi)抗原結(jié)合。(2)穩(wěn)定且易獲得高純度酶制品。(3)具有較高活性及特異性。(4)不溶性好,終產(chǎn)物不向周邊擴(kuò)散。(5)組織中內(nèi)源性酶較少,YZ方法較多。(6)價(jià)格相對(duì)較便宜。(7)特異性底物是過(guò)氧化氫(H202),可選用不同電子供體(發(fā)色基團(tuán)),使終產(chǎn)物呈不同顏色。例如3,3’二氨基聯(lián)苯胺(DAB)為棕褐色,3氨基9乙基卡巴唑(AEC)為紅色,4氯1苯酚(CN)為藍(lán)色。AEC室溫下較穩(wěn)定,產(chǎn)物不溶于水,但溶于有機(jī)溶劑,所以不能進(jìn)行脫水等處理;又因其需用水溶性封固劑,時(shí)間長(zhǎng)易褪色,限制了其應(yīng)用。DAB是廣泛應(yīng)用的電子供體,產(chǎn)物既不溶于水,又不溶于有機(jī)溶液,可長(zhǎng)期保存。其終產(chǎn)物具有嗜鋨性,經(jīng)鋨酸處理后電子密度增加,適用于電鏡下觀察。但DAB的缺點(diǎn)是具有潛在的致癌性,所以應(yīng)盡量減少吸人和接觸次數(shù),并嚴(yán)格管理廢液。盡管有人反對(duì)應(yīng)用DAB,但目前還未找到一種比它更好的替代品,所以應(yīng)用依然Z為廣泛。HRP與底物H202呈色反應(yīng)原理見(jiàn)圖4l。HRP的特異底物為H202,在分解Hz02過(guò)程中,與H202形成初級(jí)復(fù)合物,無(wú)電子供體時(shí),反應(yīng)不再繼續(xù)進(jìn)行,當(dāng)電子供體存在時(shí),反應(yīng)以一定的速度形成第二種復(fù)合物。HRP催化H202已形成的中間型產(chǎn)物,迅速生成水,酶被還原,電子供體被氧化、聚合,再經(jīng)氧化環(huán)化?Z后形成吲哚胺多聚體,此多聚體進(jìn)一步氧化、環(huán)化,形成苯乙肼聚合體,如供氫體是DAB,產(chǎn)物為棕褐色;如是AEC,產(chǎn)物為紅色。(二)堿性磷酸酶目前商品化的AKP均來(lái)源于牛小腸,稱為牛腸堿性磷酸酶(calfintestinalkalinephosphatase),其分子質(zhì)量為100kDa,故而穿透細(xì)胞組織的能力較弱。某些組織細(xì)胞內(nèi)含有較高的內(nèi)源性堿性和酸性磷酸酶,例如人體和鼠類(lèi)、狗等動(dòng)物組織的肝、腎、腸,對(duì)IHC染色會(huì)產(chǎn)生一定的干擾,因此限制了它的應(yīng)用。AKP主要用于血涂片或涂片的白細(xì)胞抗原檢測(cè)。但是由于AKP的呈色反應(yīng)的敏感性要比HRP高23倍,顯色時(shí)間可從30min到48h,可與HRP組合進(jìn)行IHC的雙重或多重標(biāo)記。另外,內(nèi)源性堿性磷酸酶可以在底物緩沖液中加入左旋咪唑(1evamisole)和鎂離子(氯化鎂),或提高底物緩沖液的pH值,可以有效地消除內(nèi)源性堿性磷酸酶,使該酶應(yīng)用比例日趨增多。目前該酶已廣泛應(yīng)用于原位雜交檢測(cè)的顯色和雙重酶標(biāo)染色。(三)葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶(glucoseoxdase,GOD)以葡萄糖為底物,生成藍(lán)色不溶性沉淀。該終產(chǎn)物較穩(wěn)定,不溶于有機(jī)溶劑,故易保存,但因其分子質(zhì)量為150kDa,不能穿人細(xì)胞,影響了其應(yīng)用。另外,該酶的敏感性較低,主要是酶與底物反應(yīng)敏感性低。目前主要用于IHC的多重標(biāo)記。免疫酶組織化學(xué)技術(shù)的常用酶及其底物[詳細(xì)]
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2018-09-14 10:01
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等離子清洗機(jī)(電鏡專用)
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- 大鼠鐵蛋白(FE)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用方法檢測(cè)范圍:10ng/ml-450ng/ml使用目的:本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中鐵蛋白(FE)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠鐵蛋白(FE)水平。用純化的大鼠鐵蛋白(FE)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入鐵蛋白(FE),再與HRP標(biāo)記的鐵蛋白(FE)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鐵蛋白(FE)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠鐵蛋白(FE)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(800ng/ml)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說(shuō)明書(shū)1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。400ng/ml5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200ng/ml4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ng/ml3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ng/ml2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液25ng/ml1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié):計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-10-03 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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大鼠鐵蛋白(FE)試劑盒使用方法
- 大鼠鐵蛋白(FE)試劑盒使用方法本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T10ng/ml-450ng/ml使用目的:本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中鐵蛋白(FE)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠鐵蛋白(FE)水平。用純化的大鼠鐵蛋白(FE)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入鐵蛋白(FE),再與HRP標(biāo)記的鐵蛋白(FE)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鐵蛋白(FE)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠鐵蛋白(FE)濃度。[詳細(xì)]
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2018-12-30 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒
- 人鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-27 23:57
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