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牛乳鐵蛋白(LTF)檢測試劑盒
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2014-09-29 00:00 147閱讀次數(shù)
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牛乳鐵蛋白(LTF)檢測試劑盒
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- 大鼠鐵蛋白(FE)試劑盒使用方法本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T10ng/ml-450ng/ml使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中鐵蛋白(FE)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠鐵蛋白(FE)水平。用純化的大鼠鐵蛋白(FE)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入鐵蛋白(FE),再與HRP標記的鐵蛋白(FE)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鐵蛋白(FE)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠鐵蛋白(FE)濃度。[詳細]
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- 人(Human)乳鐵蛋白(LF)ELISA檢測試劑盒本試劑僅供研究使用標本:血清或血漿試驗原理:LF試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知LF濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將LF和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中LF的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標準品:8.0g/L1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進行稀稀空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型標準品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素標記的抗LF抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進行稀釋底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型自備材料1.蒸餾水。2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。3.振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。2.實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項1.試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。2.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。3.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6.洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。7.底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。8.加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。9.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準備1.標準品:標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:8.0g/L(6號標準品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。4.0g/L(5號標準品)100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液2.0g/L(4號標準品)100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液1.0g/L(3號標準品)100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液0.5g/L(2號標準品)100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液0.25g/L(1號標準品)100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液0g/L(空白對照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。操作步驟1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。9.在450nm波長處測定各孔的OD值。建議使用的實驗方案標準品濃度(g/L)A8.08.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B4.04.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C2.02.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D1.01.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E0.50.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F0.250.25樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品局限6號標準品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到極ng確的結(jié)果。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性:不與人其它細胞因子反應(yīng)。3.重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。結(jié)果判斷與分析1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應(yīng)的LF標準品濃度為橫坐標(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的LF含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度。3、檢測值范圍:0-8.0g/L4、敏感度:0.01g/L[詳細]
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2018-09-14 10:01
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