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壓力循環(huán)技術(shù)(PCT)為弗蘭克氏菌蛋白的研究提供方便

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2018-08-17 10:00 470閱讀次數(shù)

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Frankiaaregram-positive,filamentous,nitrogen-fixingactinobacteriathataresymbioticwithover200differentspeciesofplants.Frankiaproducethreecelltypes:vegetativehyphae,sporeslocatedinsporangia,andtheuniquelipid-envelopedcellularstructures,termedvesicles.Vesiclesareformedinsideplantcellnodules,orincultureundernitrogenlimitingconditions,andactasspecializedstructuresforthenitrogenfixationprocess.Thematurevesicleissurroundedbyanenvelopethatextendsdownthestalkofthevesiclepastthebasalseptum,whichseparatesthevesiclefromthehyphae.TechniqueshavebeendevelopedfortheisolationandurificationofintactvesiclesfromFrankiagrowninculture[1,2,3].Initialinvestigationsonthepropertiesofpurifiedvesicleshavefocusedonnitrogenmetabolism[3,4].Proteinextractionfromvesicleshashistoricallybeendifficultandasignificantbottlenecktoproteomicstudiesbecausevesiclesareresilientstructuresthataredifficulttodisrupt.ReliableandcomprehensiveproteomicmapsofFrankiahyphaeandvesiclescanonlybeassuredwhenproteinsareisolatedreproduciblyandinamannerinwhichtheyareaccuratelyrepresentedinthedownstreamanalysis.Forexample,2DGEcanbeanaccuraterepresentationofaproteomeonlyiftheentireproteinconstituencyofcellsisrecoveredduringthesamplepreparationprocess.WhileFrenchpresstreatmenteffectivelylyseshyphae,itfailstodisruptFrankiavesicles.PressureCyc領Technology(PCT)usedincombinationwithaspecializedlysisreagenteffectivelydisruptedpurifiedvesiclesenab領furtherinvestigationoftheproteomeofthevesicles.

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