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C-肽ELISA試劑盒

本文由 深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司 整理匯編

2018-11-14 10:00 385閱讀次數(shù)

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Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4C-肽ELISA試劑盒(德國DRG:EIA-1293)1、DRG公司C-肽ELISA試劑盒的臨床應(yīng)用1)接受了胰島素ZL的糖尿病患者剩余β-細(xì)胞的功能評(píng)價(jià)。2)I型糖尿病患者緩解階段的檢測(cè)與監(jiān)控。3)作為I型糖尿病(胰島素依賴性)和II型糖尿?。ǚ且葝u素依賴性)鑒別診斷的輔助工具。4)胰島素引起的假低血糖癥的診斷。5)輔助胰島素瘤的診斷。(胰島素YZ實(shí)驗(yàn))6)用于檢測(cè)糖尿病孕婦妊娠成功的預(yù)后指數(shù)。7)肝病患者胰島素分泌的評(píng)價(jià)。8)切除術(shù)的監(jiān)測(cè)。2、實(shí)驗(yàn)原理DRG公司C-肽ELISA試劑盒是以競(jìng)爭原理為基礎(chǔ)。樣品中存在的未知含量的C-肽和已知濃度的C-肽酶聯(lián)結(jié)物相互競(jìng)爭結(jié)合到小鼠抗C-肽抗血清的結(jié)合位點(diǎn)。再與包被在檢測(cè)孔上的抗小鼠抗體結(jié)合。沒有結(jié)合的酶復(fù)合物被沖洗下來。加入底物溶液后,樣本中的C-肽濃度和測(cè)得的光密度成反比例。3、試劑盒組成1)微孔反應(yīng)板,96(孔),包被孔中包被了抗小鼠抗體。2)酶聯(lián)結(jié)物,14ml。即用型,內(nèi)含C-肽生物素標(biāo)記物和穩(wěn)定緩沖液。3)酶復(fù)合物,14ml,即用型,內(nèi)含辣根過氧化物酶4)標(biāo)準(zhǔn)品系列(0-5),0-16ng/ml(具體濃度請(qǐng)見試劑瓶標(biāo)簽)。凍干粉,6支,用前加蒸餾水0.75mL。5)樣品稀釋液,3ml,即用型。6)抗血清:小鼠抗C-肽單克隆抗體,1支,7mL。7)底物液,TMB,14ml8)終止液,0.5M的H2SO4,14ml。9)濃縮冼滌液,40倍濃縮,30ml。4、實(shí)驗(yàn)所需器材但試劑盒不提供1)酶標(biāo)儀2)移液器,100;200和1000μl3)標(biāo)準(zhǔn)冰箱4)吸水紙5)去離子水5、貯存條件當(dāng)貯存在28℃下,未打開的試劑在有效期內(nèi)均有效。不要使用過期試劑。半標(biāo)準(zhǔn)品配制好后,所有剩余的標(biāo)準(zhǔn)品必須冷藏于28℃的環(huán)境下。要更長時(shí)間的貯存,可將重新配制好的標(biāo)準(zhǔn)品凍存于-20℃的環(huán)境下。C-肽生物素聯(lián)結(jié)物、酶復(fù)合物、底物溶液、洗滌液和零標(biāo)準(zhǔn)品必須冷藏于28℃的環(huán)境下。微孔反應(yīng)板也必須冷藏于28℃的環(huán)境下。一旦包裝袋拆開,必須將它重新密封好。6、樣本的采集和準(zhǔn)備血清:靜脈穿刺采集全血,待其凝血,在室溫下離心分離血清。未完全凝血前請(qǐng)勿離心,接受了抗凝劑ZL的病人樣品可能需要更長的凝血時(shí)間。樣本在2~8℃下能存儲(chǔ)24小時(shí),如果需要儲(chǔ)存更長時(shí)間則需要在20℃下凍存,并且只能凍融一次血漿:將全血采集到含有抗凝劑的離心管,采集后立即離心分離。樣本在2~8℃下能存儲(chǔ)24小時(shí),如果需要儲(chǔ)存更長時(shí)間則需要在20℃下凍存,并且只能凍融一次尿液:1)24小時(shí)內(nèi)排泄出的尿液總量應(yīng)收集和混合在單獨(dú)的容器中。2)記錄下尿液的總體積。3)充分混合樣品。離心樣本至澄清,在2~8℃下能儲(chǔ)存36小時(shí);如果要保存更長時(shí)間則需要在20℃下凍存,只能凍融一次。4)實(shí)驗(yàn)樣本用樣品稀釋液按1:20進(jìn)行稀釋。7、試劑準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品:用0.75ml蒸餾水溶解凍干標(biāo)準(zhǔn)品??梢员3植粍?dòng)直至完全融化,然后通過輕輕的倒轉(zhuǎn)充分混勻。重新標(biāo)配的標(biāo)準(zhǔn)品在2~8℃能保存3天,如果需要保存更長時(shí)間則需要放置在20℃下凍存洗滌液:將30ml的濃縮洗滌液用去離子水1170ml稀釋至1200ml。稀釋后的洗滌液可在室溫下穩(wěn)定存放2周。8、實(shí)驗(yàn)步驟1)將所需數(shù)目的板條置于板架上。2)將100μlC肽標(biāo)準(zhǔn)品,和樣本加到相應(yīng)的檢測(cè)孔中。3)各孔中加入50μl抗血清。4)各孔中加入100μl酶聯(lián)結(jié)物。5)充分振蕩混勻10秒鐘。6)室溫溫育60min。7)棄去孔內(nèi)反應(yīng)液。8)用洗滌液洗板3次(每孔400μl)。末次在吸水紙上拍干反應(yīng)板。9)在每微孔中加入100μl酶復(fù)合物。10)室溫溫育30分鐘。11)棄去孔中的反應(yīng)液。用洗滌液洗板3次(每孔400μl)。末次在吸水紙拍干反應(yīng)板。12)以相同的時(shí)間間隔在每一微孔中加入100μl底物液。13)室溫靜置20分鐘。14)以相同的時(shí)間間隔在每一微孔中加入100μl終止液以終止酶反應(yīng)。15)在加完終止液后10分鐘內(nèi)在450±10nm處測(cè)OD值。9、結(jié)果計(jì)算可以使用任何一個(gè)能在450±10nm處測(cè)定吸光度值的酶標(biāo)儀。按下述方法可求得每個(gè)樣本血清的C肽含量值。1)在線性或半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上,以每個(gè)參考標(biāo)準(zhǔn)品的平均吸光度值(Y)對(duì)它們相應(yīng)的濃度值(X,ng/ml)做一標(biāo)準(zhǔn)曲線。我們建議您用四參數(shù)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。2)利用每個(gè)血清樣本的平均吸光度值,通過從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取相應(yīng)的C-肽值,如有必要,還乘上初始樣本的稀釋倍數(shù),便可得知它們相應(yīng)的濃度值。利用DRG公司的ELIZAMAT3000和回歸程序可以讀出數(shù)值,并通過使用四參數(shù)邏輯功能或立體回歸得到計(jì)算機(jī)輔助的解釋。期望值:血清、尿液中C肽的正常范圍。建議每個(gè)實(shí)驗(yàn)室建立起自己的正常人C肽水平范圍。用DRG公司的C肽酶聯(lián)試劑盒檢測(cè)正常男性和女性所得到的正常范圍值羅列如下:樣本數(shù)平均值±2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差空腹12小時(shí)后(血清)600.5-3.2ng/ml尿液1-200g/day此外,用6個(gè)空腹12個(gè)小時(shí)后的正常成人做葡萄糖測(cè)定。在空腹12小時(shí)后,抽取血清。接受測(cè)定的人跟著服用50-60克的葡萄糖,在30-45分鐘后再抽取血清樣本進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)C-肽水平增加了200-600%。本譯文僅供參考,詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。ZGdu家總代理:深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司公司地址:深圳市蛇口沿山路10號(hào)6層郵政編碼:518067電話:0755-26814430,26680196傳真:0755-26814431免費(fèi)電話:800-8306296

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